乳腺癌患者血清中20种氨基酸的检测及在乳腺癌筛查中的意义

目的 考察乳腺癌患者与正常体检者血清中氨基酸水平的差异,并探讨其在乳腺癌筛查中的意义.方法 招募2019年4-6月重庆大学附属肿瘤医院病理科确诊的女性乳腺癌患者59例作为乳腺癌组,以正常女性体检者53例作为对照组.采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)检测招募者血清中20种氨基酸水平,分析乳腺癌组与对照组间、乳腺癌不同分子亚型组间、早期乳腺癌组与晚期乳腺癌组间氨基酸水平的差异.采用ROC曲线对差异血清氨基酸在乳腺癌筛查中的效能进行评估.结果 乳腺癌组血清中丙氨酸(Ala)、天冬酰胺(Asn)、瓜氨酸(Cit)、谷氨酸(Glu)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、鸟氨酸(Orn)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val)的水平均高于对照组(P均<0.05),精氨酸(Arg)水平低于对照组(P=0.003).ROC曲线分析表明,在乳腺癌患者血清中升高的14种氨基酸中,Ala和Pro单独筛查乳腺癌的效能较高,AUC均为0.75;Ile单独筛查乳腺癌时有最高的灵敏度,达0.82;Lys单独筛查乳腺癌时有最高的特异度,达0.94;这14种氨基酸联合检测时能够提高乳腺癌的筛查效能,AUC为0.88,灵敏度为0.69,特异度为0.94.早期乳腺癌(TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期)患者血清Val水平高于晚期(TNM分期Ⅲ期和Ⅳ期)患者(P=0.044),其他19种氨基酸水平在早期和晚期乳腺癌患者之间差异均无统计学意义(P均>0.05).20种血清氨基酸水平在Luminal A型、Luminal B型、三阴性型、人表皮生长因子受体2(HER2)阳性型乳腺癌组间差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 乳腺癌患者血清中15种氨基酸水平与正常体检者相比存在差异,有助于乳腺癌筛查;14种在乳腺癌患者血清中升高的氨基酸的联合检测有利于提高乳腺癌筛查效能,是有潜力的生物学标志物.     

红景天苷药理作用的分子机制研究进展

红景天是生长于北半球海拔1 800~2 500 m高寒、干燥、缺氧、昼夜温差大、强紫外线照射、无污染环境中生命力旺盛的珍稀野生植物,是我国传统藏医临床中的常用药和国际公认植物适应原之一。明代李时珍《本草纲目》记载“红景天,本经上品,祛邪恶气,补诸不足,已知补益药中所罕见”。《现代实用本草》记载红景天的主要药理作用有中枢兴奋、抗疲劳、强心、抗炎、抗过氧化、抗微波辐射、降血糖等。红景天含有苷类、黄酮类、     

稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点突变的肝癌细胞株的建立

目的：建立稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点点突变（stathmin S25A）的肝癌细胞株。方法：采用PCR定点突变的方法构建stathmin S25A的重组质粒,并用酶切和测序技术鉴定突变结果;采用脂质体转染的方法,筛选建立stathmin野生型（wt）和突变型（S25A）的肝癌细胞HCCLM6,用Western blotting进行鉴定。结果：定点突变构建stathmin S25A的重组质粒,测序证实stathmin 25位丝氨酸突变为丙氨酸。将stathmin wt和S25A转染HCCLM6,筛选建立稳定表达的肝癌细胞株,Westernblotting检测发现stathmin pS25在stathmin S25A细胞中的表达较stathmin wt和对照组细胞明显下降（P〈0.05）。结论：建立了稳定表达stathmin S25A的肝癌细胞株,为研究stathmin位点磷酸化在肝癌发病中的分子机制提供实验模型。     

