生物化学与分子生物学教学初探

本总结了多年从事生物化学的教学经验，从如何做好准备工作(掌握丰富的专业知识、制定教学目标。因人施教、合理组织教学内容，认真制作多媒体教案)和怎样提高课堂教学效果(激发学生学习生化的兴趣、明确学习目标，抓住规律、采用不同教学方法)这两方面着手，对生物化学教学进行了探讨，希望对生物化学教学有所帮助。     

鼠疫菌重组质粒pcDNATE/F1-V的构建及其免疫效果的研究

目的 获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组质粒pcDNATE／E1-V，并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因，分别与pGEM-T连接测序，构建pcDNATE／F1-V融合重组质粒，转染COS-7细胞，用Western blot方法鉴定目的蛋白的表达，重组质粒pcDNATE／E1-V加集落刺激因子(GM-CSF)免疫Balb／c小鼠，观察免疫效果。结果pcDNATE／F11-V在COS-7细胞中表达，免疫鼠体内产生特异性抗体，抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定结果表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pcDNATE／F1-V，其具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力，为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。     

Tet-on控制的Luciferase和SupF突变报告基因质粒的构建及其在顺铂致突变作用中的应用研究

目的 研究TCR在顺铂导致的细胞内DNA损伤和突变过程中的分子机制,并为进一步研究转录偶联修复与突变发生的分子机制提供重要分子生物学依据.方法 首先将SupF突变报告基因克隆到带有双向真核启动子的含有Tet调控元件TRE的表达载体pBI-L的多克隆位点(MCS)上,获得pTCR-1,再将SV40ori元件插入pTCR-1载体,最终获得pTCR-2质粒.酶切和DNA测序证实后,用顺铂将pTCR-2进行体外DNA损伤后瞬时转染至Tet-on 293细胞,在Dox诱导下培养48 h,从细胞内提取质粒,纯化后转化SY204菌株,蓝白斑筛选挑取白色突变斑,计算突变频率并进行DNA测序检测突变频谱.结果 经酶切鉴定和测序分析,插入片段长度和序列正确.在Dox诱导下取得了SupF报告基因在转录偶联修复途径中的突变频率与频谱.结论 重组的pTCR-2质粒具有在真核细胞中Tet启动的转录活性,应用于顺铂致突变研究中,使转录条件下的突变情况能够得以反映.     

PBL在八年制医学生物化学教学中的实践与探索

本文介绍了在八年制医学生物化学教学中进行PBL教学的经验及体会，认为以问题为导向的教学方法能够激发学习的主动性，培养学生提出问题并解决问题的能力，应当在高层次医学教学中实施和推广。     

人可溶性CD40L表达及其生物学活性初步分析

目的将已构建好的重组表达质粒pET28a -sCD40L进行优化条件表达,并将其目的蛋白纯化,对目的蛋白进行初步的活性分析.方法利用已构建好的重组表达质粒pET28a -sCD40L进行目的蛋白的表达,优化表达的条件,利用Western-blot鉴定目的蛋白,在最适条件下进行目的蛋白的表达,利用Ni2 -NTA柱纯化目的蛋白,MTT法检测重组蛋白对人外周血淋巴细胞增殖活性的影响.结果利用 Ni2 -NTA柱将目的蛋白进行了分离纯化,且纯化的重组蛋白具有刺激人外周血淋巴细胞的增殖.结论成功优化了重组表达质粒pET28a -sCD40L的表达条件,生物学活性的初步分析显示Ni2 -NTA柱纯化的重组蛋白具有刺激人外周血淋巴细胞增殖活性.     

Livin异构体特异性siRNA表达载体的构建及其在SPC-A1细胞中的稳定表达

目的：利用基因转染和RNA干涉（RNA interference．RNAi）技术在肺腺癌SPC-A1细胞株中分别建立2种Livin异构体的基因沉默体系，旨在进一步体外观察两种异构体基因沉默诱导SPC-A1细胞凋亡效应。方法：构建Livin两种异构体小干涉RNA（small interfering RNA，siRNA）表达载体；以电穿孔法转染SPC-A1细胞，经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆；通过半定量RT-PCR和Western blot验证Livin异构体在SPC-A1细胞中的基因沉默效率，建立高效Livin异构体基因沉默体系。结果：成功获得Livin异构体siRNA表达载体，经基因转染以及G418抗性筛选，成功建立Livin异构体特异基因沉默SPC-Al细胞克隆。结论：RNAi能高效特异阻断两种Livin异构体表达，为进一步研究其不同的抗凋亡生物学功能，探讨其作为诱导肺癌细胞凋亡治疗分子靶点以及提高肺癌细胞放化疗敏感性打下基础。     

小鼠β-防御素-3基因表达调控的初步研究

目的研究小鼠β-防御素-3(mBD-3)基因的表达及其调控因子.方法通过腹腔注射内毒素(LPS)建立小鼠急性时相反应,经Northern-blot检测mBD3 mRNA表达的组织特异性并分析在肝脏中表达的剂-效和时-效关系,EMSA和South-western blot分析细胞核蛋白中的转录因子.结果内毒素注射后仅在肝脏组织中检测到mBD3 mRNA并存在最小诱导剂量,本实验确定的最小诱导剂量为1.5μg/g(剂量/体重比).以1.5μg/g为诱导剂量,在注射后6h才出现mBD3mRNA的表达,8h、10h达峰值,12h后表达水平下降.肝脏细胞核蛋白中有与mBD3基因调节区特异DNA片段结合的转录因子,分子量在43.0～66.2kD之间.结论小鼠急性时相反应时mBD3基因在肝脏中表达上调,具有剂量和时间依赖性;NF-κB参与β-防御素3基因在肝脏中表达的转录调节.     

CDCA在C57BL/6小鼠中上调肝脏成纤维细胞生长因子21表达及其效应

目的研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)的激活对C57BL/6小鼠肝脏中纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)基因表达的影响。方法将18只3～4周龄C57BL/6小鼠随机分为3组,分别使用不同浓度鹅脱氧胆酸(chenodeoxy cholic acid,CDCA,0、10 mg/kg和50 mg/kg)给小鼠灌胃7 d,处死后分别提取小鼠肝脏总RNA和总蛋白,采用RT-PCR法和Western blot法检测各组小鼠FGF21RNA和蛋白表达水平的变化;同时用酶法测定检测小鼠血甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)及血糖(GLU)变化。结果 C57BL/6小鼠肝脏中FGF21 RNA和蛋白的表达水平呈CDCA剂量依赖型增高;小鼠血脂及血糖测定结果显示:TG,TC和血糖随CDCA浓度的升高而下降。结论 CDCA可上调C57BL/6小鼠肝脏中FGF21的表达并导致血TG、TC及GLU下降。     

医学院校开设生物化学设计性实验的实践与探索

设计性实验是一种以学生为主体、教师为引导的新型实验教学模式。为顺应医学院校生物化学实验教学改革的趋势,第三军医大学生化教研室结合医学院校实际教学情况,尝试开展生物化学设计性实验教学。实践结果表明,设计性实验教学有利于学生综合素质的提高,是高素质医学人才培养的一条重要途径。     

教学方法改革在提高生物化学教学质量中的探讨

教学方法改革是本校推进人才培养模式转型的重要举措。生物化学是高校医学专业的必修课程,是进行教学方法改革的重要学科。为进一步提高生物化学教学质量,本研究在不同层次学生的生物化学教学中选择合适的教学方法,进行课堂教学方法改革,取得了理想的教学效果,从而为教学方法改革的应用积累了一定的经验。