一氧化氮与肾脏疾病

一氧化氮（ＮＯ）是一种具有生物活性的无机分子，它在细胞间的信号传递及细胞防御和损伤方面起着重要的作用。同时，ＮＯ也是改变机体多个系统的病理生理性介质之一。本文将就ＮＯ的某些性状及与几种常见的肾脏疾病研究近况作一简介。１ＮＯ的产生及其生物学性状内源性Ｎ...     

5种免疫学指标综合判断肾炎与肾病综合征患者病变的临床意义

目的 探讨循环免疫复合物（CIC）、补体溶血总活性（CH50）、补体膜攻击复合体（SC5b-9)、抗核抗体（ANA）和抗双链DNA（AdsDNA)抗体在肾炎和肾病综合征患者病变中的临床意义。方法 用沉淀法、溶血法、夹心ELISA法和斑点免疫金银染色技术（Dot-IGSS)4种方法分别对45份正常人血清、56份慢性肾炎综合征和42份肾病综合征患者的血清进行检测。结果 SC5b-9升高检出率最高，敏感性显著高于CH50；慢性肾炎综合征患者ANA、AdsDNA阳性率显著高于肾病综合征患者。结论 检测上述几种免疫学指标对于慢性肾炎或肾病综合征的病情判断及鉴别诊断均有一定的价值。     

被动型Heymann肾炎脂质过氧化损伤及谷胱甘肽的防治作用

探讨人类膜性肾炎的致病因素及防治。方法 选用被动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎动物模型，定期观察实验大鼠血清，肾组织中超氧化物歧化酶和丙二醛含量的变化及还原型谷胱甘肽对它们的影响。结果 ＰＨＮ组实验４周，８周ＳＯＤ活性显著下降，ＭＤＡ含量明显上升，给ＲＧＴ处理后能显著减少ＭＤＡ的含量，减轻大鼠的蛋白尿，但对ＳＯＤ作用不著。     

翻转课堂在医学免疫学教学中的探索

为了研究翻转课堂教学模式在医学免疫学教学中的可行性及其效果,对超敏反应章节的教学进行了翻转课堂的实践,同时采用问卷调查和与学生座谈的方式对这种教学方法的效果进行分析。结果显示,学生普遍喜欢此种教学方法,并对其教学效果给予了较高的评价,认为翻转课堂能够激发学习兴趣,充分发挥自主学习的优势,促进学习中的沟通与交流。课堂实践表明,翻转课堂教学模式在医学免疫学的教学中有较高的应用价值。     

沉默GCN5或SOX9基因对Thy⁃1肾炎大鼠肾组织中TGF⁃β1生成的影响

目的：研究沉默大鼠肾组织中通用控制核苷酸合成5（general control nonderepressible 5,GCN5）基因、性别决定区Y框蛋白9（SRY related HMG box?9,SOX9）基因对Thy?1肾炎（Thy?1 nephritis,Thy?1N）大鼠肾组织内转化生长因子?β1（transforming growth factor?β1,TGF?β1）生成的影响。方法：分别用慢病毒（lentivirus,LV）包装GCN5和SOX9发夹状小干扰RNA（shRNA）,即制备LV?shGCN5和LV?shSOX9重组病毒。然后行大鼠肾动脉灌注术将LV?shGCN5和LV?shSOX9分别导入大鼠肾脏,再经尾静脉注射兔抗大鼠胸腺细胞抗血清（anti?thymocyte serum,ATS）复制Thy?1N模型。在注射ATS后3 h,取大鼠肾组织,用RT?PCR和Western blot检查各组大鼠肾组织中GCN5和SOX9的mRNA及蛋白表达水平,以验证干扰效果及GCN5、SOX9对TGF?β1产生的影响。结果：利用肾动脉灌注术将LV?shGCN5或LV?shSOX9重组病毒导入大鼠肾组织后,不仅能有效沉默相应的靶基因,而且还能下调TGF?β1的表达。结论：沉默大鼠肾组织中GCN5或SOX9基因后能显著抑制Thy?1N大鼠肾内TGF?β1的生成。     

青藤碱对PKC⁃α/NF⁃κB⁃p65通路的抑制作用及机制

目的：探讨过表达蛋白激酶C?α（protein kinase C?α,PKC?α）对HEK?293T细胞中核因子?κB?p65（nuclear factor?κB?p65,NF?κB?p65）磷酸化水平的影响,并检查青藤碱（sinomenine,SIN）对PKC?α/NF?κB?p65信号通路的抑制作用。方法：采用PCR技术扩增大鼠PKC?α基因蛋白质编码区（complete sequence coding,CDS）序列,将其插入到pIRES2?EGFP空载质粒中,构建野生型（wide type,WT）PKC?α过表达质粒（pIRES2?PKC?α?WT,PKC?αWT）;在PKC?αWT质粒的基础上,将PKC?α第25位丙氨酸（A）与368位赖氨酸（K）分别突变为谷氨酸（E）和精氨酸（R）,即构建持续活化（constitutively active,CA）突变型PKC?α过表达质粒（pIRES2?PKC?α?A25E,PKC?αCA）和显性负性（dominant negative,DN）突变型PKC?α过表达质粒（pIRES2?PKC?α?K368R,PKC?αDN）。本课题组前期构建的大鼠野生型NF?κB?p65过表达质粒（pIRES2?NF?κB?p65,p65WT）分别与上述各PKC?α过表达质粒共同转染HEK?293T细胞,免疫印迹法检测PKC?α、NF?κB?p65的表达及磷酸化水平。再将上述不同质粒转染HEK?293T细胞,46 h后予50 ng/mL SIN处理细胞2 h,再行免疫印迹实验分析SIN对PKC?α、NF?κB?p65磷酸化的影响。结果：菌液PCR及测序证实,上述PKC?α过表达质粒构建成功。在HEK?293T中过表达PKC?αWT或PKC?αCA可促进NF?κB?p65的磷酸化,且过表达PKC?αCA时尤为显著,而过表达PKC?αDN后NF?κB?p65的磷酸化无明显变化。SIN处理可抑制PKC?αWT、PKC?αCA和PKC?αDN转染组HEK?293T细胞中PKC?α的磷酸化,同时也能抑制过表达PKC?αWT上调的NF?κB?p65磷酸化修饰,但不影响过表达PKC?αCA和PKC?αDN对NF?κB?p65的磷酸化作用。结论：过表达PKC?α可促进HEK?293T细胞中NF?κB?p65的磷酸化,SIN处理HEK?293T细胞后可通过抑制PKC?α的磷酸化下调NF?κB?p65的磷酸化修饰。     

