基于数据挖掘探讨中药治疗中晚期非小细胞肺癌的组方用药规律分析*

目的整理总结治疗中晚期非小细胞肺癌（NSCLC）用药规律，以期为中医中药抗肺癌治疗提供有益参考。方法收集中药治疗晚期NSCLC病例，对符合纳入标准的病例中使用的中药组方进行统计，运用SPSS 22.0统计软件对中药的频数、聚类规则进行分析，运用clementine 12.01统计软件对治疗NSCLC用药规律进行数据挖掘。结果共获得治疗NSCLC处方490首，其中涉及217味中药，总计出现频次4756次。统计出治疗NSCLC的常用药物为补虚药、清热药、利水渗湿药，并挖掘出最常用药对和药组搭配。结论对中晚期NSCLC的治疗具有补虚固本为主，瘀热痰毒互结的临床特点。数据挖掘对于临床用药的规律及特点的整理和归纳具有实用价值。     

青藤碱对PKC⁃α/NF⁃κB⁃p65通路的抑制作用及机制

目的：探讨过表达蛋白激酶C?α（protein kinase C?α,PKC?α）对HEK?293T细胞中核因子?κB?p65（nuclear factor?κB?p65,NF?κB?p65）磷酸化水平的影响,并检查青藤碱（sinomenine,SIN）对PKC?α/NF?κB?p65信号通路的抑制作用。方法：采用PCR技术扩增大鼠PKC?α基因蛋白质编码区（complete sequence coding,CDS）序列,将其插入到pIRES2?EGFP空载质粒中,构建野生型（wide type,WT）PKC?α过表达质粒（pIRES2?PKC?α?WT,PKC?αWT）;在PKC?αWT质粒的基础上,将PKC?α第25位丙氨酸（A）与368位赖氨酸（K）分别突变为谷氨酸（E）和精氨酸（R）,即构建持续活化（constitutively active,CA）突变型PKC?α过表达质粒（pIRES2?PKC?α?A25E,PKC?αCA）和显性负性（dominant negative,DN）突变型PKC?α过表达质粒（pIRES2?PKC?α?K368R,PKC?αDN）。本课题组前期构建的大鼠野生型NF?κB?p65过表达质粒（pIRES2?NF?κB?p65,p65WT）分别与上述各PKC?α过表达质粒共同转染HEK?293T细胞,免疫印迹法检测PKC?α、NF?κB?p65的表达及磷酸化水平。再将上述不同质粒转染HEK?293T细胞,46 h后予50 ng/mL SIN处理细胞2 h,再行免疫印迹实验分析SIN对PKC?α、NF?κB?p65磷酸化的影响。结果：菌液PCR及测序证实,上述PKC?α过表达质粒构建成功。在HEK?293T中过表达PKC?αWT或PKC?αCA可促进NF?κB?p65的磷酸化,且过表达PKC?αCA时尤为显著,而过表达PKC?αDN后NF?κB?p65的磷酸化无明显变化。SIN处理可抑制PKC?αWT、PKC?αCA和PKC?αDN转染组HEK?293T细胞中PKC?α的磷酸化,同时也能抑制过表达PKC?αWT上调的NF?κB?p65磷酸化修饰,但不影响过表达PKC?αCA和PKC?αDN对NF?κB?p65的磷酸化作用。结论：过表达PKC?α可促进HEK?293T细胞中NF?κB?p65的磷酸化,SIN处理HEK?293T细胞后可通过抑制PKC?α的磷酸化下调NF?κB?p65的磷酸化修饰。     

血小板活化指标在急性脑梗死疾病中的应用研究

目的探讨急性脑梗死患者脑梗死初期发生时血小板活化指标的变化规律。方法将115例急性脑梗死患者作为脑梗死组,30例该院同期体检健康者作为对照组。检测其血浆CD62P、溶血磷脂酸（LPA）及LPA相似磷脂水平。结果脑梗死组患者在发病24h内,CD62P、LPA、LPA相似磷脂浓度均显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。CD62P、LPA、LPA相似磷脂在ROC曲线下的面积：CD62P为0.95,LPA相似磷脂为0.969,LPA为0.972。根据ROC曲线,当CD62P临界值为26.78%时,诊断的敏感性为88%,特异性为87%;LPA相似磷脂临界值为5.32μmol/L时,诊断的敏感性为93%,特异性为93%;LPA临界值为3.12μmol/L时,诊断的敏感性为94%,特异性为94%。脑梗死组患者CD62P、LPA、LPA相似磷脂的相关分析显示,CD62P与LPA相似磷脂（r=0.221 9,P〉0.01）,CD62P与LPA（r=0.260 2,P〉0.01）无明显相关性;LPA与LPA相似磷脂（r=0.856 7,P〈0.01）呈显著正相关。结论急性脑梗死患者初期血小板活化明显,血小板活化指标CD62P、LPA、LPA相似磷脂可作为急性脑梗死发生初期诊断的辅助指标。     

抽取血液量减少时对凝血酶原时间检测结果的影响

目的分析抽取血量减少对有或无止凝血功能异常病人的凝血酶原时间检测结果的影响。方法挑选40例病人,其HCT在20-55%范围内,其中20例病人无止凝血功能异常病史,另20例病人止凝血功能异常。用一次性采血器采血后,注入到定量0.3mL枸橼酸钠抗凝管中,注入血量分别为2.7mL,2.4mL,2.1mL,检测其凝血酶原时间。结果无止凝血功能异常病人血量稍有减少对凝血酶原时间没有影响;抽取血量少到一定程度时,对结果有影响;有止凝血功能异常病人血量稍少时即对结果有影响。讨论病人进行凝血项目的检测,对抽血技术要求比较高,止凝血功能异常病人在抽血检测凝血项目时,采血一定要注意抽血量。     

