维生素E脂质体纳米颗粒转运siRNA抑制丙型肝炎病毒核心蛋白表达的实验研究

目的 研究携带针对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)RNA的小干扰RNA(siRNA)的维生素E(Vitamin E)脂质体纳米颗粒在体外靶向抑制HCV复制的作用.方法采取“薄膜水化法”制备Vitamin E脂质体纳米颗粒,应用激光粒度分析仪测量纳米颗粒VE-DC/siRNA的颗粒大小及zeta电位,应用透射电子显微镜观察VE-DC形态及分散性.以Huh7.5.1细胞株作为载体.CCK-8法检测纳米颗粒的细胞毒性,琼脂糖凝胶电泳检测纳米颗粒携带siRNA的血清稳定性,蛋白印迹技术和免疫荧光技术检测该siRNA纳米颗粒的转染效率及对HCV的抑制作用.结果 Vitamin E脂质体纳米颗粒形态呈球形,粒度分布为(125.5-9.0)nm,zeta电位为(39.1±4.8)mV,分散均一.相较同浓度商品化脂质体,VE-DC/siRNA对细胞的毒性相对较小.血清稳定性实验显示,VE-DC/siRNA在24 h后siRNA无降解,较裸siRNA稳定性显著提高.携带siRNA的Vitamin E脂质体纳米颗粒可以较高效率进入Huh7.5.1细胞内,并抑制HCV核心蛋白的表达.结论 Vitamin E脂质体纳米颗粒可以转运siRNA至Huh7.5.1细胞,并抑制HCV核心蛋白的表达.     

菌液直接进行聚合酶链反应快速检测葡萄球菌mecA基因的研究

耐甲氧西林葡萄球菌 (MRS)因其对 β内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物的多重耐药而成为危害严重的医院感染病原菌之一 ,不适当的治疗常常造成病情的延误以及病原菌在病房内的流行 ,这就需要临床微生物室快速准确地检测出MRS。应用聚合酶链反应 (PCR)直接检测mecA耐药基因 ,具有高度的特异性和灵敏度且报告时间较快[1]。以往报道的PCR方法都要求先提取细菌染色体DNA做模板 ,我们在实验中发现不进行标本的预处理 ,直接以菌液进行PCR扩增 ,亦可得到满意结果。一、材料和方法1.菌株 :2 15株葡萄球菌多数为本院 2 0 0 1～ 2 0 0 2…     

用T7噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白

目的:用T7噬菌体筛选系统筛选乙型肝炎病毒PreS1的相互作用蛋白.方法:应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的乙型肝炎病毒PreS1作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行生物筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索.结果:经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与乙型肝炎病毒PreS1相互作用的蛋白可能为:细胞色素C氧化酶1(Cytochrome c Oxidase Subunit Ⅰ,COX1).结论:T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨PreSI的致病机制提供重要依据.     

呋喃嘧酮治疗班氏丝虫病疗效观察

呋喃嘧酮(Furapyrimidene,代号M—170)是1978年上海医药工业研究院合成的抗丝虫新药,经中国医学科学院寄研所药理实验研究证明对棉鼠丝虫成虫及微丝幼、长爪沙鼠体内的马来丝虫和血液及腹腔的微丝幼均有较明显的杀灭作用,对棉鼠丝虫成虫作用尤为显著,近年来上海、浙江、湖北、河南、江苏等地先后把它用于临床治疗班氏和马来丝虫病观     

特异性SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位初步分析

目的：用分段表达纯化的SARS冠状病毒（SARS-CoV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid N蛋白）制备针对该蛋白不同区域抗原表位的高特异性单克隆抗体（McAb），初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。方法：用分段表达纯化的SARS～CoV的N蛋白（分别记为N1蛋白、N2蛋白）分别免疫Balb／c小鼠制备McAb，通过检测其亚类、效价及相对亲和力鉴定McAb的生物学特性，以Western blot鉴定单克隆抗体特异性，并对McAb结合表位进行初步分析。结果：筛选出7株抗SARS-CoV N1蛋白及2株抗SARS-CovN2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定6株为IgG1，2株为IgG2b，1株为IgG3，腹水效价10^5以上；亲和常数达10^8以上。Western blot证实所获的单克隆抗体可与SARS-CoVN蛋白发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示2株N1 McAb识别相同的抗原表位，其余均识别不同的抗原表位。结论：通过分段表达纯化的SARS-CoVN蛋白而制备的特异性针对SARS-CoV N蛋白不同区域抗原表位的单克隆抗体中，N1单抗识别N蛋白N端（1-549bp），N2单抗识别N蛋白C端（496～1269bp），可初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。     

