Livin异构体基因沉默对肺腺癌SPC-A1 细胞化疗增敏效应研究

背景与目的 前期研究发现,凋亡抑制蛋白家族(IAP)新成员Livin尤其是Livinα,参与肺癌的发生发展,是肺癌细胞化疗耐药的重要机制之一.本研究的目的是利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在肺腺癌SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其对增加SPC-A1细胞化疗敏感性的不同作用及价值.方法 在SPC-A1细胞中稳定表达Livinα β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA(siRNA),体外实验用甲基偶氮唑蓝(MTT)法,研究Livin基因沉默后SPC-A1细胞对化疗药物的敏感性改变;体内实验利用荷瘤裸鼠模型,研究Livin基因沉默后荷瘤小鼠对顺铂的敏感性改变.结果 Livinα β、Livinα和Livinβ基因沉默后,SPC-A1细胞对顺铂、卡铂、环磷酰胺、阿霉素等多种化疗药物敏感性增加(P＜0.05),其中,Livinα β基因沉默能更有效增加肺癌细胞化疗敏感性(P＜0.01).动物实验表明,pSilencer-Livinα β组、pSilencer-Livinα组和pSilencer-Livinβ组抑瘤率分别为146.1%、130.7%、110.5%.结论 Livin异构体尤其是Livinα β可作为肺癌细胞化疗增敏的分子靶点,其基因沉默有望成为非小细胞肺癌基因治疗新手段.     

研究生分子生物学实验课的教学体会

分子生物学已成为21世纪生命科学领域的一个重要学科,分子生物学技术也随之成为医学研究和生命科学中普遍应用的手段和方法。分子生物学理论课教学内容多,范围广,有一定的深度和难度,如果不做实验,学生很难透彻理解和掌握。而分子生物学又是一门技术性很强的学科,因此,分子生物学实验课     

代谢型谷氨酸受体调节剂在颅脑损伤后应用研究进展

在全世界范围内,创伤性颅脑损伤（TBI）的高死残率在现代社会中严重威胁着人类生命及生活质量。颅脑创伤后可导致无数的代谢和生化过程,其机制复杂,兴奋性氨基酸的释放、炎性反应、氧自由基反应、脑缺血、C a2＋超载、缺血再灌注损害等病理性损害又进一步加重了脑损伤。多项药物治疗颅脑创伤的临床多中心随机双盲研究中包括激素、自由基清除剂、钙拮抗剂、谷氨酸（Glu）受体拮抗剂、生长激素／胰岛素样生长因子、缓激肽拮抗剂、抗癫痫药等,迄今为止还没有一种外源性药物被证实对TBI有确切的疗效［1］。随着对颅脑损伤的继发性损害机制及治疗认识的进一步加深,内源性神经保护机制成为治疗颅脑创伤关注的焦点［2］。     

Web Quest教学模式在临床本科生物化学教学中的应用

结合实践介绍了在临床医学本科生物化学教学中应用Web Quest模式如何组织教学的各个环节,指出此种模式有利于提高学生自主学习能力,培养能适应社会发展的新型医学人才.     

医学生物化学实验教学中存在的问题与改革措施初探

为了适应医学院校培养具有高素质专业性医学人才的需求,从教学实践出发,针对医学生物化学教学实验中存在的教学设施和教学方式落后、实验教学课时量不足、医学生对实验仪器或设备的操作不规范、探索性和综合性实验偏少以及成绩考核不合理等问题。提出通过加大生物化学实验教学力度的支持,改革教学模式;精选实验内容,合理安排课时量;将生物化学实验与临床相结合,培养学生职业和社会责任感;增加设计性和综合性实验,培养学生创新思维;建立合理的考核机制,提高实验教学质量等改革措施,有效地提高学生的积极性、动手能力和创新思维,为其他学科的实验教学改革提供参考。     

核因子-κB参与小鼠Hepcidin基因的转录调控

目的探讨核因子-κB（NFKB）参与Hepcidin基因急性时相表达转录调控的可能性及其分子机制。方法腹腔注射脂多糖（LPS）建立小鼠急性时相反应模型，检测Hepcidin表达与LPs的剂量效应和时间效应关系；电泳迁移率变动实验（EMSA）初步探讨NF-κB参与Hepcidin基因转录调控的可能性；构建NFicBp65亚基特异的小干扰RNA（siRNA）表达载体pAVU6＋27-NF-κB，DOTAP脂质体法瞬时转染小鼠原代肝细胞，观察NF-κB p65基因沉默后Hepcidin表达改变以及LPS诱导Hepcidin表达情况。结果Hepcidin表达与LPS注射剂量和时间呈正相关，50μg LPS注射后l0h，Hepcidin表达达到峰值。EMSA显示53～64bp位点出现明显的滞后带。NF-κBP65特异的SiRNA表达载体瞬时转染原代肝细胞后，基因沉默效率为50％～67％，转染细胞Hepcidin的表达水平明显下降，且并不能被LPS显著诱导。结论NF-κB参与Hepcidin转录调控，p65亚基是其上调Hepcidin基因表达的关键组分，53～64bp是p65亚基的作用位点。     

从肝脾组织快速分离核蛋白抽提物

目的 改进传统的从组织中分离核蛋白抽提物方法。使之简化，能在一般实验室开展应用。方法 先将肝脾组织制备成细胞液，再从细胞中快速分离核蛋白抽提物。结果 通过凝胶阻滞实验证实，用改进的方法所分离出的核蛋白抽提物与传统方法所分离出的核蛋白抽提物相比，得量相当，且具有能与DNA顺式作用元件结合的活性。结论 的改进方法与传统方法相比。具有简便、快速、不需要特殊食品设备等优点，适合在一般实验室应用，值得推广。     

对提高生物化学实验教学质量的体会

生物化学实验教学既是生物化学教学的重要内容，又是一种有效的教学手段，更是培养学员科学素质的重要环节，因此在生物化学教学中，实验教学的质量是极为重要的，必须予以高度重视。笔结合多年的教学实践，认为应重点抓好几点。     

多价CTL表位DNA疫苗研究进展

DNA疫苗把带有目的抗原基因的重组质粒转染到动物细胞中 ,使之在细胞内持续表达出天然的抗原物质 ,诱导强而持久的特异性细胞免疫及体液免疫应答 ,已经在感染性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤防治等多方面取得了令人鼓舞的成果 ,被誉为第 3次疫苗革命。近年来 ,T细胞识别机制及抗原加工提呈研究取得突破性进展 ,随着分子生物学及免疫学技术的日益成熟 ,大量CTL表位得以鉴定 ,为特异性细胞免疫治疗奠定了基础 ,构建DNA疫苗的基因也由整个目的抗原的编码基因转变为编码最基本的功能单位—表位的小基因[1] 。以CTL表位为基础的DNA疫苗已经…     

提高生物化学实验教学质量的几点尝试

生物化学是一门实验科学，必须重视提高实验教学的质量。笔在多年的教学实践中，做了以下几点尝试并取得了较满意的效果：1．充分发挥带教教员的主导作用；2．大力加强学员的技能培训；3．重视发挥学员的主体作用。