建立非均衡竞争叶酸定量测定的化学发光免疫分析法

目的 制备抗人叶酸(FA)抗血清并应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立可常规应用的定量检测血清FA的化学发光免疫分析(CLIA)法.方法 FITC-FA类似物、FA抗体-HRP依次加入包被有抗FITC抗体的化学发光板,形成FITC抗体-FITC-FA类似物-FA抗体-HRP的免疫反应复合物;并进行方法学评价,同时与非FITC检测系统及罗氏化学发光免疫分析系统检测结果进行比较.结果 成功制备FA抗血清并建立基于FITC系统的非均衡竞争CLIA;经方法学评价,自研法的线性相关系数绝对值大于0.990 0,灵敏度1.21 nmol/L,线性范围1.21～38.80 nmol/L,批内变异系数小于5％,自研法定量检测性能优于非FITC系统;与罗氏检测系统结果有较好相关性(R=0.908 1).结论 建立的非均衡竞争定量检测血清FA的CLIA法,具有良好的检测灵敏度与特异性,可应用于常规检测.     

结核分枝杆菌EIS基因抑制人肺腺癌A549细胞自噬

 目的 构建结核分枝杆菌EIS基因表达质粒,探讨其对人肺腺癌A549细胞自噬的影响。方法 采用PCR技术扩增EIS基因片段并插入空载质粒pcDNA3.1-3flag中,双酶切、测序鉴定克隆质粒的正确性;将重组质粒与对照空载质粒分别与自噬体荧光表达质粒GFP-LC3共转染细胞并以自噬诱导剂雷帕霉素处理,荧光显微镜下观察自噬荧光并计数,Western blot检测EIS蛋白及自噬蛋白LC3II/I的表达水平。结果 成功构建EIS基因重组表达质粒PcDNA3.1-EIS-3flag,该质粒共转染细胞组自噬荧光小点较对照组明显减少（P<0.05）,重组质粒表达42ku看到蛋白并可抑制自噬蛋白表达水平。结论 结核分枝杆菌EIS基因可抑制A549细胞自噬的形成,其抑制作用与结核分枝杆菌持留性相关。     

preS1分子连接体转运siHBX抑制HepG2-HBX细胞株内HBX表达的实验研究

目的探讨应用preS1分子连接体作为siRNA转运载体对HepG2-HBX细胞株中稳定表达的乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)的抑制效果及生物学效应。方法构建HepG2-HBX稳定表达细胞株;化学合成pres1分子连接体及HBX特异性siRNA序列(siHBX);pres1分子连接体分别与肝细胞系及siRNA进行结合能力试验,然后以preS1分子连接体作为转运载体转染siHBX入HepG2-HBX后经实时荧光RT-PCR及Western Blot检测siHBX对HBX基因的抑制效果。结果成功构建了稳定表达HBX基因的HepG2-HBX细胞株,preS1分子连接体能够与siRNA进行有效结合,同时可以携带siRNA进入肝细胞内高效抑制HepG2-HBX细胞株内HBX的表达。与空白组相比,阴性对照组抑制率为(11.94±6.3)%,而阳性对照组(脂质体)及实验组(preS1分子连接体)的抑制率分别为(85.24±2.6)%和(77.80±6.10)%,实验组与空白组及阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 preS1分子连接体可作为一种新型siRNA转运载体,携带siHBX进入肝癌细胞内发挥RNA干扰机制,为乙型肝炎病毒相关性肝脏疾病的治疗提供了新的途径。     

乙型肝炎病毒X蛋白稳定表达株的构建及沉默效果观察

目的 构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)基因的HepG2-HBX细胞系,观察小分子干扰RNA(siRNA)对HBX基因的特异性抑制效果.方法 用脂质体将含有HBX序列的真核表达质粒pCDNA3.1(+)/HBX-Flag转染人HepG2细胞系,通过G418筛选后,分别经RT-PCR和免疫组化对HBX的表达进行验证...     

