RNA干扰及其在基因治疗研究中的应用

RNAi是1998年由Fire在丽线虫中首次发现并命名的一种转录后基因沉默机制[1 ] 。RNAi在多种生物中,包括植物、真菌、果蝇、线虫、锥虫及哺乳动物中都存在,是生物界一种古老、进化上高度保守的现象。RNAi的重要生物学意义在于它能监控异常的或外源的遗传物质在机体内的水平,从而调控基因的表达,使机体保持基因自稳。RNAi在真核生物中起着遗传监视器的作用。RNAi技术已经成为研究基因功能、新基因筛选、基因治疗和寻找药物靶点的重要工具。在基因治疗领域,RNAi为病毒感染、肿瘤以及其它很多疾病的治疗提供了新的治疗思路,应用前景极为…     

不同地理居群新塔花的ITS2和psbA-trnH序列及聚类分析

目的:分析18个不同地理居群新塔花的内转录间隔区(ITS)2和psbA-trnH序列,为其种质资源评价和基原药用植物遗传多样性分析提供参考。方法:试剂盒法提取新塔花基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增ITS2和psbA-trnH间隔区序列,双向测序,拼接,基于Kimura两参数模型(K2P)构建邻接法(NJ)系统发育树。结果:不同地理居群新塔花ITS2和psbA-trnH序列均有种内差异。ITS2序列长度平均为236 bp,检测有9个单倍型,遗传距离为0～0. 022,不同地理居群新塔花聚为两支,XTH3,XTH6,XTH9等10个地理居群聚为一支,XTH4,XTH5,XTH10等8个地理居群聚为另一支。除XTH6的psbAtrnH序列存在6 bp缺失外,其他地理居群的psbA-trnH序列长度均为355 bp,检测有4个单倍型,遗传距离为0～0. 023,不同地理居群新塔花聚为两支,XTH1,XTH3,XTH4等12个地理居群聚为一支,XTH14,XTH17,XTH18聚为另一支。基于ITS2+psbA-trnH组合序列的系统发育(NJ)树显示,不同地理居群的新塔花可分为两支,XTH11,XTH12,XTH16等12个地理居群聚为一支,XTH14,XTH17,XTH18聚为另一支。结论:不同地理居群的新塔花地理位置接近或相似,相对遗传距离较小,亲缘关系较为接近,说明不同地理居群新塔花的亲缘关系及其遗传多样性与地理位置相关。     

狼疮性肾炎并发社区获得性肺炎患者的抗感染用药监护

目的:分析临床药师参与狼疮性肾炎并发社区获得性肺炎患者抗感染用药监护。方法:对1例狼疮性肾炎并发社区获得性肺炎(重症)患者进行全程药学监护,协助医师制定抗感染药物治疗方案,并随病情变化作修正或调整。结果:莫西沙星和哌拉西林钠/他唑巴坦钠的联合用药,使患者的肺部感染得到及时有效控制,避免了潜在狼疮性肾炎复发或加重的危险。结论:特殊人群抗菌药物的选择,不仅要考虑抗菌谱、抗菌活性,还应结合患者的个体特征和药动学特性来做综合选择,可提高患者用药的安全性和有效性。     

输血信息管理系统在临床安全输血管理中的运用

探讨输血科安全输血质量管理智能化软件系统在临床安全输血管理的重要作用。输血科安全输血质量管理智能化软件系统与医院信息系统(HIS)、实验室信息系统(LIS)、临床合理用血评估与评价系统(TOP-A)共享,以实现临床安全输血管理的信息化。通过信息化管理,实现电子配血的临床应用,优化输血工作流程,减少人工干预,提高临床合理用血率,降低差错事故的发生。输血信息管理系统的运用使工作效率和临床合理用血水平大幅提高,差错发生率明显降低,血液有效利用率得到显著提升,电子配血流程及时发现患者二次血型不一致事件,可有效阻止ABO/Rh D系统不相容血液发放,杜绝输血安全事故的发生,确保临床用血安全。     

烟曲霉感染时NADPH氧化酶通过诱导活性氧活化巨噬细胞自噬

目的研究NADPH氧化酶(NOX)参与烟曲霉孢子诱导巨噬细胞自噬及其作用机制。方法取对数生长期的RAW264.7细胞,随机分为3组:以烟曲霉孢子刺激的处理组、烟曲霉孢子联合NOX抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)的处理组和无处理的空白组。细胞作用2 h后荧光显微镜观察细胞内二氯荧光黄亮度以检测活性氧(ROS)水平,免疫印迹法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达量,免疫荧光技术观察LC3的表达与定位。结果烟曲霉孢子刺激后RAW264.7细胞的ROS与LC3BⅡ表达水平显著升高,同时LC3呈斑点状聚集并与烟曲霉孢子共定位;以DPI抑制后ROS与LC3 BⅡ表达量与空白组相比无明显变化,并且LC3在细胞内弥散分布。结论烟曲霉感染时NOX通过产生ROS活化巨噬细胞自噬。     

黔南地区三种少数民族冠心病患者中医证型分布规律研究

目的：探讨黔南地区布依族、苗族、水族三种少数民族冠心病患者中医证型分布规律,为冠心病的防治提供依据。方法收集2011年12月—2014年12月在我院心内科就诊诊断为冠心病的患者801例,按民族分为布依族组274例,苗族组268例,水族组259例。分别对患者进行调查问卷和切脉,建立中医证型分布数据库,并进行统计分析。结果布依族组男女冠心病患者中医证型分布心与苗族组和水族组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）;苗族组与水族组间比较,差异也有统计学意义（P<0.05）。结论黔南地区布依族、苗族和水族冠心病患者中医证型分布存在一定的差异,在临床诊治中应予以关注。     

