PGC-1ɑ在多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢组织的表达变化

  目的  探讨多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）大鼠模型及肥胖PCOS大鼠模型卵巢组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α（PGC-1α）的表达,以及PCOS 发生的可能机制。  方法  SD大鼠30只,随机分为对照组、PCOS组及肥胖PCOS组,PCOS两组大鼠每日一次予脱氢表雄酮〔DHEA,60 mg/（kg·d）〕溶于0.2 mL注射用大豆油中皮下注射,共21 d,制备PCOS模型,肥胖PCOS模型组大鼠在DHEA制模基础上加入高脂饮食,每组大鼠各10只。造模前（0 d）和造模后第22天称体质量,取腹主动脉血检测血清睾酮（testosterone,T）水平,取大鼠卵巢组织,HE染色观察组织形态学改变,免疫组织化学染色和Western blot检测PGC-1ɑ蛋白表达。  结果   造模前3组大鼠体质量差异无统计学意义,造模后第22天,大鼠增加的体质量以及大鼠血清 T 质量浓度,均为肥胖PCOS组>PCOS组>对照组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。大鼠卵巢组织HE染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织镜下可见不同发育时期的卵泡和少量黄体,颗粒细胞排列多为4～6层;PCOS组及肥胖PCOS组大鼠卵巢组织中未成熟的小卵泡数量明显增加,颗粒细胞1～3层排列、较松散,部分卵泡闭锁,肥胖PCOS组大鼠卵巢闭锁卵泡直径增大,颗粒细胞层数减少,卵母细胞消失等现象更明显。免疫组化染色结果显示,对照组大鼠卵巢组织PGC-1ɑ蛋白阳性表达主要分布于卵丘及颗粒细胞。从PGC-1ɑ蛋白在卵巢组织的表达平均灰度均值来看,PCOS组（0.53±0.06）和肥胖PCOS组（0.36±0.03）均低于对照组（0.75±0.03）,差异有统计学意义（P<0.05）,肥胖PCOS组PGC-1ɑ表达低于PCOS组（P<0.01）。Western blot检测结果与免疫组化染色结果一致。  结论  PGC-1ɑ表达降低与高脂环境下卵巢颗粒细胞损伤有关。PGC-1ɑ在卵巢卵泡的颗粒细胞中表达降低可能是PCOS发生发展的重要原因。     

促排卵周期卵泡发育与胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体mRNA关系的研究

目的：探讨促排卵周期卵泡发育和体内胰岛样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ)及IGF－Ⅰ受体（IGF－ⅠR）mRNA的关系。方法：用ELISA法检测促排卵周期血清及卵泡液IGF－Ⅰ水平，并分析血清或卵泡液IGF－Ⅰ浓度与卵泡发育数关系。用RT－PCR法检测颗粒细胞IGF－ⅠmRNA表达量。结果：促排卵前，后血清及卵泡液IGF－Ⅰ浓度差异无显著性；低反应组（卵泡数≤3个）颗粒细胞IGF－ⅠmRNA明显低于中，高反应组（卵泡数分别为4－13个和≥14个）。结论：血清IGF－Ⅰ水平不能反映卵泡发育数，颗粒细胞IGF－Ⅰ mRNA的量可能影响促排卵周期卵巢对促排卵药物的反应。     