野生型肺炎链球菌溶血素通过PI3K-I/Akt/mTOR途径诱导A549细胞自噬

目的：研究肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,Sp）诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。方法：常规培养人肺上皮A549细胞与野生型Sp;将GFP-LC3真核载体转染A549细胞,分为实验组（Sp,MOI=30∶1）、阴性对照组[渥曼青霉素（wortmannin,WT）,2 μmol/L 2 h,自噬抑制剂]、阳性对照组[雷帕霉素（rapamycin,Rapa）,1 mmol/L 10 h,mTOR抑制剂]和参照组（WT和Sp共同处理）,各组处理时间均为1、2、3和4 h;荧光显微镜观察各组自噬点形成,透射电镜观察各组细胞自噬体结构,Western blot检测各组微管相关蛋白轻链-Ⅰ/Ⅱ（microtuble-associated protein light chain 3-Ⅰ/Ⅱ,LC3-Ⅰ/Ⅱ）、磷酸化UNC-51-K激酶1（phosphorylated UNC-51-like kinase1,P-ULK1）和螯体1（sequestosome 1,P62）的表达;将溶血素表达载体RFP-PLY（red fluorescent protein-pneumolysin）、GFP-LC3或（和）RFP-PLY转染/共转染A549细胞,Western blot检测各组磷酸肌醇3-激酶-Ⅰ/Ⅲ（phosphoinositide 3-kinase-Ⅰ/Ⅲ,PI3K-Ⅰ/Ⅲ）、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、Beclin-1蛋白（Beclin 1 protein,Be－clin-1）和哺乳动物雷帕霉素靶（mammalian target of rapamycin,mTOR）的表达。结果：处理A549细胞3 h后,与阴性对照组（WT）相比,Sp感染后,自噬点明显增多（t=41.313,P=0.001）,电镜观察到典型的自噬体结构,LC3-Ⅱ蛋白表达明显上调（t=121.592,P=0.000）;A549细胞转染RFP-PLY处理3 h后,与阴性对照组（WT）相比,Sp感染同样观察到明显的自噬现象,PI3K-I、Akt蛋白和mTOR表达下调（tPI3K-I=16.544,PPI3K-I= 0.004;tAkt=22.679,PAkt=0.002;tmTOR=19.503,PmTOR=0.003）,而PI3K-Ⅲ和Beclin-1水平无明显差异（tPI3K-Ⅲ=3.572,PPI3K-Ⅲ=0.070;tBeclin-1=0.799,PBeclin-1=0.508）。结论：野生型Sp诱导A549细胞自噬可能通过PI3K-I/Akt/mTOR信号途径。     

门诊和急诊检验实习生带教工作的探讨

<正>随着医学事业的飞速发展,检验医学已经成为临床医学中不可或缺的一部分。它在临床疾病的诊断、治疗、疗效评价、预后判断以及正常人群健康评估等方面发挥着越来越重要的作用[1]。门、急诊检验作为检验医学的一个重要组成部分,其特点就是要快速、准确、及时的向医生和患者提供检测报告,尽量缩短医生诊疗及患者就医时间。这就需要大批理论知识全面,操作技术娴熟,临床思维活跃,处理问题灵活的复合型医学检验人才。临床实习作为医学教育特有的阶段,是医学检验专业     

丙型肝炎病毒5''非翻译区DNA序列在HepG2细胞中的启动子活性

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)基因组5'非翻译区(5'UTR)DNA序列在HepG2细胞中的启动子活性,以了解HCV的复制调控机制.方法分别构建HCV基因组5'UTR DNA正反向序列驱动虫荧光素酶基因表达的质粒5'UTR- Luc(+)/(-)和5'UTR DNA序列驱动绿色荧光蛋白基因表达的质粒5'UTR -EGFP(+)/(-),分别转染HepG2细胞,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平,逆转录聚合酶链反应检测虫荧光素酶基因m R N A水平,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白基因的表达水平,并与相应对照作比较,来证实H CV基因组5'UTR DNA序列的启动子活性.结果 5'UTR- LUc(+)有明显的虫荧光素酶表达,但比pGL3 control表达水平低(Luc/R为0.690 ± 0.086,Luc/RL为4.210±0.340),而5'UTR-Luc(-)和pGL3 enhancer无明显虫荧光素酶表达(Luc/RL分别为0.095±0.008和0.044±0.00 5);逆转录聚合酶链反应结果与之相符,5'UTR- Luc(+)检测到虫荧光素酶基因mRNA,而5'UTRLuc(-)则未检测到.5'UTR- EGFP(+)观察到较强绿色荧光,而5'UTR -EGFP(-)无荧光表达.结论 HCV基因组5'UTR DNA序列具有明显的启动子活性,能启动下游基因的表达,在HCV基因组复制过程中有重要作用.     

