白芨ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的：建立并优化白芨ISSR-PCR反应体系,为白芨种质资源分子评价奠定技术基础.方法：应用单因素和正交试验研究ISSR-PCR反应体系中模板DNA、Mg2、引物、dNTP、BSA及Taq DNA聚合酶等6个主要成分对扩增结果的影响,优化出ISSR-PCR最佳反应体系.结果：优化后25 μL反应体系中含100 ng DNA模板、2.0 mmol/L Mg2＋、2.5 μmol/L引物、0.2 mmol/L dNTP浓度、3.75 g/L BSA及1.25 UTaq DNA聚合酶.结论：建立了适用于白芨的ISSR-PCR最佳反应体系.     

外翻肠囊法研究羊耳菊提取物在大鼠肠内的吸收

考察羊耳菊提取物在大鼠肠内的吸收特征,应用大鼠肠外翻模型,选择羊耳菊提取物中具有代表成分的东莨菪苷等9种成分为考察对象,建立其UPLC-MS/MS测定方法并测量其累计吸收量,阐明各成分在不同肠段的吸收特征。结果表明,不同浓度的1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸等成分随活性部位提取物的给药剂量增加而增加,无明显高浓度饱和现象,提示其可能的吸收方式均为被动扩散,东莨菪苷同样在高浓度条件下存在饱和现象,提示可能的吸收方式为主动转运。绿原酸的主要吸收部位在十二指肠,1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸和隐绿原酸的最佳吸收部位是空肠,东莨菪苷,新绿原酸,3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的最佳吸收部位在回肠。以此推测,羊耳菊提取物中9种成分在小肠均有吸收,但各成分的吸收速率、最佳吸收部位及吸收机制不尽相同,提示小肠对羊耳菊提取物中9种成分的吸收具有选择性。     

外翻肠囊法研究羊耳菊提取物在大鼠肠内的吸收北大核心CSCD

考察羊耳菊提取物在大鼠肠内的吸收特征,应用大鼠肠外翻模型,选择羊耳菊提取物中具有代表成分的东莨菪苷等9种成分为考察对象,建立其UPLC-MS/MS测定方法并测量其累计吸收量,阐明各成分在不同肠段的吸收特征。结果表明,不同浓度的1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸等成分随活性部位提取物的给药剂量增加而增加,无明显高浓度饱和现象,提示其可能的吸收方式均为被动扩散,东莨菪苷同样在高浓度条件下存在饱和现象,提示可能的吸收方式为主动转运。绿原酸的主要吸收部位在十二指肠,1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸和隐绿原酸的最佳吸收部位是空肠,东莨菪苷,新绿原酸,3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的最佳吸收部位在回肠。以此推测,羊耳菊提取物中9种成分在小肠均有吸收,但各成分的吸收速率、最佳吸收部位及吸收机制不尽相同,提示小肠对羊耳菊提取物中9种成分的吸收具有选择性。     

基于在体循环肠灌流模型分析羊耳菊提取物的肠吸收特性

目的:考察羊耳菊提取物在大鼠肠内的吸收特征。方法:采用大鼠在体循环肠灌流模型,选择羊耳菊提取物中东莨菪苷等9种代表性成分为考察对象,建立其UPLC-MS/MS并测量各成分的累计吸收量,探究药物质量浓度,胆汁,P-糖蛋白(P-gp)抑制剂及不同肠段对羊耳菊提取物中东莨菪苷等成分肠吸收的影响,阐明各成分在不同肠段的吸收特征。结果:东莨菪苷在高质量浓度条件下存在饱和现象,提示可能的吸收方式为主动转运,而1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸等其余8种成分则无明显高浓度饱和现象,提示这8种成分可能的吸收方式均为被动扩散。木犀草苷,1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸,3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的主要吸收部位在空肠,东莨菪苷和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的主要吸收部位在回肠,绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸的主要吸收部位在十二指肠。羊耳菊提取物中东莨菪苷等9种成分的肠吸收均受到p H和胆汁的影响。结论:羊耳菊提取物中9种成分在小肠均有吸收,但各成分的吸收速率、最佳吸收部位及吸收机制不尽相同。     

