丙型肝炎病毒核心蛋白对Dicer切割功能的影响

目的 探讨核心蛋白与Dicer的相互作用及其对Dicer功能的影响.方法 构建丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达质粒,采用免疫荧光染色和Western blot检测核心蛋白的表达,Western blot检测核心蛋白对细胞内Dicer表达的影响,免疫共沉淀技术检测真核细胞内核心蛋白与Dicer的相互作用.体外转录合成dsRNA,检测核心蛋白对Dicer切割dsRNA作用的影响.结果 在细胞内,核心蛋白能够明显恢复被shRNA抑制的虫荧光素酶基因的表达(P＜0.05),而对siRNA引发的RNAi无拮抗作用.在真核细胞内,加入核心蛋白后,Dicer的表达量无明显改变,并能检测到两者相互结合.在体外抑制实验中,重组表达的Dicer能切割dsRNA产生siRNA;核心蛋白加入后,dsRNA的切割受到抑制.结论 核心蛋白在真核细胞内可以结合Dicer,并通过抑制Dicer对dsRNA的切割作用,抑制RNA干扰作用.     

临床病原菌回顾性调查分析

目的了解进入90年代医院感染病原菌学分布变化。方法应用回顾性调查分析方法,对我院1990年1月～1997年12月间,临床标本中分离的2619株病原菌进行统计分析。结果8年间感染病原菌总体分布已发生显著性变化(χ2=152.16,P<0.05);革兰阳性球菌、真菌比例呈上升趋势,革兰阴性杆菌比例呈下降趋势。结论临床感染的主要病原菌为革兰阴性杆菌,大肠埃希菌占绝对优势;革兰阳性致病菌以金黄色葡萄球菌为主。     

维生素E脂质体纳米颗粒转运siRNA抑制丙型肝炎病毒核心蛋白表达的实验研究

目的 研究携带针对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)RNA的小干扰RNA(siRNA)的维生素E(Vitamin E)脂质体纳米颗粒在体外靶向抑制HCV复制的作用.方法采取“薄膜水化法”制备Vitamin E脂质体纳米颗粒,应用激光粒度分析仪测量纳米颗粒VE-DC/siRNA的颗粒大小及zeta电位,应用透射电子显微镜观察VE-DC形态及分散性.以Huh7.5.1细胞株作为载体.CCK-8法检测纳米颗粒的细胞毒性,琼脂糖凝胶电泳检测纳米颗粒携带siRNA的血清稳定性,蛋白印迹技术和免疫荧光技术检测该siRNA纳米颗粒的转染效率及对HCV的抑制作用.结果 Vitamin E脂质体纳米颗粒形态呈球形,粒度分布为(125.5-9.0)nm,zeta电位为(39.1±4.8)mV,分散均一.相较同浓度商品化脂质体,VE-DC/siRNA对细胞的毒性相对较小.血清稳定性实验显示,VE-DC/siRNA在24 h后siRNA无降解,较裸siRNA稳定性显著提高.携带siRNA的Vitamin E脂质体纳米颗粒可以较高效率进入Huh7.5.1细胞内,并抑制HCV核心蛋白的表达.结论 Vitamin E脂质体纳米颗粒可以转运siRNA至Huh7.5.1细胞,并抑制HCV核心蛋白的表达.     

下呼吸道感染的铜绿假单胞菌耐药性与基因型分析

目的了解我院2002年2月～2004年3月从肺炎患者痰标本中分离出来的90株铜绿假单胞菌的流行病学特征及耐药性,监测其流行趋势,给临床用药提供依据.方法对90株PA进行药敏试验,并采用优化反应体系的随机多态DNA分型 (RAPD)法进行流行病原学研究.结果 90株PA菌株被基因分型分为41型;抗生素分型分为24型;医院感染菌株对12种抗生素的耐药率明显高于社区感染菌株.结论基因分型法显示ICU病房有多重耐药菌株PA株爆发流行现象;社区感染患者用阿米卡星或哌拉西林治疗,医院感染患者可用亚安培南或头孢他啶加阿米卡星联合治疗;加强细菌实验室的监测工作,严格病区的消毒制度,是降低PA医院感染的有力措施.     