多重耐药鲍曼不动杆菌感染危险因素分析

目的：了解本地区多重耐药鲍曼不动杆菌感染的危险因素及耐药状况。方法回顾性分析80例多重耐药鲍曼不动杆菌患者与48例非多重耐药鲍曼不动杆菌感染患者的基本资料,以及菌株药敏试验检测结果;采用Logistic回归分析方法分析多重耐药菌株感染的独立危险因素。结果多重耐药鲍曼不动杆菌感染的独立危险因素包括入住重症监护病房（IC U ）、侵入性操作、两种及其以上抗菌药物序贯使用或联合使用。多重耐药鲍曼不动杆菌对左氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、替卡西林/克拉维酸的耐药率均大于60％,对除上述4种药物以外抗菌药物的耐药率均超过90％。结论多重耐药鲍曼不动杆菌感染的独立危险因素包括入住IC U、侵入性操作、两种及其以上抗菌药物序贯使用或联合使用。严格进行医院环境的消毒和医院感染的监测,合理使用抗菌药物,是控制多重耐药鲍曼不动杆菌感染的重要手段。     

联合应用HE4和ROMA诊断卵巢癌的研究进展

卵巢癌的早期表现与卵巢良性病变的临床表现相似,导致卵巢癌确诊时,患者有可能已处于卵巢癌晚期。由于卵巢癌患者的治疗时机极易被延误,导致卵巢癌在各种女性肿瘤的病死率中高居第五位。卵巢癌的治疗技术已有一定程度的提高,但仍无法降低其病死率。目前临床主要通过血清 CA125检测和妇科超声检查诊断卵巢癌,但 CA125在灵敏度和特异度方面均存在一定局限性。多种恶性肿瘤（如子宫内膜癌、宫颈癌、肺癌等）及良性疾病（如肾衰、肝功能衰竭、渗出液、卵巢囊肿、子宫肌瘤、子宫内膜异位症等）均可导致血清 CA125水平升高。人附睾蛋白4（HE4）是具有卵巢癌早期诊断性能的血清标志物。本文对 H E4作为卵巢癌的肿瘤标志物的相关研究及进展进行了综述。     

短发夹状双链RNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达

目的研究载体表达的短发夹状双链RNA（shRNA）对丙型肝炎病毒（HCV）IRES介导的基因表达的特异性抑制作用。方法构建HCV IRES调控的绿色荧光蛋白表达载体（pIRES—GFP）和虫荧光索酶表达载体（p5′ UTR—Luc），以及针对HCV IRES的shRNA表达载体（pshRNA-HCV）。共转染HepG2细胞，于转染后24、48、72h观察绿色荧光的强弱，用Western blot检测绿色荧光蛋白的表达，半定量逆转录聚合酶链反应法检测GFP的mRNA水平。双荧光索酶系统检测虫荧光索酶活性。结果pshRNA-HCV作用组绿色荧光强度明显弱于未干扰组，GFP蛋白表达量及虫荧光素酶活性降低60％～70％，半定量逆转录聚合酶链反应显示pshRNA-HCV导致了GFP基因mRNA水平的降低。结论针对HCV IRES的shRNA能够显著和特异地抑制该区域调控的蛋白表达水平及mRNA水平，该研究结果为利用RNA干扰技术治疗HCV感染进行了初步探索。