几种蛋白质含量测定方法的比较研究

目的 :为培养的肝细胞及神经元蛋白质含量测定选择最佳方案。方法 :采用三种较为常用的蛋白质含量测定方法 :Bradford、Lowry和Bio-radDC法分别对培养的小鼠肝细胞、神经元细胞的全细胞蛋白质提取样品进行测定 ,并对结果进行比较。结果 :蛋白质含量测定及重复性实验对比分析可见 ,用Bradford、Lowry和Bio -radDC法测定肝细胞蛋白质样品 ,结果均较稳定 ;测定神经元蛋白质样品 ,Bradford和Bio -radDC法较稳定 ,Lowry法不稳定。结论 :肝细胞蛋白含量测定宜采用Bradford法 ,神经元蛋白含量测定宜采用改良Bio -radDC法。     

槲皮素对LPS延迟中性粒细胞自发性凋亡效应的抑制作用

目的：研究槲皮素对接受细菌脂多糖(LPS)刺激的中性粒细胞(PMN)自发性凋亡的影响，探讨槲皮素的抗炎作用机制。方法：以人外周血PMN为研究对象，选择光镜和流式细胞术检测细胞凋亡情况，对裂解的片段化DNA进行定量(二苯胺测定法)和定性(琼脂糖凝胶电泳)分析。结果：槲皮素(1～100μmol／L)对PMN的自发性凋亡率并无影响，但却能部分恢复由LFS所延迟的PMN自发性凋亡进程。当槲皮素的浓度为40μmol／L时，其恢复作用达到最大。结论：槲皮素对LPS延迟PMN自发性凋亡的效应产生了抑制作用，减轻了因预激因子活化PMN而加重的炎症反应，部分揭示了槲皮素的抗炎作用机制。     

学生标准化病人在内分泌科实习岗前培训中应用的必要性分析

通过对岗前培训学生标准化病人开展内分泌科临床教学进行分析与总结,其作为临床教学改革的一种尝试,值得进一步应用和推广。     

CCKB受体诱发的小鼠神经元蛋白质磷酸化的研究

目的：从蛋白质可逆磷酸化修饰的角度初步勾勒出CCK_B型受体介导的胞内信号转导途径。方法:培养的小鼠大脑皮质神经元分为实验组、对照组和受体拮抗剂组，在无磷培养基加入 ［32P］-NaH₂PO₄标记细胞中的磷蛋白后，刺激组给予CCK₈（10^-7 mol/L），对照组加入等量的无磷培养基，受体拮抗剂组在分别加入CCK_A型、CCK_B型受体拮抗剂L364 718、L365 260以及L364 718＋L365 260，浓度均为10^-8 mol/L，孵育10 min后，再加入10^-7 mol/L CCK₈，37 ℃作用60 min，液氮中终止磷酸化反应。裂解细胞提取蛋白质，双向电泳分离，放射自显影7d后，获得磷酸化蛋白的放射自显影双向电泳图谱。采用PDQuest 2D分析软件对图谱进行差异分析，并在Swiss-Prot蛋白质数据库和自建磷蛋白数据库中查询定性。结果:CCK₈作用60 min后，小鼠神经元CCK₈信号转导相关磷酸化蛋白有：多种蛋白激酶、细胞信号分子、生长因子受体、转录因子等。加入L364 718后，神经元中PKCδ、P55G等的磷酸化水平降低，加入L365 260后， PKCα、PKGβ、OGFR、EGFR等的磷酸化水平呈现不同程度的降低，表明皮质神经元中CCK_B受体介导的信号转导更复杂。结论:CCK_A型、GGK_B型受体均可介导CCK₈在神经元的信号转导，但CCK_B型受体可能发挥了更重要的作用，其介导的信号途径可能包括：肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径、JNK途径、PI3K-PKB途径和cGMP-PKG途径。     

