青霉素结合蛋白2a胶乳凝集试验快速检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (Methicillinresistantcoagulase negativeStaphylococcus,MRCoNS)是医院感染的重要病原菌 ,青霉素等 β 内酰胺类抗生素对之临床无效。MRCoNS耐 β 内酰胺类抗生素的主要机制是产生低亲和力的新型青霉素结合蛋白PBP2a ,该蛋白由mecA基因编码。本文对PBP2a筛选法[1] 与PCR检测mecA基因的方法进行比较 ,评价其可靠性和临床应用价值 ,以寻找适合医院实验室检测MRCoNS的简单而可靠的方法。1　材料与方法1 .1菌株　 1 1 9株凝固酶阴性葡萄球菌为我院 2 0 0 1年8月至 2 0 0 2年 5月临床分离株 ,主要源…     

重复序列片段基因扩增用于阴沟肠杆菌的分型研究

目的 用重复序列片段基因扩增方法对阴沟肠杆菌进行分型研究。方法 选用肠杆菌科基因间的重复序列(ERIC)进行扩增,对阴沟肠杆菌进行分型研究,并与其抗生素耐药特征进行比较。结果 阴沟肠杆菌分成6种不同基因型,不同基因型有不同的耐药特征。结论 本法简便易行,重复性好,适合于临床分离的病原菌的分型及医院感染的分子流行病学研究。     

丙型肝炎病毒感染者血清自身抗体的研究进展

正丙型肝炎是全球流行的传染性疾病,起病隐匿,由丙型肝炎病毒(HCV)感染所致,主要传播途径包括血液传播(输血及血液制品)、公用注射针头及注射器、母婴垂直传播。国内外研究发现,HCV患者的血清中存在低滴度的抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、抗可提取核     

临床微生物带教实践总结

临床微生物学是一门对专业知识和实践技能都具有较高要求的专业学科。如何提高微生物教学质量和效果，需要带教教师在教学实践中不断总结、归纳适合于自己的教学方法。本微生物室通过几年的教学实践，总结了自己独有的一套思路及方法。     

磷酸化Y盒结合蛋白1的抗体制备及其辅助诊断原发性肝癌合并肺转移的临床价值

目的 制备Y盒结合蛋白1磷酸化抗体(pAb/YB-1S102);探讨腹水中磷酸化YB-1 (pYB-1)作为标志物辅助诊断原发性肝癌合并肺转移的临床价值. 方法 通过生物信息学预测并化学合成102位丝氨酸磷酸化YB-1多肽,耦联载体蛋白后免疫家兔;protein A亲和层析法纯化抗血清pAb/YB-1S102,并验证其特异性.收集109例患者腹水并富集腹水中pYB-1,其中原发性肝细胞癌(HCC) 36例,HCC合并肺转移44例,肝硬化29例;采用Western blot定性检测腹水中pYB-1,并对定性结果进行回归判别与受试者工作特征(ROC)曲线分析.计数资料采用x2检验.结果 酶联免疫吸附法与十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示制备的pAb/YB-1S102效价≥1∶1×106,且纯度较高.Western blot结果证实pAb/YB-1S102能特异性识别内源性pYB-1S102.肝硬化患者腹水中未检出pYB-1S102,HCC合并肺转移患者腹水pYB-1S102阳性率(77.3％)显著高于HCC(30.6％,x2=11.69,P＜0.01);回归分析与ROC曲线结果表明pYB-1S102辅助诊断HCC合并肺转移的灵敏度为77.3％,符合率为73.8％(x2=17.56,P＜0.01). 结论 成功制备可识别内源性pYB-1的抗体pAb/YB-1102;通过定性检测腹水pYB-1,可鉴别诊断HCC合并肺转移.     