快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的应用评价

快速、准确地筛选高危病人成为医院有效控制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (ＭＲＳＡ)的关键。目前 ,临床上对ｍａｃＡ基因以及其编码ＰＢＰ2ａ进行检测是最有效的方法。我们将ＰＢＰ2ａ胶乳法和ｍｅｃＡ基因探针法与ＰＣＲ检测法进行了比较 ,并评价了它们的可靠性和临床应用价值 ,报道如下。一、材料与方法1 菌株 :采用ＡＰＩ系统试条鉴定为金黄色葡萄球菌 ,共96株。分别选ＡＴＣＣ4330 0、ＡＴＣＣ2 5 92 3为阳性和阴性质控菌。2 ＭＲＳＡ筛选 :按标准制备菌悬液 ,接种于苯唑西林琼脂筛选平板上 ;35℃ ,2 4ｈ孵育 ,有菌落生长为ＭＲＳＡ。3 …     

不同靶区RNA干扰抑制乙型肝炎病毒复制与表达

目的 观察针对乙型肝炎病毒（HBV）不同靶区发夹样RNA（shRNA）抑制HBV复制与表达的效率。方法 根据shRNA表达载体设计原则，设计并构建了针对HBVP、C、S和X区7种特异性和2种序列突变的shRNA表达载体，将其与1．3倍HBV全基因表达载体共转染于HepG2细胞，通过Southernblot和酶联免疫吸附法分别检测HBV DNA复制中间体和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）水平，来观察shRNA抗HBV复制与表达的效率。结果 发现针对HBV不同靶区shRNA均有抗HBV复制和表达效果，以P1、S2、C2、S1和X抑制HBV DNA复制效率较高，P1的抑制率高达95％。HBsAg表达受抑制情况与HBV DNA复制受抑制的程度相似，其中C2、C1和S2对HBsAg的抑制作用较强。结论 针对HBV四个开放性读码框进行RNA干扰对HBV复制和抗原表达均有抑制作用，其中P1和C2分别对HBV复制和表达的抑制效率较高。     

不同基因型乙型肝炎病毒感染者与其自身抗体的相关性分析

目的 探讨感染不同基因型HBV患者血清中自身抗体的存在状况及其分布特征,以了解HBV感染与自身免疫的关系.方法 采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态分析技术对重庆地区252例HBV感染者血清进行HBV基因分型,同时采用间接免疫荧光法或免疫斑点法检测其血清中的抗核抗体、抗线粒体抗体、抗平滑肌抗体、抗肝肾微粒体抗体、抗核糖核蛋白抗体、抗Sm、抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、scl-70、抗Jo-1抗体等自身抗体.将患者分为慢性乙型肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组3组,并设立正常对照组,分别就自身抗体分布、性别及年龄等多种指标进行对比分析.计数资料采用x2检验,3组间两两比较P值d校正为0.05/3=0.0176.结果 252例患者血清中检出基因B型170例(67.46％)、C型82例(32.54％),未发现A、D、E、F、G、H基因型存在;其血清中检出多种自身抗体,总检出率为76.98％,与正常对照组(12.0％)比较,差异有统计学意义(x2=44.60,P＜0.05); 170例B基因型患者血清中131例(77.06％)检出自身抗体,82例C型患者血清中63例(76.83％)检出自身抗体,两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本地区HBV感染者基因型主要为B型和C型,以B型居多;乙型肝炎患者自身抗体阳性率较高,检出率与病程、年龄相关,而与性别、病毒基因的类型等因素无关.     

医学检验本科实习带教工作体会

医学检验本科生的临床实习是学校教育的深化和延续,是理论到实践的必由之路,也是学生向医务工作者角色转化的重要阶段[1].带教工作是培养医学检验实习生独立工作能力、综合动手能力的第一步.