炔雌醇环丙孕酮对多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织形态影响的研究

目的观察炔雌醇环丙孕酮对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠卵巢组织形态和超微结构的影响。方法应用来曲唑造模法建立PCOS大鼠模型,随机分为正常对照组、PCOS模型组、炔雌醇环丙孕酮组,应用放射免疫法测定各组大鼠性激素水平、光镜观察大鼠卵巢组织形态改变、电子显微镜观察卵巢超微结构。结果①应用来曲唑干预21d后,PCOS模型大鼠血清黄体生成素(LH)、睾酮和卵泡刺激素(FSH)的水平明显高于正常对照组,而雌二醇和孕酮水平低于对照组(P<0.01),提示造模成功。药物干预后,与PCOS模型组比较,炔雌醇环丙孕酮组大鼠血清LH、FSH和睾酮水平下降,血清雌二醇、孕酮水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。②光镜观察:PCOS组大鼠卵巢组织呈多囊性改变,未见成熟卵泡及黄体生成;对照组卵巢组织可见不同发育阶段的卵泡及黄体的生成;炔雌醇环丙孕酮组较PCOS组大鼠有所改善,可见成熟卵泡及黄体的生成。③电镜观察:PCOS组比正常对照组大鼠卵巢电镜下见颗粒细胞出现凋亡形态特征,卵泡膜细胞较多,内可见脂滴明显增多;炔雌醇环丙孕酮组大鼠卵巢镜下颗粒细胞凋亡所特有的超微结构变化明显改善,可见正常的颗粒细胞和卵丘,线粒体增多,有大量滑面内质网;卵泡膜细胞凋亡明显增多。结论用来曲唑建立PCOS大鼠模型是一种较为理想的方法;炔雌醇环丙孕酮能够从形态学上改善PCOS大鼠的卵巢组织,恢复排卵功能。     

高血糖对小鼠卵母细胞Ca2+振荡和卵泡颗粒细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体表达的影响

目的 探讨高血糖对小鼠卵母细胞Ca2+振荡和卵泡颗粒细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的影响.方法 出生后20d ICR雌鼠,用链脲酶素建立急性高血糖模型;高血糖模型雌鼠及正常雌鼠注射10IU/只孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)超排卵,注射hCG后0h、2h、6h和10h取生发泡(GV)期卵母细胞,双光子激光扫描共焦显微镜检测GV期卵母细胞的Ca2+振荡;hCG注射后6h、10h取卵丘-卵母细胞复合体(COC),利用免疫荧光、Western blotting检测TRAIL的表达.结果 1.高血糖组卵母细胞Ca2+振荡频率高于正常对照组,于hCG注射后2h、6h差异显著(P<0.05);2.免疫荧光、Western blotting蛋白半定量检测显示,高血糖组颗粒细胞TRAIL表达量高于正常对照组,于hCG注射后6h、10h差异有显著性(P<0.05).结论 高血糖加快小鼠未成熟卵母细胞Ca2+振荡的频率;高血糖促进小鼠卵泡颗粒细胞TRAIL的表达.     

NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞脂肪代谢相关调控因子的调节作用

目的观察NR4A1对小鼠卵巢颗粒细胞中脂肪代谢相关调控因子脂联素受体2（Adipo—R2）、解偶联蛋白2（UCP2）、B类清道夫受体（CD36）的调节作用。方法分别构建NR4A1超表达腺病毒载体（AdCMV～NR4A1）及干涉腺病毒载体（AdHl－siRNA／NR4A1）。体外培养小鼠卵巢颗粒细胞,贴壁生长至90％时,分为病毒感染组、胰岛素（100nmol／L）与胰岛素增敏剂（10μmol／L）组和病毒＋胰岛素组。Trizol裂解细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测颗粒细胞中Adipo—R2,UCP2,CD36的mRNA表达水平。结果在小鼠卵巢颗粒细胞中超表达NR4A1能够促进Adipo—R2,UCP2,CD36基因的转录（P〈O．05）,RNA干扰NR4AI后则可以抑制以上基因的表达（P〈0．05）;胰岛素可以促进UCP2,CD36基因的表达（P〈O．05）,而对Adipo—R2的作用不明显;另外胰岛素增敏剂曲格列酮也能够促进Adipo—R2,UCP2,CD36的表达（P〈0．05）;RNA干扰NR4A124h后,再向细胞中加入生理剂量（100nmol／L）胰岛素30rain后Adipo—R2,UCP2,CD36的表达水平与单独干涉组比均可逆转升高（P〈O．05）,其中UCP2的表达水平可升高到胰岛素组同样的水平,但Adipo—R2,CD36的逆转升高水平并没有达到仅加入胰岛素时的升高水平（P〈O．05）。结论NR4A1对Adipo—R2,UCP2,CD36具有正向调节作用,同时与胰岛素或胰岛素增敏剂可能有协同调节作用,进而发挥对脂肪代谢的调控。     