胰岛素及其受体在肾缺血再灌注损伤中的作用

目的　探讨肾缺血再灌注 (IR)过程中胰岛素及其受体的作用。方法　采用钳夹肾动脉的方法建造急性缺血再灌注肾损伤模型。将大耳白兔分为对照组、单纯缺血再灌注组 (IR组 )、胰岛素处理组 (Ins+IR组 ) 3组 ,Ins+IR组再灌注的同时给予胰岛素溶液 (Ins3U/ kg.wt) ,而对照组和 IR组则给予等量生理盐水。测定各组动物的血糖、血清胰岛素水平及肾组织胰岛素受体高、低亲和力常数 (Kd1 ,Kd2 )和高、低亲和力受体最大结合容量(Bmax1 ,Bmax2 )。结果　缺血再灌注 2 h后 ,3组动物血糖值、血清胰岛素水平均较术前显著升高 (P<0 .0 5 ) ,IR组尤为显著 ,IR组 Kd1 、Kd2 、Bmax1 、Bmax2 均较对照组显著降低 (P<0 .0 5 ) ,Ins+IR组仅 Bmax2 较对照组显著降低 (P<0 .0 5 ) ;4 8h后 ,3组动物血糖值恢复至正常水平 ,对照组胰岛素水平恢复至正常水平 ,IR组也较 2 h时明显下降(P<0 .0 5 ) ,但仍明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,3组动物 Kd1 、Bmax1 值无差异 ,Ins+IR组 Bmax2 仍维持较低水平 (P<0 .0 5 ) ,Ins组 Kd2 明显高于对照组 (P<0 .0 5 )。结论　在肾 IR过程中 ,内源性胰岛素的作用减弱 ,外源性胰岛素对肾组织高亲和力受体位点无下降调节作用 ,但胰岛素可引起低亲和力受体数目的下调。胰岛素减轻 IR肾损伤的作用主要是     

八肽胆囊收缩素刺激神经元所致信号转导中磷蛋白的动力学变化研究

目的 研究八肽胆囊收缩素（Octa—cholecystokinin，CCK8）刺激小鼠神经元所致信号转导中磷酸化蛋白的时间动力学特征。方法 培养乳小鼠神经元，随机分为CCK8刺激组和对照组，^32P-NaH2PO4标记后分别给予CCK8（10^-7mol／L）和等量无磷培养基，作用不同时间后液氮终止反应，经双向电泳、放射自显影，获得磷酸化蛋白质的电泳图谱。利用PDQuest 2D分析软件并结合Swiss—Prot蛋白质数据库对磷酸化蛋白质斑点进行分析并绘制出一些重要的磷酸化蛋白质磷酸化改变的时间动力学曲线。结果 CCK8作用不同时间后。神经元蛋白质磷酸化水平出现明显改变，通过对双向电泳图谱中100多个蛋白质斑点的定性分析，初步确定了小鼠神经元CCK8信号转导相关磷酸化蛋白包括多种蛋白激酶、磷蛋白磷酸酶、胞内信号分子、多种受体、转录因子及核蛋白等。对其中11种重要的信号分子动力学分析结果显示：曲线多数呈峰型，且蛋白质分子磷酸化达到峰值时间和高磷酸化状态持续时间各不相同，而PKAα表现为较持续的激活状态。MK07、GBOα仅则呈现双峰型。结论 CCK8在神经元的信号转导具有整合与复杂自适应控制的特征。     

个案追踪管理模式对乳腺癌化疗患者手足综合征的发生及患者生命质量、焦虑和抑郁的影响

目的 探讨个案追踪管理模式对乳腺癌（Breast Cancer,BC）化疗后患者手足综合征（Hand-Foot Sydrome,HFS）的发生及患者生命质量和焦虑、抑郁的影响。方法 选取某院2022年1—10月收治的乳腺癌新辅助化疗患者150例为研究对象,随机分为对照组和试验组,各75例。两组均接受相同化疗方案和常规护理,试验组同时采用个案追踪管理模式进行随访教育。结果 试验组HFS的发生率为26.67%,低于对照组的45.33%(P<0.05)。干预后试验组生理状况、情感状况、功能状况、附加关注4个方面均优于对照组（P<0.05）;干预后试验组抑郁得分低于对照组（P<0.05）。结论 采用个案追踪管理模式对乳腺癌化疗患者进行随访教育,能有效降低HFS的发生率和严重程度,改善患者生命质量和抑郁情绪。