临床标本中病原菌8年间回顾性调查分析

感染性疾病在临床上是最常见的疾病之一，特别是医院感染及某些疾病的并发症，严重威胁着病人的生命安全。因此，明确引起感染性疾病病原菌种类变化，对临床上能及时准确诊断，特别是病原菌的分离培养、抗菌药物的选择及预后都具有重要的意义。为此，我们总结分析了近８年的细菌学资料，对引起感染性疾病的病原菌作了统计分析，现报告如下：１材料与方法１．１材料１．１．１病原菌来源：均来自我院１９９０年１月～１９９７年１２月间应诊病人各类送检标本。包括（血液、小便、大便、痰及咽拭子、各种穿刺液、分泌物及脓液）。１．１．２质…     

病毒RNA干扰抑制因子研究进展

RNA干扰是真核生物体内普遍存在的一种高度保守的基因转录后水平的调控方式,它通过核酸序列特异性作用来抑制靶基因的表达.生物细胞利用RNA干扰机制来防御病毒的侵染,而许多病毒也能够产生RNA干扰抑制因子来对抗这种防御反应,这些抑制因子对宿主细胞有多种效应,往往同时是病毒重要的致病因子.迄今已从动植物病毒中鉴定出了多种RNA干扰抑制因子,抑制因子的鉴定和作用机理研究已成为病毒与宿主相互关系研究中的一个热点.本文对RNA干扰在动植物抗病毒中的作用、病毒RNA干扰抑制因子的发现、作用机理、鉴定方法以及研究意义等方面的最新进展进行了综述.     

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定

【摘　要】目的：以纯化的有高度特异性的IXiao3G6单抗为靶分子,对噬菌体随机7肽库进行淘筛,以期筛选到与O1群小川型霍乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法：运用噬菌体随机7肽库技术,以纯化的IXiao3G6单抗为靶蛋白,进行噬菌体随机肽库 3 轮筛选,以双抗夹心ELISA和竞争抑制实验分析获得的噬菌体短肽与筛选配基的结合能力及特异性,并进行阳性克隆序列测定和同源性分析。结果：3轮筛选后,阳性噬菌体得到有效富集,夹心ELISA检测随机挑取的25个噬菌体克隆,有22个噬菌体克隆为阳性,测序表明其中20个阳性克隆的氨基酸序列完全一致,均为APAIPAS。对该序列同源性分析,未发现有相同的已知序列。竞争抑制实验表明,O1群小川型霍乱弧菌脂多糖（lipopo-lysaccharide,LPS）能很好地抑制阳性克隆与IXiao3G6 McAb的结合,抑制程度随LPS浓度的升高而增加,而对照细菌的LPS则不具有相应的抑制作用,进一步提示噬菌体克隆展示肽模拟了O1群小川型霍乱弧菌LPS抗原表位。结论：筛选到模拟O1群小川型霍乱弧菌LPS的抗原表位的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的开发与设计提供了实验依据。     

自噬相关基因ATG4A rs807185位点单核苷酸多态性与重庆地区人群肺癌的相关性研究

目的研究自噬相关基因ATG4A rs807185位点单核苷酸多态性与重庆地区人群肺癌风险的相关性。方法收集225例癌症患者(病例组)和257例健康对照者(对照组)的血液标本及相关病历资料,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法对自噬相关基因ATG4A的rs807185位点进行基因分型,比较病例组和对照组的基因型差异;按照性别、年龄、吸烟史、饮酒史及肺癌病理分型等因素进行分层分析。结果对照组rs807185位点的突变A等位基因频率高于病例组(37.7%vs.24.9%,P=0.006),校正优势比为1.989(95%置信区间:1.223~3.236)。与野生T等位基因相比,ATG4A基因rs807185位点的突变A等位基因与肺癌风险降低相关(校正优势比=0.605,95%置信区间:0.456~0.803,P<0.001)。分层分析表明,在不同年龄、吸烟、饮酒及病理型别中,rs807185位点的纯合突变基因型(AA)均可降低肺癌的患病风险。结论在重庆地区人群中,ATG4A基因rs807185突变体与肺癌风险的降低显著相关,表明ATG4A基因rs807185AA突变可能是肺癌的保护因子。