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目的 高通量地筛选人卵巢癌相关的自然反义转录子,为深入研究自然反义转录子在卵巢癌发生、发展中的作用奠定基础.方法 以人正常卵巢组织和卵巢癌组织为材料,用RNase Ⅰ保护分析法分离出两种组织中的正-反义转录子双链RNA,经逆转录后用抑制性消减杂交特异性扩增两种组织间的差异片段,最后对差异片段克隆、测序.结果 分离出的两种组织的正-反义转录子经克隆和鉴定后,共获得20个测序结果,其中有3个分子与卵巢癌等肿瘤可能密切相关,说明该方法可用于肿瘤相关NAT分子的系统筛选,并为深入研究卵巢癌相关NAT分子提供了靶标. 相似文献
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盐酸青藤碱诱导EA.hy926细胞自噬及其在抗炎中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞EA.hy926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的EA.hy926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况;荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后EA.hy926细胞酸性小体变化情况。结果经终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理EA.hy926细胞后,与对照组比较,100μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08±0.05)上调(P<0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P<0.05)及EA.hy926细胞中酸性小体减少;盐酸青藤碱可抑制EA.hy926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导EA.hy926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一。 相似文献
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目的获得胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型抗独特型抗体(抗-Id),为研制针对MGd1的抗-Id重组胃癌瘤苗创造条件.方法分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA,经RT-PCR分别扩增抗体VH和VL DNA,进而连接形成ScFv DNA.将ScFv DNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库.以MGd1对文库进行4轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定.结果VH、VL和ScFv DNA分别约为340、320和750 bp.抗体ScFv文库经4轮筛选后,在随机筛检的40个克隆中得到17个呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆.在17个克隆中,有3个呈现β或γ型抗-Id ScFv.结论应用噬菌体抗体库技术成功制备了针对单抗MGd1的抗-Id ScFv,从而为筛选新的胃癌重组抗-Id瘤苗奠定了基础. 相似文献
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目前浅静脉留置针已广泛应用于临床,针对老年人具有独特的优势,老年患者血管弹性差,不充盈,脆性增加,皮肤松弛,输液过程中依从性差,病情复杂、变化快,并且在日常治疗中有时每日需多次注射。因此,使用静脉留置针可以减少患者反复穿刺的痛苦,如遇抢救,可避免穿刺耗费时间,为患者及时有效的用药,提高抢救成功率。延长浅静脉留置时间,不仅能为患者减轻痛苦,节约医疗费用,还能减少护理人员针刺伤的发生。自2019年1月至2019年4月,本科共使用浅静脉留置针近200人次,均使用一次性正压无针连接静脉留置针,留置人群多为危重及年老患者,留置时间为0-14d不等。不同护士留置静脉留置针方法及操作习惯均不相同,为了有效延长老年患者静脉留置针的留置时间,特从健康宣教、留置针的选择、血管及部位的选择、穿刺及送管方法等方面进行综述,以统一操作方法,从护理操作方面进行有效干预,以延长留置时间。 相似文献
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目的 制备人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation inducing ligand,sAPRIL)的两种突变体,为寻找APRIL 的竞争抑制剂创造条件.方法 采用一步反向PCR法,以人APRIL第186位甘氨酸(186G)和187位谷氨酰胺(187Q)残基为突变位点,构建如下两个突变体DNA,即sAPRIL突变体-1(mutant sAPRIL-1,msAPRIL-1)DNA(186G被赖氨酸残基K置换,187Q缺失)和msAPRIL-2 DNA(186G187Q置换为186K187G);测序后将两突变体DNA分别亚克隆于原核表达载体pQE-80L,继而在大肠杆菌DH5α中表达相应突变体蛋白,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定表达产物,经Ni2 -NTA和Sephadex G-75柱层析纯化相应突变体蛋白.结果 一步反向PCR结合DNA测序,得到了与上述设计一致的两个sAPRIL突变体DNA.将两突变体DNA分别亚克隆于pQE-80L后,在大肠杆菌DH5α中成功表达了相应突变体蛋白.经Ni2 -NTA柱层析成功地纯化了两突变体蛋白,经Sephadex G-75柱层析成功获得了两突变体蛋白的三聚体分子.结论 成功制备了sAPRIL的两种突变体蛋白,为寻找基于sAPRIL突变体的抗肿瘤分子奠定了基础. 相似文献
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目的:制备具有功能活性的重组小鼠高迁移率族蛋白B1(recombinant mouse high-mobility group box-1,rmHMGB1)并观察其抗菌活性,为深入研究HMGB1抗菌功能创造条件.方法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,经RT-PCR扩增得到编码小鼠HMGB1的cDNA片段,序列测定正确后,构建于原核表达载体pQE-80L,转化于大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达目的蛋白,再经Ni2 -NTA亲和层析柱纯化后,通过试管稀释法、琼脂扩散法两种抗菌实验观察并比较rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)、绿脓杆菌抗菌活性的差异.结果RT-PCR扩增得到了约648bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码小鼠HMGB1的cDNA序列一致,纯化后的rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为金黄色葡萄球菌>JM109>ATCC25922>DH5α,对绿脓杆菌则无抗菌活性.结论利用大肠杆菌可表达重组小鼠HMGB1,所获得纯化产物对部分细菌确有抗菌活性,此研究为进一步探讨HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础. 相似文献
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目的 研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对B类清道夫受体Ⅰ(scavenger receptor class B typeI,SR-BI)表达的调控.方法 FXR配体androsterone不同浓度处理Eahy926细胞,RT-PCR检测FXR特异靶基因小异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)表达量的变化.RT-PCR和Real-time PCR分析经androsterone处理后Eahy926细胞中SR-BI mRNA表达的变化.用Western blot检测SR-BI蛋白表达的变化.结果 经androsterone刺激,Eahy926细胞中SHP的表达明显升高,表明FXR被活化.在经androsterone刺激的血管内皮细胞中,SR-BI在转录水平和翻译水平,表达均显著上升.结论 FXR可在血管内皮细胞系Eahy926中上调SR-BI的表达水平.Abstract: Objective To investigate the effect of FXR on scavenger receptor class B type Ⅰ(SR-BI) expression.Methods Human vascular endothelium Eahy926 cells were treated with FXR agonist androsterone,and the specific target gene of FXR SHP mRNA was detected by RT-PCR. SR-BI mRNA and protein were determined using RT-PCR, real-time PCR and Westem blotting. Results The level Of SHP mRNA in Eahy926 cells increased after androsterone treatment at different concentrations for 24 h,demonstrating FXR activation in the cells.RT-PCR,real-time PCR and Western blotting detected increased SR-BI expression at both mRNA and protein levels after FXR activation.Conlusion FXR increases the expression of SR-BI in human vascular endothelium cells. 相似文献
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