大鼠野生型TRAF6基因和TRAF6 shRNA表达质粒的构建及鉴定

目的:构建大鼠野生型肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因及其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达和沉默TRAF6基因的情况?方法:用DNA重组技术将针对大鼠TRAF6基因的CDS区序列(加HA标签)和针对其不同位点所设计的3种shRNA序列分别克隆到pcDNA3.1及pGenesil-1/GFP真核表达质粒中?在酶切鉴定及序列测定正确后,用NeonTM电转仪,将上述质粒分别转染入培养的大鼠GMC中,然后用Western blot检查HA-TRAF6融合蛋白的表达情况,同时筛选最有效的TRAF6 shRNA?结果:限制性酶切及核酸序列分析确证,上述TRAF6基因过表达和shRNA表达质粒均构建成功?Western blot显示,构建的pcDNA3.1-HA-TRAF6质粒能在大鼠GMC中表达,且TRAF6 shRNA-1具有最佳的沉默效率?结论:本实验成功构建了大鼠野生型TRAF6真核表达质粒及其特异性的shRNA表达载体,这为今后进一步研究TRAF6基因的生物学功能提供了实验基础?     

《南京市献血条例》立法的实践与思考

近年来南京市无偿献血事业快速发展的同时,也出现了许多新问题、新情况,迫切需要一部新的地方性法规出台。新制定的《南京市献血条例》,在确立政府牵头的联席会议制度、献血点的规划设置、建立信息平台屏蔽高危人群、用血核销、献血者优惠政策等方面进行了创新。笔者认为,地方卫生立法要勇于突破部门利益束缚,积极回应卫生事业发展和人民群众健康诉求,强化法律实施和监督,使条例能真正地为地区采供血事业的发展服务。     

科华核酸检测系统的性能验证方法探讨与应用

设备系统性能验证是证实检测系统的基本分析性能符合临床要求,或者与厂商或文献提供的资料一致,才可以将检测系统用于常规检测工作.《血站技术操作规程》《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》都对系统的性能验证做出了规定和要求,目前核酸系统的性能验证没有统一的标准方法[1].我实验室对检测系统的测定下限、特异性...     

逐瘀胶囊治疗产后恶露不绝临床疗效观察

目的：探讨产后逐瘀胶囊治疗产后恶露不绝的临床效果.方法：将76例产后恶露不绝患者随机分为两组各38例,观察组采用产后逐瘀胶囊治疗,对照组采用生化冲剂治疗,7天为1个疗程,比较两组患者的临床症状改变情况、子宫复旧情况及安全性.结果：观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组治疗后出血时间、血量、腹痛等均较对照组差异明显（P＜0.05）;两组患者治疗后子宫三径均较治疗前减小,差异有统计学意义（P＜0.05）;在安全性方面,两组患者血、尿常规,肝肾功能等均无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：产后逐瘀胶囊治疗产后恶露不绝治愈率高,疗效确切,有利于子宫复原,且无明显毒副反应,有积极的临床意义.     

小鼠脑内星形胶质细胞体外培养方法的优化

目的： 优化小鼠脑内星形胶质细胞的体外培养方法,为星形胶质细胞的功能研究奠定实验基础。 方法： 取新生0～1 d的C57BL/6乳鼠大脑皮质,胰酶消化结合机械吹打方法,分离皮质细胞,制成细胞悬液并差速贴壁处理,待细胞接种24 h轻柔换液,以后每隔2～3 d换液,且每次换液前手动振荡洗涤2次,传代3次后,行胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫细胞化学染色及免疫荧光染色鉴定。 结果： 经过原代及传代培养,获得形态典型、纯度在95%以上的星形胶质细胞。结论： 优化后的体外培养星形胶质细胞方法,稳定有效,操作简便易行,并可获得高纯度的星形胶质细胞。     

浅谈HPV多重感染与宫颈病变的关系

目的：探讨HPV多重感染与宫颈病变的关系。方法：选择2010年1月-2012年12月于本院妇科门诊做宫颈液基细胞（LCT）检查的患者400例,予HPV DNA分型检测,比较分析不同类型宫颈病变组与HPV多重感染率的关系。结果：在314例HPV阳性患者中,多重感染者140人（44.6%）;HPV感染重数越多,感染比例越低,多重感染中以二重感染为主;除宫颈鳞癌外,病变级别越高,多重感染比例越大,且各病变组与正常组的差异较明显（P<0.05）。结论：HPV多重感染与宫颈病变有关,能促进宫颈病变甚至宫颈癌的发生。     

