医学生物技术专业基因工程教学的体会

为了讲好医学生物技术专业学生的基因工程课程,依据教学经验,从教学内容、教学方法以及课外教学等方面提出了一些教学体会和思考,通过改革教学内容,加强绪论的讲解,采用案例教学和读书报告等方法,并增加课外实践和见习等方式,可激发学生学习兴趣,提高教学效果.     

一种新的凋亡抑制蛋白Livin在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨一种新的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP) Livin两种异构体Livinα和Livinβ在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC组织类型、放化治疗的关系.方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测NSCLC组织中Livinα和LivinβmRNA的表达,并用western blot分析Livin蛋白的表达.结果 48例NSCLC组织中Livin表达阳性率为22.9%,其表达与NSCLC组织学类型相关,腺癌中Livin表达阳性率达45.5%,明显高于鳞癌和大细胞癌(P<0.01),而癌旁组织和良性疾病肺组织未检出阳性结果;Livin表达还与肿瘤治疗相关,放化治疗可明显诱导Livin表达(P<0.01).结论 Livin异构体在非小细胞肺癌组织中表达,作为肺腺癌的分子标志物,可能成为肺癌诱导凋亡治疗的新靶点.     

Cidec研究进展

诱导细胞死亡的DFF45样效应因子C(Cidec)又名脂肪特异性蛋白27(FSP27),最先在小鼠脂肪细胞中分离得到,随后在人肝细胞、脂肪细胞等细胞中相继发现,属于Cide家族。研究发现,Cidec蛋白可定位于脂肪细胞的脂滴表面,促进脂肪的储存和脂滴体积的增大,进而调节脂肪代谢和机体能量平衡。Cidec在细胞凋亡方面也发挥着重要作用。     

基于人HMGB1-B box的抑制性小肽筛选及其抗炎功能分析

目的 从噬菌体构象型7肽库中筛选人HMGB1-B box的抑制性小肽.方法 以重组人HMGB1-B box为靶分子对噬菌体构象型7肽库进行6轮亲和筛选,获得B box结合的克隆,并经ELISA验证.选取亲和力高的克隆进行DNA测序,并推导出呈现的多肽序列,通过IL-6 ELISA检测噬菌体呈现的小肽对人HMGB1-B box致炎功能的抑制作用.结果 经过6轮亲和筛选,噬菌体的回收率增加,阳性克隆得到富集.挑选15个结合力强的克隆进行测序,推导出2个多肽序列.所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制人HMGB1-B box刺激THP-1细胞产生炎症因子的能力.结论 获得了噬菌体呈现的能够抑制人HMGB1-B box的两个小肽.     

TNFα对小鼠骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活力影响

目的观察肿瘤坏死因子α(TNFα)对KM小鼠骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶(TPK)活力的影响。方法80只清洁级KM小鼠随机分为TNFα高剂量连续注射组(TH组,n=20)、TNFα低剂量连续注射组(TL组,n=20)、TNFα高剂量一次注射组(T1组,n=20)和正常对照组(C组,n=20)。密度梯度离心分离组织细胞膜,麦胚凝集素(WGA)亲和柱层析纯化膜胰岛素受体,外源聚谷-酪多肽底物同位素32P掺入法测定酪氨酸蛋白激酶(TPK)活力,观察各组胰岛素刺激前后的离体骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化。结果1)TH和TL组基础(无胰岛素刺激)骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力均明显低于C组,且TH组明显低于TL组(P均<0.01);2)TH组和TL组胰岛素刺激的骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化值均明显低于C组,且TH组明显低于TL组,(P均<0.01);3)T1组无论基础还是胰岛素刺激的骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化值均与C组无显著差别(P>0.05)。结论TNFα可抑制组织细胞膜胰岛素受体TPK活力,在组织细胞膜胰岛素受体信号转导障碍中发挥重要作用。TNFα抑制组织细胞膜胰岛素受体TPK活力,需连续刺激,一次刺激作用效果不明显。     