多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的检测

目的了解多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的分布情况。方法收集80株多重耐药鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）检测多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、SIM、IMP、VIM、GIM、SPM。结果 80株多重耐药鲍氏不动杆菌检出耐药基因OXA-23[49（61.3%）]、OXA-51[73（91.3%）]、OXA-58[7（8.8%）]、OXA-24[1（1.3%）]、IMP[17（21.3%）]及VIM[2（2.5%）],未检测出GIM、SIM、SPM基因。结论 IMP、OXA、VIM是多重耐药鲍氏不动杆菌携带的主要基因类型。     

一种乙型肝炎病毒转录后调节基序的体外合成方法

目的 探索T7 RNA聚合酶体外转录方法制备乙型肝炎病毒（HBV）转录后调节基序（HPRE）。方法 用聚合酶链反应法从含HBV全基因组的模板中扩增HBV HPRE基因，重组人pGEM—11zf载体，并用T7 RNA聚合酶对其进行体外转录。结果 成功地构建含HPRE基因的重组质粒，并成功地用体外转录方法制备了高纯度的HPRE。结论 T7 RNA聚合酶体外转录方法可用于制备高纯度的HPRE，为以后的深入研究奠定了基础。     

丙型肝炎病毒5′非翻译区 DNA 序列在 HepG2细胞中的启动子活性

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)基因组5′非翻译区(5′UTR)DNA 序列在 HepG2细胞中 的启动子活性，以了解 HCV 的复制调控机制。方法 分别构建 HCV 基因组5′UTR DNA 正反向序列驱动 虫荧光素酶基因表达的质粒5′UTR-Luc(+)/(-)和5′UTR DNA 序列驱动绿色荧光蛋白基因表达的质粒5′ UTR-EGFP(+)/(-)，分别转染 HepG2细胞，用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平，逆转录 聚合酶链反应检测虫荧光素酶基因 m R N A 水平，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白基因的表达水平，并与相应 对照作比较，来证实 HCV 基因组5′UTR DNA 序列的启动子活性。结果 5′UTR-Luc(+)有明显的虫 荧光素酶表达，但比 pGL3 control 表达水平低(Luc/R为0．690±0．086，Luc/RL 为4．210±0．340)，而5 ′UTR-Luc(-)和 pGL3 enhancer 无明显虫荧光素酶表达(Luc/RL 分别为0．095±0．008和0．044±0． 005)；逆转录聚合酶链反应结果与之相符，5′UTR-Luc(+)检测到虫荧光素酶基因 mRNA，而5′UTR- Luc(-)则未检测到。5′UTR-EGFP(+)观察到较强绿色荧光，而5′UTR-EGFP(-)无荧光表达。 结论 HCV 基因组5′U TR DNA 序列具有明显的启动子活性，能启动下游基因的表达，在 HCV 基因组复 制过程中有重要作用。     

人BRIT1基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义分析

目的检测宫颈癌组织和配对的宫颈非癌组织中的BRIT1表达情况,比较两者之间的表达差异。方法分别应用实时荧光PCR(RT-PCR)、免疫组化技术检测宫颈癌组织及其配对的宫颈非癌组织中BRIT1 mRNA和蛋白的表达水平,分析BRIT1蛋白表达水平与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤类型、肿瘤的病理分级和临床分期之间的关系。结果 RT-PCR结果揭示宫颈癌组织中BRIT1mRNA的表达水平低于配对的宫颈非癌组织,差异有统计学意义(P0.05);免疫组化技术结果揭示63例标本中的44例(69.8%)宫颈癌组织BRIT1蛋白表达水平低于配对的宫颈非癌组织,差异有统计学意义(P0.05);在高级的病理分级和临床分期中,BRIT1蛋白的表达减少更为明显。结论 BRIT1在宫颈癌癌组织和非癌组织中的表达差异提示BRIT1可能在宫颈癌的发生、发展中具有一定的作用。     

抗O139群霍乱弧菌单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的制备抗O139群霍乱弧菌(vibriocholeraeO139)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为进一步研制检测O139群霍乱弧菌的胶体金免疫试纸条创造条件。方法以灭活的O139群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗O139群霍乱弧菌的mAb。采用间接ELISA方法和Westernblot对mAb的特异性进行鉴定。采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(O4D7和O4D10),其Ig亚类分别为IgG2b和IgG3;腹水mAb的效价均为1∶107;mAbO4D7的相对亲和力在1×105以上,O4D10在1×104以上。ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位。结论成功地制备抗O139群霍乱弧菌的两株mAb,为建立快速特异检测O139群霍乱弧菌感染的试验方法提供了有力的工具。