壳聚糖纳米化的结核杆菌ESAT-6和FL重组DNA疫苗对小鼠产生Th1和Th2型细胞因子的影响

目的:探讨壳聚糖纳米包被的结核杆菌早期分泌性抗原(6 kd early secretory antigenic target,ESAT-6) 与fms样酪氨酸激酶3配体 (fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FL)重组DNA疫苗接种C57BL/6小鼠对其Th1和Th2型细胞因子生成的影响?方法:制备壳聚糖(nano-chitosan,CS)纳米颗粒,然后用CS纳米粒包被本室构建的结核杆菌ESAT-6与FL重组质粒(nano-ESAT-6-FL)?ESAT-6质粒(nano-ESAT-6)?FL质粒 (nano-FL)和pIRES载体(nano-pIRES),并进行电镜和Western blot鉴定?此后将上述质粒分别接种小鼠,同时给小鼠接种未用壳聚糖纳米颗粒包被的上述对应质粒,并设PBS?CS纳米粒及BCG作为对照?接种后9周,取小鼠脾细胞进行培养,并用结核菌纯化蛋白衍生物 (purified protein derivatives tuberculin,PPD) 给予刺激72 h,然后用ELISA试剂盒检查小鼠脾细胞上清液中的Th1型细胞因子(IFN-?酌 ?IL-12)和Th2型细胞因子(IL-4?IL-10)的分泌水平?结果:成功制备出壳聚糖纳米包被的结核杆菌ESAT-6和FL重组质粒(包括其他几种质粒),并证实被壳聚糖纳米包被的质粒可在真核细胞中表达?用壳聚糖纳米包被的ESAT-6-FL重组质粒免疫小鼠,其脾细胞上清液中的IFN-?酌和IL-12水平显著高于未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他对照组,而IL-4和IL-10的水平与未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他实验组对照组相比均无明显升高?结论:壳聚糖纳米化的ESAT-6-FL重组质粒疫苗接种小鼠能够显著提高小鼠体内Th1型细胞因子的水平?提示用壳聚糖纳米包被结核杆菌ESAT-6-FL重组DNA疫苗能提高其细胞免疫效果?     

Dot—IGSS法检测SLE患者血清中抗肾小球基底膜及肾小管抗？…

方法；本实验采用斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法对５０例ＳＬＥ患者血清中的肾小球基底膜抗体（ＧＢＭ－Ａｂ）及肾小管抗体（Ｔｕｂ－Ａｂ）进行检测。结果：ＧＢＭ－Ａｂ阳性率达６２％，Ｔｕｂ－Ａｂ阳性率达７６％。与患者尿蛋白检查比较，上述自身抗体检出率较高。此外，ＧＢＭ－Ａｂ或Ｔｕｂ－Ａｂ检测阳性患者与肾活检诊为狼疮性肾炎（ＬＮ）相符率达１００％。结论：ＧＢＭ－Ａｂ或Ｔｕｂ－Ａｂ的检出可为临床早期     

Sublytic C5b⁃9刺激上调KLF4促进肾小球系膜细胞生成IL⁃23的作用

目的：研究转录因子KLF4调控sublytic C5b?9刺激肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）诱导促炎因子白介素?23（IL?23）生成的作用。方法：构建KLF4的短发夹状小干扰RNA（shKLF4）及过表达质粒（pIRES2?KLF4）。将pIRES2?KLF4或shKLF4 转染GMC后再行sublytic C5b?9刺激,用qPCR、Western blot和ELISA法检查沉默或过表达KLF4基因后对GMC产生IL?23的影响。此外,构建IL?23基因近端启动子全长质粒,行荧光素酶报告基因实验测定沉默或过表达KLF4基因后对IL?23启动子活性的影响。结果：①Sublytic C5b?9刺激GMC后能明显促进IL?23的生成,而沉默KLF4基因后,由sublytic C5b?9诱导GMC产生的IL?23明显减少,但过表达KLF4后IL?23的水平则显著增加。②Sublytic C5b?9刺激GMC能显著上调IL?23的启动子活性,而沉默KLF4基因后由sublytic C5b?9诱导的IL?23启动子活性明显降低,但过表达KLF4后又能显著升高IL?23的启动子活性。结论：Sublytic C5b?9刺激诱导IL?23的生成可通过其刺激上调转录因子KLF4的表达而实现。     

关于七年制医学微生物教学之探索：从病例讨论到主题讨论

PBL教学法在国内外的教学中得到了越来越广泛而且深入的应用。通过改变七年制微生物学传统的病例讨论教学模式,按照《PBL学习效果评价方法和标准》对学生进行调查,结果证明：PBL的主题讨论教学模式应用于教学后,更有助于激发学生学习的主动性和积极性,能够进一步完善学生的科学思维方式,从而获得较好的教学效果。