白细胞介素12基因多态性与结核易感性的关系

结核病（tuberculosis，TB）是由结核分枝杆菌感染引起，在全球由单一致病菌致死最多的慢性传染病。人类基因组学指出遗传易感性可能是影响宿主免疫功能和结核病发生、发展的因素之一，然而，基困多念性和环境因素共同影响了结核病的发病与转归。     

重庆地区骨质疏松患者25-羟维生素D与骨代谢的相关性分析

目的对25-羟维生素D和甲状旁腺激素(PTH)、N端骨钙素(N-MID)、降钙素(CT)、骨碱性磷酸酶(BALP)的相关性进行统计学分析,并探讨其在临床疾病的诊断、预防及治疗中的应用价值。方法收集2014年1-9月重庆医科大学附属第二医院住院患者411例,其中女316例,男95例;平均(69.29±12.21)岁。采用免疫电化学发光法检测住院患者25-羟维生素D、PTH、N-MID、CT、BALP的水平,探讨骨质疏松患者25-羟维生素D与骨代谢标志物的关系。结果25-羟维生素D与PTH、BALP均呈负相关关系(P0.05),而与CT、N-MID则无显著相关(P0.05)。回归分析显示,25-羟维生素D与骨代谢标志物回归方程为Y=19.02-0.066PTH-0.09BALP。结论骨质疏松患者25-羟维生素D水平的升高、降低与PTH、BALP均有一定相关性,通过对这些指标的检测,可以为临床骨质疏松患者的诊断、预防和控制提供基础数据。     

带GFP的启动子鉴定质粒的构建及在HCV启动子鉴定中的应用

目的:利用已有质粒构建带GFP报告基因的启动子鉴定质粒,并用此质粒鉴定丙型肝炎病毒5非翻译区(HCV5'-UTR)启动基因表达的活性.方法:用限制性内切酶将质粒pEGFP-N1上的EGFP基因片断切下,与用相同酶切去除荧光素酶基因片断的PGL3 enhancer质粒大片断连接,得到带GFP的启动子鉴定质粒pEGFP enhancer.HCV 5'-UTR片断用PCR方法获得,插入pEGFP enhancer的多克隆区,构建HCV 5'-UTR驱动GFP表达质粒.应用脂质体转染技术转染HepG2细胞并观察荧光.结果:成功构建带GFP报告基因的启动子鉴定质粒,并在此基础上构建了HCV 5'-UTR启动GFP表达的质粒.前者转染HepG2细胞后,几乎无GFP表达,而后者观察到较强的绿色荧光.结论:该实验构建的带GFP报告基因的启动子鉴定质粒本底表达低,可用于真核启动子的鉴定.HCV 5'-UTR可以启动报告基因的表达,具有启动子活性.     

下呼吸道感染的阴沟肠杆菌耐药性及基因型研究

目的:掌握我院下呼吸道医院感染阴沟肠杆菌(EC)耐药谱及分子流行病学特征,指导临床合理用药.方法:对28株阴沟肠杆菌进行药敏试验,并采用优化反应体系的随机多态DNA分型(RAPD)技术进行流行病学研究.结果:28株阴沟肠杆菌被基因分型为10型,抗生素分型分为18型.结论:基因分型法显示ICU病房有多重耐药菌株EC株爆发流行现象;应加强微生物室的监测工作,为控制预防下呼吸道医院感染、追踪传染源、切断传播途径提供遗传学信息对临床医生选用敏感有效抗生素起指导作用.     

丙型肝炎病毒核心蛋白抑制shRNA介导的RNA干扰作用

目的研究丙型肝炎病毒编码的蛋白对RNA干扰的抑制作用,筛选出有作用的RNA干扰抑制因子。方法构建丙型肝炎病毒不同蛋白质的真核表达质粒,加入萤火虫荧光素酶基因的RNA干扰体系,共转染HeLa细胞,检测萤火虫荧光素酶活性以观察RNA干扰效果的变化,筛选出有作用的RNA干扰抑制因子。在针对内源性GFP的RNA干扰体系中进一步确证该种抑制作用。利用共转染方法观察该蛋白抑制RNA干扰的剂量效应关系、在不同细胞系中的作用以及对siRNA介导的RNA干扰是否有相同的拮抗作用。结果加入核心蛋白后,萤火虫荧光素酶活性恢复到80%,与空白对照比较有显著性差异(P<0.05)。在绿色荧光蛋白RNA干扰体系中,核心蛋白使绿色荧光蛋白的表达强度明显增加。该种对抗RNA干扰的作用在HepG2、HEK293和HeLa细胞中均存在,且呈剂量依赖关系。在siRNA介导的RNA干扰体系中,加入核心蛋白后萤火虫荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。结论核心蛋白能够对抗shRNA介导的RNA干扰作用,但不能对抗siRNA介导的RNA干扰作用,这种作用具有普遍性。核心蛋白对抗RNA干扰的作用可能有利于提高丙型肝炎病毒在宿主细胞内的生存能力并导致持续感染,亦可能在丙型肝炎病毒致病机制中发挥重要作用。     

自噬相关基因频率分布特征与肺结核相关性研究

目的 根据肺结核患者自噬相关基因(ATG)频率分布特征探讨ATG位点多态性与肺结核易感相关性.方法 应用SequenomMassArray质谱阵列技术对202例肺结核患者(病例组)及222例健康体检者(对照组)ATG的18个单核苷酸多态性(SNP)位点进行基因分型,统计分析各位点基因型与肺结核易感相关性.结果 在肺结核患者和对照组中,校正了性别、年龄等因素后,通过二元logistic回归分析发现ATG4A基因rs807185和rs5973822位点基因型和等位基因频率分布差异有统计学意义(P＜0.05).通过体质量指数(BMI)分层分析,发现这一差异在高BMI人群中更为显著,且均有病例组人群分布频率低于对照组的表现,其余16个SNP位点差异均无统计学意义.结论 ATG4A基因rs5973822和rs807185位点多态性可能与肺结核易感性相关联,且在高BMI群体中差异更显著.     

快速检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的应用评价

目的：对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)两种快速检测方法的可靠性和临床实用性进行评估。方法：临床分离的215株葡萄球菌中，120株MRS同时采用mecA基因探针快速分析、PBP2a快速检测和甲氧西林琼脂筛选平板．并与mecA基因的PCR分析比较。结果：mecA基因探针快速分析鉴定MRS的灵敏度为97．7％，特异性为100％；PBP2a快速检测的灵敏度为97．7％，特异性为100％．甲氧西林琼脂筛选平板的灵敏度为97．7％．特异性为85％。结论：两种快速检测方法都具有灵敏度高，特异性强，简单易行的特点，是常规实验室检测MRS可靠的分析方法。PBP2a分析方法因其不需特殊设备、更快速而将有更好的临床应用前景。