短时受精不同脱颗粒细胞方式对体外受精结局的影响

目的探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗中几种短时受精脱颗粒细胞方式对胚胎质量及临床结局的影响。方法将261个IVF-ET周期根据脱颗粒细胞时间分为：短时受精后18小时脱颗粒细胞组（A组）94个周期、短时受精后5h脱颗粒细胞组（B组）95个周期和短时受精5h后部分（1/3-1/2）脱颗粒细胞组（C组）72个周期。分别比较三组的受精率、多精受精率、卵裂率、优胚率、胚胎利用率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果三组的受精率、正常受精率、多精受精率、卵裂率、临床妊娠率和流产率差异无统计学意义（P〉0.05）,A组的优胚率、胚胎利用率和胚胎种植率显著高于B组（P〈0.05）。结论短时受精后即刻剥除部分卵子颗粒细胞观察第二极体,在确保受精的情况下剩余卵母细胞保留自体卵周颗粒细胞共培养,可以提高常规IVF的胚胎质量,从而提高常规IVF总的临床妊娠率和胚胎种植率。     

GnRH—a替代HCG诱发排卵的研究现状

卵细胞和它周围的卵丘颗粒细胞一起排出的过程称排卵。排卵前,由于成熟的卵泡分泌的雌激素高峰对下丘脑产生正反馈作用,下丘脑大量释放GnRH,刺激垂体释放促性腺激素,出现LH／FSH峰。LH峰使卵母细胞重新启动减数分裂进程,初级卵母细胞成熟为次级卵母细胞,在LH峰作用下排卵前卵泡黄素化,产生少量孕酮,LH／FSH排卵峰与孕酮协同作用,激活卵泡液内蛋白溶酶活性,溶解卵泡壁隆起尖端部分,形成排卵孔,从而完成排卵过程。排卵障碍占女性不孕因素的25％,     

芹菜素对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡影响

目的 探讨芹菜素(apigenin,Api)对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 选情前期成年雌性SD大鼠20只,取卵巢颗粒细胞进行原代细菌培养,贴壁后随机分为4组(对照组、Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组),加入处理因素.培养结束后,收集各组培养卵巢颗粒细胞,经苏木精-伊红染色和吖啶橙染色观察颗粒细胞形态,经MTT法及流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡率,观察Api对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.结果 MTT法检测对照组,Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组A值分别为(0.87±0.059)、(0.29±0.057)(0.49±0.03)、(0.63±0.035);实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),提示实验组颗粒细胞数量减少,出现凋亡细胞;流式细胞仪检测对月强组、Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组的颗粒细胞凋亡率分别为(3.63±0.37)%、(36.37±2.28)%、(34.67±1.96)%、(30.92±1.65)%,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),提示实验组颗粒细胞凋亡率明显增高.结论 Api能抑制卵巢颗粒细胞的增殖,并促进其凋亡.     

抑制素受体的研究进展

有关抑制素(inhibin)的研究进行了近八十年的时间,但进展十分缓慢,中间一段时间几乎停止,关键在于它的作用机理(受体的研究)没有弄清晰,但随着澳大利亚和美国等,把抑制素A(inhibin-A)引用到唐氏征筛查中,以增加唐氏征     

中期因子与卵泡发育的研究进展

中期因子(midkine)属于肝素结合生长因子家族中的新成员,是一种强有力的刺激细胞增殖的调节因子,表达于卵泡颗粒细胞等组织,具有抑制卵丘颗粒细胞凋亡等广泛的生物学作用.在卵泡发育过程中midkine能促进卵母细胞的发育成熟,特别是对细胞质的成熟有着重要的作用,能够提高其受精率、胚胎卵裂率和囊胚率.