大鼠补体C5a蛋白真核､原核表达载体的构建以及体外表达的鉴定､纯化和生物学活性分析

目的:构建带His标签的大鼠补体C5a蛋白真核表达载体pIRES2-EGFP-C5a和原核表达载体pET-21a-C5a,分别观察其体外表达情况,将C5a蛋白纯化后分析其生物学活性?方法:以RT-PCR方法从大鼠肝细胞中扩增出大鼠补体C5a基因全长cDNA序列,在序列的N端添加6个组氨酸His标签后,插入含增强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP,用脂质体法转染HEK293细胞,免疫印迹法检测C5a蛋白的表达水平;以真核表达质粒pIRES2-EGFP-C5a为基础,将大鼠补体C5a基因亚克隆至原核表达载体pET-21a,体外检测C5a蛋白的表达情况,之后再行Ni2+螯合亲和层析柱纯化C5a蛋白?以C5a刺激中性粒细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧的生成;C5a刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)不同时间,RT-PCR测定其产生IL-6和TNF-α的水平?结果:RT-PCR扩增出了大鼠补体C5a基因;并成功构建了pIRES2-EGFP-C5a重组质粒,体外成功转染入HEK293细胞,并在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,但免疫印迹法未能检出C5a蛋白的表达;另成功构建了pET-21a-C5a原核表达载体,并在体外用免疫印迹法检测到了C5a蛋白表达?另用亲和层析纯化得到了带His标签的C5a蛋白,证实C5a能促进中性粒细胞呼吸氧爆发?结论:成功构建了大鼠补体C5a真核和原核表达载体?构建的原核表达载体可测到C5a蛋白的表达,且C5a蛋白具有相应的生物学活性?     

血站实验室新型冠状病毒相关检测平台的建立与安全防护

目的 建立适合血站实验室的新冠病毒相关检测平台,同时避免生物安全风险发生。方法 通过对自动加样器程序的修改,调整液体曲线,降低注液速度,进行液面下加样及混匀;编辑酶免分析仪方法及LIS程序;修改核酸汇集程序等方法建立自动化的新型冠状病毒相关检测平台。结果 该平台可实现新型冠状病毒肺炎康复者恢复期血浆的IgM与IgG抗体检测、IgG抗体效价自动倍比稀释检测及新冠病毒核酸自动化检测。结论 所建立的新型冠状病毒相关检测平台可实现自动化、标准化的加样与检测,避免生物安全风险,为恢复期血浆的临床治疗提供有利的检测手段。     

重度妊娠高血压疾患终止妊娠时机和方式的几点思考

目的分析重度妊娠高血压疾病患者终止妊娠的时机与方式。方法选取我院2011年12月至2012年12月间收治的150例重度妊高征患者作为研究对象,提取该组患者的临床资料,采用回顾性分析方法,观察和统计孕产妇并发症及新生儿窒息率和围生儿病死率。结果<34周分娩的新生儿窒息率、围生儿病死率最高,在34周以上的新生儿窒息率、围生儿病死率相对较低,二者相比数据差异具有统计学意义(P<0.05),各孕周间孕产妇并发症发生率大致相同,差异无统计学意义(P>0.05);阴道分娩组新生儿窒息率、围生儿病死率与剖宫产组更高,且其并发症发生率更高,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论重度妊高征终止妊娠选择36周后能降低新生儿窒息率、围生儿病死率和并发症的发生率,终止妊娠的最佳方式是剖宫产。     

大鼠IL-6基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其与C/EBP β结合位点的鉴定

目的:构建大鼠IL-6基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒并予鉴定,观察人胚肾细胞(HEK293)中过表达CCAAT/增强子结合蛋白 β(CCAAT/enhancer binding protein β,C/EBP β)对该质粒基因启动子活性的影响?同时,筛选C/EBP β与IL-6基因启动子区的结合位点?方法:采用PCR技术,扩增出大鼠IL-6基因启动子全长序列(-1 791~ +30 nt),将IL-6基因启动子插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中?将IL-6基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-IL-6-1)和大鼠野生型C/EBP β表达质粒(pIRES2-EGFP-C/EBP β)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,确定C/EBP β对IL-6基因的启动作用?另用生物信息学软件预测IL-6基因启动子上C/EBP β潜在的结合位点,并构建IL-6基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即pGL3-IL-6-2~5)?将上述IL-6基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和C/EBP β过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,筛选出C/EBP β的结合位点?结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功?将pGL3-IL-6-1和pIRES2-EGFP-C/EBP β共转染HEK293细胞发现,IL-6基因启动子活性显著增加?另将pGL3-IL-6-1?pGL3-IL-6-2~5和pIRES2-EGFP-C/EBP β共转染HEK293细胞后发现,pGL3-IL-6-5的启动活性显著低于其他组?提示C/EBP β可能结合在IL-6基因启动子的-618 bp~ -126 bp区域?结论:成功构建了大鼠IL-6基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出了C/EBP β在IL-6基因启动子上的结合部位?