可溶性人TRAIL分子对Jurkat细胞的杀伤作用

目的　研究可溶性人TRAIL蛋白 (sTRAIL)对Jurkat细胞的生长抑制效应及凋亡诱导作用。方法　通过RT PCR扩增人TRAIL分子胞外区 4 1～ 2 81的密码子 ,利用大肠杆菌DH5α表达该可溶性片段 ,经纯化和复性后 ,诱导Jurkat细胞 ,通过显微镜、台盼蓝排斥试验、MTT法、流式细胞仪和DNA断裂实验检测细胞增殖和细胞凋亡。结果　sTRAIL蛋白纯度达 90 %以上。用 0 .5～ 10 .0 μg/ml的蛋白诱导Jurkat细胞 12h以上细胞的生长和增殖即被显著抑制 ,并且观察到凋亡峰及DNA的片段化等凋亡的特征性变化 ,细胞的生长抑制率与凋亡率也呈剂量依赖和时间依赖关系。结论　利用大肠杆菌制备的sTRAIL41 2 81蛋白对Jurkat细胞具有明显的增殖抑制效应和凋亡诱导作用。     

应用TaqMan定量方法研究巴马香猪CYP1A1、2A19、2E1mRNA表达

目的 巴马香猪是我国具有特色和优势的实验用小型猪资源品系,用于药物评价具有广阔前景.方法 以β-actin作校正,利用TaqMan定量技术对巴马香猪肝、肾、肾上腺、小肠、皮肤、脑、肺、睾丸、前列腺、子宫和卵巢等组织中CYP1A1、2A19和2E1 mRNA的表达水平进行检测,检测结果与报道的人体对应酶CYP1A2、2A6、2E1进行比较.结果 巴马香猪CYP1A1、2A19、2E1 mRNA均以肝脏中最高,肝外组织明显较低,并且巴马香猪肝脏CYP1A1、2A19、2E1 mRNA均低于报道的人肝对应酶.结论 巴马香猪CYP1A1、2A19、2E1与人体对应酶CYP1A2、2A6、2E1的mRNA组织表达存在一定差异,提示在其作为相应CYP亚型代谢的药物评价时应考虑这种种属差异对实验结果推广到人的影响.     

Livin异构体基因沉默对肺腺癌SPC-A1 细胞化疗增敏效应研究

背景与目的 前期研究发现,凋亡抑制蛋白家族(IAP)新成员Livin尤其是Livinα,参与肺癌的发生发展,是肺癌细胞化疗耐药的重要机制之一.本研究的目的是利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在肺腺癌SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其对增加SPC-A1细胞化疗敏感性的不同作用及价值.方法 在SPC-A1细胞中稳定表达Livinα β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA(siRNA),体外实验用甲基偶氮唑蓝(MTT)法,研究Livin基因沉默后SPC-A1细胞对化疗药物的敏感性改变;体内实验利用荷瘤裸鼠模型,研究Livin基因沉默后荷瘤小鼠对顺铂的敏感性改变.结果 Livinα β、Livinα和Livinβ基因沉默后,SPC-A1细胞对顺铂、卡铂、环磷酰胺、阿霉素等多种化疗药物敏感性增加(P＜0.05),其中,Livinα β基因沉默能更有效增加肺癌细胞化疗敏感性(P＜0.01).动物实验表明,pSilencer-Livinα β组、pSilencer-Livinα组和pSilencer-Livinβ组抑瘤率分别为146.1%、130.7%、110.5%.结论 Livin异构体尤其是Livinα β可作为肺癌细胞化疗增敏的分子靶点,其基因沉默有望成为非小细胞肺癌基因治疗新手段.     

研究生分子生物学实验课的教学体会

分子生物学已成为21世纪生命科学领域的一个重要学科,分子生物学技术也随之成为医学研究和生命科学中普遍应用的手段和方法。分子生物学理论课教学内容多,范围广,有一定的深度和难度,如果不做实验,学生很难透彻理解和掌握。而分子生物学又是一门技术性很强的学科,因此,分子生物学实验课