泌尿道感染菌群分布及耐药性分析

目的:研究我院肾内科2001～2002年2年期间从临床尿标本病原菌(489株)的菌群分布和药敏情况,为合理应用抗生素提供依据.方法:细菌按常规方法分离鉴定,药敏采用K-B法.结果:489株菌中革兰氏阴性杆菌307株,占62.5%,主要以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆菌为常见;革兰氏阳性球菌182株,占37 5%,主要以肠球菌和血浆凝固酶阴性的葡萄球菌为主.药敏试验表明:革兰氏阴性杆菌共同敏感的药物是亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦;革兰氏阳性球菌共同敏感的药物是万古霉素、替考拉宁.结论:泌尿道感染以大肠埃希菌和肠球菌为主,定期系统的细菌耐药监测对临床用药具有重要意义.     

CSF-DKK1作为标志物在神经母细胞瘤诊断与治疗监测中的临床价值

目的定量检测神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)患者脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中Dickkopf相关蛋白1(DKK1),探讨其作为诊断NB及疗效评估标志物的临床价值。方法实验组48例:NB患者经CT、骨髓检查确诊,年龄5个月至11岁,包括男性25例,女性23例;Evans分期:Ⅰ期5例,Ⅱ期20例,Ⅲ期15例,Ⅳ期8例。对照组50例:神经系统良性肿瘤25例,年龄5个月至65岁,包括男性13例,女性12例;化脓性脑膜炎10例,年龄5个月至6岁,包括男性4例,女性6例;脑外伤15例,年龄2～45岁,包括男性10例,女性5例。NB患者分别于治疗前、化疗结束后3 d及化疗联合手术治疗后3 d采集CSF样本各1次。ELISA法定量检测CSF中DKK1水平并做ROC曲线分析,对NB患者治疗后(化疗及化疗联合手术治疗)的CSF-DKK1水平进行随访检测。结果与对照组[(57.0±13.7)pg/mL]相比,NB患者CSF-DKK1水平显著增高[(88.7±22.9)pg/mL,P<0.01];ROC曲线分析表明,CSF-DKK1诊断NB(Cut-off=65.0 pg/mL)的灵敏度为83%,特异性为76%。与治疗前相比,化疗缓解组[n=35,(48.5±9.7)pg/mL]及化疗联合手术组[n=15,(46.4±7.8)pg/mL]的CSF-DKK1水平均显著下降(P<0.01),而化疗无效组的CSF-DKK1水平无明显变化[n=13,(89.1±25.7)pg/mL,P>0.05]。结论 NB患者脑脊液中DKK1水平显著升高且与疗效密切相关,可作为NB筛查诊断及疗效评估的标志物。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对Dicer切割功能的影响

目的 探讨核心蛋白与Dicer的相互作用及其对Dicer功能的影响.方法 构建丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达质粒,采用免疫荧光染色和Western blot检测核心蛋白的表达,Western blot检测核心蛋白对细胞内Dicer表达的影响,免疫共沉淀技术检测真核细胞内核心蛋白与Dicer的相互作用.体外转录合成dsRNA,检测核心蛋白对Dicer切割dsRNA作用的影响.结果 在细胞内,核心蛋白能够明显恢复被shRNA抑制的虫荧光素酶基因的表达(P＜0.05),而对siRNA引发的RNAi无拮抗作用.在真核细胞内,加入核心蛋白后,Dicer的表达量无明显改变,并能检测到两者相互结合.在体外抑制实验中,重组表达的Dicer能切割dsRNA产生siRNA;核心蛋白加入后,dsRNA的切割受到抑制.结论 核心蛋白在真核细胞内可以结合Dicer,并通过抑制Dicer对dsRNA的切割作用,抑制RNA干扰作用.     