灯盏细辛和赤芍配伍组方对小鼠部分肝细胞色素P450亚型活性的影响及其机制分析

目的:探讨灯盏细辛和赤芍配伍组方(辛芍组方)对小鼠细胞色素P450酶(CYP450s)主要亚型CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1和CYP3a11代谢活性的影响以及相关机制。方法:小鼠分为5组,分别为正常组、苯巴比妥组(70 mg·kg-1)和辛芍组方低、中、高剂量组(0.31,0.62,1.25 g·kg-1)。给药结束后,取各组小鼠肝脏制备微粒体,考察CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1和CYP3a11的代谢活性;并提取肝组织总RNA和蛋白,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)考察辛芍组方对CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1,CYP3a11和孕烷X受体(PXR)mRNA及蛋白表达的影响;利用报告基因法考察辛芍组方对PXR的激活作用。结果:与正常组比较,辛芍组方可诱导CYP3a11酶活性,上调CYP3a11,PXR mRNA和蛋白水平,并具有PXR激活作用(P0.05,P0.01);与模型组比较,辛芍中、高剂量组方能抑制CYP1a2酶活性(P0.05),但对CYP1a2的mRNA水平和蛋白水平无明显影响;而辛芍组方对CYP2e1,CYP2d22的酶活性,mRNA水平和蛋白水平无明显影响。结论:辛芍组方具有CYP3a11活性诱导作用,该作用很可能与辛芍组方上调PXR表达并激活PXR从而促进CYP3a11表达有关;而其CYP1a2活性抑制作用机制与CYP1a2的表达调控无关,需要进一步研究。     

薯莨的质量控制方法

目的:建立中药薯莨的质量控制方法,提高其质量可控性。方法:采用显微鉴别法对薯莨的粉末显微特征进行鉴别,薄层色谱法(TLC)对薯莨进行薄层色谱鉴别,高效液相色谱法(HPLC)测定薯莨中儿茶素和表儿茶素含量,参考2015年版《中国药典》四部通则测定10批薯莨的水分、总灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物含量。结果:薯莨粉末显微特征明显,具有草酸钙针晶、淀粉粒和石细胞等。薄层色谱鉴别显示薯莨中主斑点分离较好,斑点颜色及Rf值与对照药材一致。HPLC结果显示薯莨药材中的儿茶素和表儿茶素分离度好,线性范围分别是4. 900~196. 0,5. 020~200. 8 mg·L~(-1),相关系数r均为0. 999 9。精密度、重复性和稳定性良好,平均加样回收率分别为99. 67%和99. 25%,RSD分别为1. 5%和1. 6%。不同批次薯莨中儿茶素和表儿茶素的含量范围分别为0. 553 2~10. 25 mg·g-1和0. 646 1~11. 06 mg·g-1。10批水分质量分数平均值为16. 3%,总灰分质量分数平均值为3. 97%,酸不溶性灰分平均值为1. 41%,醇溶性浸出物平均质量分数为20. 3%。结论:该方法简便、准确、可靠,可以为更有效的控制薯莨的质量提供参考依据。     

UHPLC-ESI-Q-TOF-MS快速分析荭草中化学成分

目的:建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱技术(UHPLC-ESI-Q-TOF-MS)分析荭草提取物中主要化学成分的方法。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)进行梯度洗脱;以0.25 mL/min流速进行梯度洗脱。使用ESI离子源,正、负离子模式进行质谱检测,电压分别为4 kV、3.5 kV。结果:通过结合对照品、查阅相关文献及相关质谱数据,对荭草提取物中化学成分进行结构分析,初步鉴定了21个化学成分,主要结构多为黄酮类化合物。结论:UHPLC-ESI-Q-TOF-MS可以提高中药民族药的分析效率,有利于化合物结构的分析,可作为荭草药材化学成分的分析方法。     

HPLC法测定七神喉痹通颗粒中岩白菜素的含量

七神喉痹通颗粒为贵州省苗族药,由野烟叶、羊耳菊、矮地茶等组成。具有清热解毒、利咽止痛之功效。临床用于急喉痹(急性咽炎)、急乳蛾(急性扁桃体炎)表现的咽喉肿痛有显著疗效。矮地茶中含岩白菜素、紫金牛酚Ⅰ、紫金牛酚Ⅱ、紫金牛素B、冬青醇、槲皮素、槲皮苷、杨梅苷等。岩白菜素是矮地茶主要有效成分之一,具有镇咳祛痰作用,故选取岩白菜素作为七神喉痹通颗粒含量测定指标。岩白菜素含量测定的文献报道有紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法。本实验采用高效液相色谱法测定岩白菜素的含量,并对测定方法进行了研究,制定了七神喉痹通颗粒中岩白菜素的含量限度。