乳没活络散的质量控制及稳定性研究

目的:建立乳没活络散(Rumohuoluo San)中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量测定方法,以控制产品质量。方法:以高效液相色谱法,采用Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),Phenomonex C18(4.6 mm×250 mm,4μm),Hypersil C18(5.0 mm×200 mm,5μm),流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~12 min,19%A;12~32 min,19%~30%A;32~40 min,30%A;40~54 min,30%~38%A;54~60 min,38%A),检测波长203 nm,流速1.0 m L/min,柱温45℃,对本方君药三七中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1特征性成分含量进行同时测定。结果:本方法可同时检测乳没活络散中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1;上述3种成分进样浓度分别在0.04268~0.4268 mg/L、0.07564~0.7564 mg/L和0.08672~0.8672 mg/L时线性关系良好(r0.9994),平均回收率分别为100.1%、99.78%和101.4%,RSD在1.3%~2.5%(n=9)。稳定性方面,3批乳没活络散经过6个月加速试验和24个月长期试验,各项指标均符合要求。结论:所建立的方法专属,准确度、精密度及耐用性良好,可用于乳没活络散的质量控制。乳没活络散质量可控稳定性好。     

辛芍组方抗脑缺血再灌注损伤的抗氧化、抗凋亡机制研究

该文制备了大鼠中动脉阻断(MCAO)局灶脑缺血再灌注损伤模型,来探讨辛芍组方抗脑缺血再灌注损伤作用的抗氧化和抗凋亡机制。大鼠随机分为假手术组,模型组,辛芍组方低、中、高剂量组(0.31,0.62,1.25 g·kg-1)。静脉注射给药7d后,建立大鼠局灶脑缺血再灌注损伤模型,并考察大鼠神经行为学评分、脑梗死体积比;考察血清中活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、一氧化氮(NO)含量以及诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的活性;并用qRT-PCR法、免疫组化及Western blot法测定海马CA1区中Bcl-2,Bax,caspase 3 mRNA和蛋白水平的变化。结果表明,辛芍组方能够显著改善脑损伤大鼠行为学评分(P0.01)、有效减小脑梗死体积(P0.01)、提高血清中SOD和GSH-PX活性(P0.01)、减少ROS和MDA的产生(P0.01)、抑制i NOS活性(P0.01)、降低NO释放量(P0.01),上调Bcl-2的mRNA及蛋白水平(P0.01),下调Bax和caspase 3的mRNA及蛋白水平(P0.01)。结果提示,辛芍组方可能通过抗氧化和抗凋亡途径起到脑缺血再灌注损伤保护作用。     

基于蛋白质组学分析参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制

目的:利用串联质谱标记(TMT)定量蛋白质组学技术探究参芎葡萄糖注射液(SGI)拮抗过氧化氢(H₂O₂)诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制。方法:体外培养H9c2细胞,H₂O₂诱导H9c2细胞建立氧化损伤模型,利用细胞增殖与毒性检测法(MTS)检测细胞存活率,高效液相色谱法(HPLC)进行肽段分级,超高效液相色谱-质谱联用技术检测H9c2细胞的蛋白表达,使用MaxQuant(v1.5.2.8)进行数据检索,高分辨质谱定量分析筛选差异表达蛋白,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达蛋白进行生物信息学分析,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内脂质结合蛋白2(Plin2)和原肌球蛋白1(Tpm1)的蛋白表达水平进行验证。结果:通过谱图解析鉴定有48608个特异性肽段,5903个可定量蛋白。与模型组比较,SGI组有82个差异表达的蛋白,其中有22个蛋白上调,60个蛋白下调。GO分析结果显示,差异表达蛋白主要参与程序性细胞死亡调节、细胞增殖调控、心血管系统发育和细胞迁移等生物进程。KEGG分析结果表明,这些蛋白与过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR),黏着斑和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt),Ras相关蛋白1(Rap1)等通路有关。Western blot结果显示,与模型组比较,SGI能显著增加Plin2蛋白表达水平,显著降低Tpm1蛋白表达水平(P<0.01),与蛋白质组学结果一致。结论:提示SGI可能通过调控PPAR,黏着斑,PI3K/Akt和Rap1等通路抑制细胞凋亡,从而拮抗H₂O₂诱导细胞氧化损伤,但需要后续实验进一步验证研究。     