慢病毒介导shRNA沉默YAP基因对人前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡及其雄激素受体的影响

目的:探讨慢病毒介导sh RNA沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)基因对人激素依赖性前列腺癌细胞株LNCa P细胞增殖、凋亡及其雄激素受体(androgen receptor,AR)的影响。方法:3条针对YAP基因的sh RNA慢病毒干扰载体感染LNCa P细胞,经嘌呤霉素筛选后建立稳定感染细胞系,real-time PCR、Western blot分别检测感染后各组细胞YAP、AR m RNA和蛋白水平;选取沉默效果最佳sh RNA慢病毒干扰载体组,以细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成实验(colony formation)检测LNCa P细胞增殖能力;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测LNCa P细胞凋亡改变。结果:重组慢病毒成功感染前列腺癌LNCa P细胞,经嘌呤霉素筛选后感染效率达95%以上,获得稳定沉默YAP基因LNCa P细胞系。与空白对照组和阴性对照组比较,感染sh RNA慢病毒干扰载体各组中YAP、AR m RNA及蛋白表达水平明显下调(P=0.000),细胞增殖受到明显抑制(P=0.000),细胞凋亡明显增加(P=0.000)。结论:慢病毒介导sh RNA沉默YAP基因能有效下调YAP在LNCa P细胞中表达,并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;YAP可能作为AR配体参与AR信号通路的调节。     

通腑解毒汤联合血液滤过对重症急性胰腺炎患者炎症介质及疗效的影响

目的  探讨通腑解毒汤联合连续性静-静脉血液滤过（CVVH）对急性重症胰腺炎（SAP）患者肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的影响及临床疗效。方法  选择发病72 h的SAP患者40例,随机分为对照组和治疗组,每组20例。对照组予以西医常规治疗,治疗组在对照组的基础上加用中药通腑解毒汤联合CVVH治疗。比较两组治疗前及治疗72 h后IL-6和TNF-α的浓度;观察两组治疗前后生命体征、血气、生化指标、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHE Ⅱ）评分、Ranson评分等指标,判断患者整体病情。结果  治疗72 h后,治疗组IL-6、TNF-α浓度较对照组降低（P <0.01）,治疗组较对照组患者发热、呼吸窘迫等症状有不同程度的缓解,血清淀粉酶（AMY）、丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）下降（P <0.05）,平均动血压（MAP）逐渐上升,氧分压（PaO2）和氧合指数提高,肠麻痹时间、多器官功能障碍综合征发生率下降,平均住院日缩短（P <0.05）。治疗7 d后,治疗组较对照组APACHE Ⅱ评分、Ranson评分降低（P <0.01）,住院费用比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论  通腑解毒汤联合CVVH治疗SAP能清除部分促炎因子,减轻炎症反应,提高临床疗效,可作为SAP重要的辅助治疗措施之一。

     

江苏口岸常见蚊虫沃尔巴克氏体感染调查研究

目的调查江苏各口岸常见蚊虫中沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染情况及其系统发育关系,为基于Wolbachia的防控策略奠定基础。方法 2015年6-9月采用诱蚊灯法和二氧化碳诱捕法在江苏省苏州、常州、无锡、南京、南通、扬州、泰州、连云港、徐州和淮安10个口岸地区诱捕蚊虫,提取单只蚊虫的DNA,PCR扩增后检测蚊虫Wolbachia wsp基因,计算感染率;并对所有wsp基因进行测序及系统发育分析。结果共检测江苏省10个口岸地区的5种常见蚊虫,Wolbachia总感染率为26.80%,以尖音库蚊复合组感染率(47.81%)最高,其次为骚扰阿蚊(46.24%)、白纹伊蚊(34.06%)和三带喙库蚊(1.25%),而中华按蚊未见感染。这些蚊虫的Wolbachia wsp基因共享10个单倍型,其遗传距离在0.002~0.263之间。Hap-1、Hap-7、Hap-8、Hap-9和Hap-10为同种蚊虫所独有,而Hap-2、Hap-4和Hap-5在江苏不同口岸蚊虫中出现的频率较高,在2~3种蚊虫间共享。其中Hap-1和Hap-2属A大组Wolbachia,而其余单倍型属B大组Wolbachia。结论江苏各口岸常见蚊虫共携带2种Wolbachia,其在蚊虫种内、种间分布多样,基本掌握了江苏不同口岸蚊虫Wolbachia的感染情况,是将来基于Wolbachia特性对蚊媒及蚊媒病控制的关键。     

超前镇痛在小儿整形外科手术中的应用

目的:观察氟比洛芬酯与曲马多超前镇痛用于小儿整形外科术后镇痛效果及安全性。方法:小儿整形外科手术60例,随机分为三组。F组于麻醉诱导前缓慢静脉注射氟比洛芬酯1mg/kg,T组于麻醉诱导前缓慢静脉注射曲马多1.5mg/kg,C组缓慢静脉注射生理盐水2ml。观察术后0、1、4、8、12、24hVAS评分及躁动、恶心呕吐、异常出血、呼吸抑制等不良反应。结果:各时间点VAS评分:F组与T组在手术结束即时比较无明显差异,与C组比较评分较低有明显差异。其余各时间点比较F组低于T组,F组和T组低于C组,有明显差异。不良反应T组恶心呕吐高于F组与C组,有统计学意义,C组术后躁动率较F组与T组高,有统计学意义。结论:氟比洛芬酯与曲马多均能减少苏醒期躁动。氟比洛芬酯在整形外科小儿超前镇痛效果较曲马多好。