HBV感染相关的慢加急性肝衰竭患者外周血中TCR γδT细胞促炎细胞因子的产生及与临床指标的相关性分析

目的探讨HBV感染相关的慢加急性肝衰竭患者(HBV-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)外周血中TCRγδT(γδT)细胞的比例及产生IFN-γ、TNF-α及IL-17等促炎细胞因子的能力,分析它们与临床指标间的相关性。方法入选26例HBV-ACLF患者、40例慢性HBV感染患者(CHBV)、25例健康对照者,用流式细胞仪方法检测外周血中γδT细胞的频率及产生炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17细胞的比例,采用SPSS 13.0统计软件分析各组间各细胞比例的差异及细胞比例与临床指标的相关性。结果 HBV-ACLF患者外周血中γδT细胞占总T细胞的比例的中位值为4.8%,低于CHB患者(10.7%)与健康对照者(10.3%),差异有统计学意义(P<0.01)。在体外经刺激后,IFN-γ阳性的γδT细胞在HBV-ACLF组的比例中位值为73.9%、CHBV组为70.9%,高于健康对照组(45.3%,P<0.01);HBV-ACLF患者中TNF-α阳性的γδT细胞中位值为26.7%,显著高于CHBV患者(11.5%)及健康对照组(11.7%,P<0.01);产生IL-17因子的γδT在HBV-ACLF组中中位值为0.7%,高于CHBV组(0.3%)及健康对照组(0.3%,P<0.01)。经Spearman Correlation相关性分析,HBV-ACLF组中TNF-α+γδT细胞的比例与ALT或AST水平呈负相关。结论虽然HBV-ACLF患者外周血中总的γδT细胞比例降低,但产生炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17的能力显著增强,可能参与了HBV-ACLF发病过程中炎症因子急剧升高的过程。     

抗O139群霍乱弧菌单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的制备抗O139群霍乱弧菌(vibriocholeraeO139)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为进一步研制检测O139群霍乱弧菌的胶体金免疫试纸条创造条件。方法以灭活的O139群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗O139群霍乱弧菌的mAb。采用间接ELISA方法和Westernblot对mAb的特异性进行鉴定。采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(O4D7和O4D10),其Ig亚类分别为IgG2b和IgG3;腹水mAb的效价均为1∶107;mAbO4D7的相对亲和力在1×105以上,O4D10在1×104以上。ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位。结论成功地制备抗O139群霍乱弧菌的两株mAb,为建立快速特异检测O139群霍乱弧菌感染的试验方法提供了有力的工具。     

临床标本中酵母菌的耐药性分析

目的 了解临床标本中酵母真菌的分布及对常见抗真菌药物的耐药性。方法 应用常规方法进行酵母真菌的分离和鉴定，采用微量MIC法进行酵母真菌的药敏试验。结果 白色念珠菌占40．6％，热带念珠菌占40．3％，克柔念珠菌占9．6％，其它非白色念珠菌占9．6％；念珠菌对两性霉素B、酮康唑，咪康唑、伊曲康唑、氟康唑，5—氟胞嘧啶、特比奈芬的总耐药率分别为35％、58％、74％、86％、74％、9％、85％，白色念珠菌对上述7种药物的耐药率分别达到52％、64％、68％、86％、36％、8％、98％，热带念珠菌别分613为22％、65％、82％、90％、65％、5％、82％，克柔念珠菌分613为0％、0％、70％、70％、30％、30％、30％。结论 酵母真菌的临床标本中约分布已发生变化，白色念珠菌比例下降，非白色念珠菌比例增加；酵母真菌对常用的抗真菌药物的耐药率除5—氟胞嘧啶、两性霉素B外均较高，临床经验用药应依据药敏结果合理选用。     

ATG4A及ATG16L1基因多态性与肺结核易感性的关系

目的：探讨自噬相关基因４Ａ（autophagy related 4A,ATG4A）及自噬相关基因１６Ｌ１（autophagy related １６ like 1,ATG16L1）的多态性位点与中国西南地区人群肺结核易感性的关系。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测218例肺结核患者及248例健康对照者ATG4A基因rs807185位点及ATG16L1基因rs2241880位点的基因型,用logistic回归分析上述２个位点与肺结核病易感的相关性。结果：2组人群中rs807185位点的A等位基因、AT基因型及显性模型AA+AT vs. TT的频率分布存在统计学差异（P＜0.05）,且在女性中差异更突出。而rs2241880位点的各指标频率分布差异均不明显（P >0.05）。结论：ATG4A基因rs807185位点多态性与中国西南地区人群肺结核易感性呈负相关,而ATG16L1基因rs2241880位点多态性则与该地区人群肺结核易感性无明显相关。