急性脑梗死患者血清胱抑素C变化研究

目的 探讨伴有不同并发症的急性脑梗死(ACI)患者血清胱抑素C水平差异,为ACI临床防治提供客观依据.方法 测定并比较115例ACI患者和30例健康者血清胱抑素C水平.结果 单纯ACI患者及ACI合并高血压、糖尿病和(或)冠心病患者血清胱抑素C水平均高于健康者(P<0.05);ACI合并高血压患者与ACI合并高血压和糖尿病患者、ACI合并高血压和冠心病患者比较差异有统计学意义(P<0.05),与ACI合并糖尿病患者比较差异无统计学意义(P>0.05);ACI合并糖尿病患者与ACI合并高血压和糖尿病患者、ACI合并高血压和冠心病患者比较差异有统计学意义(P<0.05);ACI合并高血压和糖尿病患者与ACI合并高血压和冠心病患者比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 ACI患者均存在不同程度的肾损害,且损害程度与多种并发症有关.     

急性脑梗死辨证分型与血脂及胱抑素C的相关性分析

目的探讨血脂及胱抑素水平与脑梗死中医证型关系。方法对94例急性脑梗死患者进行中医分型,测定患者甘油三酯、总胆固醇、脂蛋白（α）[Lp（α）]、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白及胱抑素c（Cys c）,并与30例对照组进行比较。结果痰瘀阻络证、气虚血瘀证Lp（α）、载脂蛋白A1（ApoA1）、Cys c与对照组比较,有显著性差异;Lp（α）在各证型之间无显著性差异。ApoA1、Cys c在各证型之间型有显著性差异。结论 Lp（α）的升高与中风辨证分型无相关性;ApoA1、Cys c的水平变化与中风辨证分型有一定相关性,可为临床辨证分型提供一个参考依据。     

含人SOX18基因真核表达载体的构建及其重组蛋白诱导血管内皮细胞增殖的研究

目的：构建含人SOX（SRY related high mobility group box）18的重组表达质粒,并研究其对血管内皮细胞增殖能力的影响。方法：通过RT?PCR技术从血管内皮细胞中扩增SOX18编码基因序列,将其插入真核表达载体pSecTag?2B构建重组表达质粒pST?SOX18,分别转染人胚肾上皮细胞HEK293T和血管内皮细胞,通过免疫印迹技术检测SOX18的蛋白表达情况;进一步通过CCK?8实验检测SOX18对血管内皮细胞增殖能力的影响。结果：成功构建重组质粒pST?SOX18,重组蛋白能够在HEK293T和血管内皮细胞中表达;SOX18的过表达促使血管内皮细胞合成血管内皮生长因子（VEGF）,促进血管内皮细胞增殖。结论：SOX18重组蛋白能够促进血管内皮细胞增殖。     

大鼠补体C5a蛋白真核､原核表达载体的构建以及体外表达的鉴定､纯化和生物学活性分析

目的:构建带His标签的大鼠补体C5a蛋白真核表达载体pIRES2-EGFP-C5a和原核表达载体pET-21a-C5a,分别观察其体外表达情况,将C5a蛋白纯化后分析其生物学活性?方法:以RT-PCR方法从大鼠肝细胞中扩增出大鼠补体C5a基因全长cDNA序列,在序列的N端添加6个组氨酸His标签后,插入含增强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP,用脂质体法转染HEK293细胞,免疫印迹法检测C5a蛋白的表达水平;以真核表达质粒pIRES2-EGFP-C5a为基础,将大鼠补体C5a基因亚克隆至原核表达载体pET-21a,体外检测C5a蛋白的表达情况,之后再行Ni2+螯合亲和层析柱纯化C5a蛋白?以C5a刺激中性粒细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧的生成;C5a刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)不同时间,RT-PCR测定其产生IL-6和TNF-α的水平?结果:RT-PCR扩增出了大鼠补体C5a基因;并成功构建了pIRES2-EGFP-C5a重组质粒,体外成功转染入HEK293细胞,并在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,但免疫印迹法未能检出C5a蛋白的表达;另成功构建了pET-21a-C5a原核表达载体,并在体外用免疫印迹法检测到了C5a蛋白表达?另用亲和层析纯化得到了带His标签的C5a蛋白,证实C5a能促进中性粒细胞呼吸氧爆发?结论:成功构建了大鼠补体C5a真核和原核表达载体?构建的原核表达载体可测到C5a蛋白的表达,且C5a蛋白具有相应的生物学活性?     

Sysmex XT-2000i检测血小板直方图分布异常时仪器计数与手工计数的比较

目的出现血小板直方图分布异常时,仪器与手工镜检血小板计数的比较。方法选择Sysmex XT-2000i检测的血小板直方图分布异常样本127例,其中红细胞MCV<70fl的有50例,红细胞MCV>70fl的有55例,所有样本均用手工镜检计数。结果无论MCV<70n还是MCV>70fl,仪器与手工计数血小板均存在显著性差异。当MCV<70fl时,仪器计数高于手工计数值;当MCV>70fl时,仪器计数小于手工计数值。结论Sysmex XT-2000i在出现血小板直方图分布异常时,需用手工计数进行纠正以减少误诊。