辛芍组方抗脑缺血再灌注损伤的抗氧化、抗凋亡机制研究北大核心CSCD

该文制备了大鼠中动脉阻断（MCAO）局灶脑缺血再灌注损伤模型,来探讨辛芍组方抗脑缺血再灌注损伤作用的抗氧化和抗凋亡机制。大鼠随机分为假手术组,模型组,辛芍组方低、中、高剂量组（0.31,0.62,1.25 g·kg-1）。静脉注射给药7d后,建立大鼠局灶脑缺血再灌注损伤模型,并考察大鼠神经行为学评分、脑梗死体积比;考察血清中活性氧（ROS）含量、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性、一氧化氮（NO）含量以及诱导型一氧化氮合酶（i NOS）的活性;并用qRT-PCR法、免疫组化及Western blot法测定海马CA1区中Bcl-2,Bax,caspase 3 mRNA和蛋白水平的变化。结果表明,辛芍组方能够显著改善脑损伤大鼠行为学评分（P〈0.01）、有效减小脑梗死体积（P〈0.01）、提高血清中SOD和GSH-PX活性（P〈0.01）、减少ROS和MDA的产生（P〈0.01）、抑制i NOS活性（P〈0.01）、降低NO释放量（P〈0.01）,上调Bcl-2的mRNA及蛋白水平（P〈0.01）,下调Bax和caspase 3的mRNA及蛋白水平（P〈0.01）。结果提示,辛芍组方可能通过抗氧化和抗凋亡途径起到脑缺血再灌注损伤保护作用。     

紫金龙氯仿-甲醇组分对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抑制作用

目的探讨紫金龙氯仿-甲醇组分对脂多糖诱导RAW264. 7细胞炎症的抑制作用。方法脂多糖刺激RAW264. 7细胞建立体外炎症模型后,加入不同质量浓度(50、100、200、400 mg/L)紫金龙氯仿-甲醇组分,ELISA法或比色法检测白介素-6 (IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)含有量,Western blot法测定诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2 (COX-2)蛋白表达,以及核转录因子κ转抑制蛋白α(IκBα)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)磷酸化水平。结果紫金龙氯仿-甲醇组分可显著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β、NO、PGE2释放(P 0. 05,P 0. 01),下调i NOS、COX-2蛋白水平(P 0. 01),降低p38、JNK、Erk1/2、IκBα磷酸化水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论紫金龙氯仿-甲醇组分可有效抑制脂多糖诱导RAW264. 7细胞炎症,其机制可能与抑制NF-κB、MAPKs信号通路激活、减少炎症因子释放有关。     

基于HSF1高表达H9c2细胞的参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用探讨

目的:建立热休克转录因子1(HSF1)高表达的H9c2细胞系,考察在HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液(SGI)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。方法:构建GV1422-HSF1的重组质粒,并利用Fu GENE 6转染试剂将重组质粒转染至H9c2细胞中,用遗传霉素(G418)来筛选稳定转染细胞株,并用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSF1和热休克蛋白70(HSP70)mRNA和蛋白的表达情况,来鉴定HSF1高表达的H9c2细胞系(H9c2-HSF1)是否建立成功。用H2O2(300μmol·L-1)处理H9c2-HSF1细胞0.5 h构建氧化损伤模型,考察HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液预处理对细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)漏出量、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,同时Western blot检测HSF1和HSP70蛋白表达情况。结果:Real-time PCR和Western blot实验结果显示:筛选出来的稳定转染细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调(P0.01),表明H9c2-HSF1细胞系构建成功。经参芎葡萄糖注射液预处理6 h,H2O2损伤0.5 h后,与H9c2+H2O2组和H9c2-HSF1+H2O2组比较,对应给药组细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调(P0.01),细胞存活率显著增高(P0.01),LDH,CK释放量和MDA含量显著减少(P0.01);ROS含量显著降低,GSH-Px和SOD活性明显升高。结论:本研究成功构建了HSF1高表达H9c2细胞系,并发现HSF1高表达能明显增强参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用,其机制可能不在于增加细胞清除ROS能力,但可能与上调HSP70表达相关,需要进一步研究。     

川芎嗪-丹参配伍前后对药动学及CYP450酶的影响及其相关性北大核心CSCD

探究盐酸川芎嗪与丹参配伍前后对急性心肌缺血(acute myocardial ischemia,AMI)大鼠体内药动学的影响,从代谢酶的角度揭示其配伍前后药动学参数变化的机制。AMI模型大鼠分别单次尾静脉注射丹参注射液(DGI)、川芎嗪注射液(CGI)和参芎葡萄糖注射液(SGI)(丹参素3.78 mg·kg^(-1),迷迭香酸0.049 mg·kg^(-1),川芎嗪13.68 mg·kg^(-1)),于不同时间点眼眶静脉丛采血,并于末次取血点后处死大鼠取出肝脏,采用UPLC-MS/MS检测血浆中丹参素、迷迭香酸、川芎嗪的血药浓度;采用Western blot技术,考察各组大鼠肝脏中CYP1A2、CYP2C11、CYP2C19、CYP2D4、CYP2E1、CYP3A2蛋白表达的情况。药动学结果显示,与CGI组相比,SGI组中的川芎嗪在AMI大鼠体内的T_(1/2)有降低趋势,AUC显著降低(P<0.05);与DGI组相比,SGI组中丹参素和迷迭香酸药动学参数均无显著性差异。蛋白表达结果显示,SGI组中CYP1A2、CYP2C11、CYP2D4、CYP2E1、CYP3A2的表达量较CGI组均显著增加(P<0.05),CYP2C19的表达量较CGI组显著降低(P<0.05)。CYP1A2、CYP2C11、CYP3A2是参与川芎嗪Ⅰ相代谢的同工酶,当丹参与盐酸川芎嗪合用后,这3种酶表达升高,使大鼠体内药动学过程发生变化,川芎嗪的代谢加快。     

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:探究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:利用氯化钴(CoCl_2)建立缺氧复氧损伤H9c2细胞模型,实验分正常对照组、模型组及荭草花提取物不同浓度组。应用MTS检测细胞存活率;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)释放量及细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot测定cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:利用800μmol/L CoCl_2缺氧22 h,复氧2 h可建立缺氧复氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,荭草花提取物能显著升高心肌细胞存活率,降低LDH、CK释放量及细胞内MDA含量,提高细胞内SOD、CAT活性,并呈浓度依赖性抑制CoCl_2诱导的缺氧复氧损伤。荭草花提取物能下调促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、Bax的表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。结论:荭草花提取物对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。     

灯盏细辛和赤芍配伍组方对小鼠部分肝细胞色素P450亚型活性的影响及其机制分析

目的:探讨灯盏细辛和赤芍配伍组方(辛芍组方)对小鼠细胞色素P450酶(CYP450s)主要亚型CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1和CYP3a11代谢活性的影响以及相关机制。方法:小鼠分为5组,分别为正常组、苯巴比妥组(70 mg·kg-1)和辛芍组方低、中、高剂量组(0.31,0.62,1.25 g·kg-1)。给药结束后,取各组小鼠肝脏制备微粒体,考察CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1和CYP3a11的代谢活性;并提取肝组织总RNA和蛋白,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)考察辛芍组方对CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1,CYP3a11和孕烷X受体(PXR)mRNA及蛋白表达的影响;利用报告基因法考察辛芍组方对PXR的激活作用。结果:与正常组比较,辛芍组方可诱导CYP3a11酶活性,上调CYP3a11,PXR mRNA和蛋白水平,并具有PXR激活作用(P0.05,P0.01);与模型组比较,辛芍中、高剂量组方能抑制CYP1a2酶活性(P0.05),但对CYP1a2的mRNA水平和蛋白水平无明显影响;而辛芍组方对CYP2e1,CYP2d22的酶活性,mRNA水平和蛋白水平无明显影响。结论:辛芍组方具有CYP3a11活性诱导作用,该作用很可能与辛芍组方上调PXR表达并激活PXR从而促进CYP3a11表达有关;而其CYP1a2活性抑制作用机制与CYP1a2的表达调控无关,需要进一步研究。