p27kip1和Spy1在肝癌细胞HuH7增殖过程中的表达变化及其相互关系

目的探讨p27kip1和Spy1在肝癌细胞HuH7增殖过程中的表达变化及相互关系。方法采用血清饥饿合并释放处理肝癌细胞株HuH7,通过流式细胞术检测该处理对HuH7细胞生长周期的影响;同时采用Western blot、免疫荧光技术检测不同生长状态的HuH7细胞中p27kip1和Spy1的表达及亚细胞定位情况;采用免疫沉淀方法检测HuH7细胞中p27kip1与Spy1的结合情况。结果血清饥饿造成HuH7细胞生长周期停滞,Spy1表达下降,p27kip1蛋白总量增加,差异有统计学意义（P〈0．05或〈0．01）。与此同时,p27kip1的阳性信号也由整个细胞分布转变为胞核高分布,而Spy1的阳性信号则由胞核高分布转变为胞浆高分布。血清释放后刺激细胞进入细胞周期,上述分子呈现相反的变化,且p27州的阳性信号在胞浆分布增强。结论Spy1可能通过与p27kip1结合来介导p27kip1的核内外分布并影响其表达,从而参与调控肝癌细胞的生长。     

术后不同镇痛方式对全髋置换术老年病人血液流变学的影响

老年病人多因近端股骨骨折或股骨颈骨折而行全髋置换术。由于老年人血管结构改变,代谢紊乱,手术刺激可致血管活性物质形成,因此常处于高凝状态并持续到术后;全髋置换术时,骨水泥单体的释放,更易诱发血栓形成和心脑血管意外,加之此类病人常需长期卧床,因而易发生术后深静脉血栓。血液流变学的改变在血栓形成中起重要作用,不同麻醉方法下全髋置换术病人术后血液流变学的变化已有报道,术后不同镇痛方式对全髋置换术老年病人血液流变学的影响尚未定论。本研究拟比较术后病人自控硬膜外镇痛(PCEA)和病人自控静脉镇痛(PCIA)对全髋置换术老年病人血液流变学的影响。     

SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,4-半乳糖基转移酶V后对鬼臼乙叉甙敏感性影响

目的:研究鬼臼乙叉甙(Etoposide,VP16)对表达β-1,4-半乳糖基转移酶V(beta-1,4-galactosyltransferaseV,β-1,4-GalTV)的SHG-44胶质瘤细胞死亡和凋亡的影响,为进一步探讨β-1,4-GalTV与化疗药物敏感性的关系奠定基础。方法:通过流式细胞仪(FCM)和Hoechst33258染色法,分析不同浓度的VP16处理转染了正义(GalTV-HA/SHG-44)、反义β-1,4-GalTV(GalTV-AS/SHG-44)和空载体(Mock)的SHG-44细胞后细胞的凋亡和死亡情况。结果:①低浓度的VP16(20μmoL/L)处理24h后,GalTV-HA/SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞的比例明显低于Mock组(t=4.5506,P<0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=5.0865,P<0.001)。GalTV-AS/SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞比例明显高于Mock组(t=3.2873,P<0.01)。高浓度的VP16(120μmoL/L)处理48h和72h后,GalTV-HA/SHG-44组死细胞所占比例明显低于Mock组t=3.3664,(P<0.05;t=5.4953,P<0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=3.1732,P<0.01;t=4.6035,P<0.001)。②MTT分析显示,VP16处理48,72h后,GalTV-HA/SHG-44组活细胞数明显高于Mock组(t=5.0783,P<0.05;t=3.8923,P<0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=4.5667,P<0.01;t=4.7849,P<0.001)。③VP16(20μmoL/L)处理24h后,用Hoechst33258染色。镜下观察到死亡或者凋亡细胞中的细胞核     

β-1,4半乳糖基转移酶Ⅴ在脊髓损伤过程中的表达

目的 探讨β-1，4半乳糖基转移酶-Ⅴ(β-1，4-galactosyltransferases Ⅴ，β-1，4-GAIT-Ⅴ)在正常和损伤脊髓组织中的定位及表达变化。方法 将56只SD大鼠随机分为7个实验组和1个对照组，实验组按Allen法制作急性脊髓损伤模型，并分别按伤后6、12、24、48、72h、7和14d取材。将用逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)扩增的β-1，4-GalT-Ⅴ片段克隆到pGEM-T载体中。体外转录合成地高辛标记的正、反义β-1，4-GalT-Ⅴ RNA探针。原位杂交分析β-1，4-GalT-Ⅴ mRNA在正常和损伤大鼠脊髓组织中的定位及表达变化。结果 β-1，4-GalT-Ⅴ在大鼠正常脊髓灰质中表达。脊髓损伤后12h表达明显增高，持续到72h表达下降，但仍明显高于对照组。结论 β-1，4-GalT-Ⅴ在脊髓灰质中表达，并在脊髓损伤后表达发生变化，提示β-1，4-GalT-Ⅴ在脊髓损伤中过程中起到一定作用。     

腹腔镜下子宫颈癌根治术的麻醉处理

目的探讨腹腔镜下子宫颈癌根治术的麻醉处理方法。方法 2007年3月~2009年12月21例腹腔镜子宫颈癌根治术采用气管插管静吸复合全身麻醉,术中监测有创血压（BP）、心电图（ECG）、经皮脉搏血氧饱和度（SpO2）、体温、呼气末二氧化碳分压（PETCO2）,检测血气、电解质和血糖（Glu）。右颈内静脉穿刺开放输液通路和监测中心静脉压（CVP）。机械控制通气,潮气量（VT）8~10 ml/kg,根据血气分析和PETCO2调整呼吸次数。术中维持血流动力学稳定,必要时应用血管活性药。术毕清醒拔除气管导管后返病房,术后行静脉自控镇痛。分别记录气腹前,气腹后1、2、3、4 h和放气后15 min的HR、MAP、CVP、气道压（Paw）、血气、电解质和测鼻咽体温。术后24 h及48 h采用视觉模拟评分法（visual analogue scale,VAS）行镇痛评分。结果均在腹腔镜下顺利完成子宫颈癌根治术。HR在气腹后3 h和放气后15 min较气腹前增快（P〈0.05）。MAP气腹前后无明显变化（P〉0.05）。术中1例应用阿托品,1例应用麻黄碱,2例应用艾司洛尔,1例应用乌拉地尔。CVP和Paw在气腹中各时间点均较气腹前升高（P〈0.01）,PETCO2、PaCO2气腹后3 h较气腹前升高（P〈0.05）。Hb在气腹后3 h、放气后15 min降低（P〈0.01）。Glu于气腹后3 h、4 h及放气后15 min高于气腹前（P〈0.05）,1例术中血糖超10 mmol/L,给予胰岛素治疗。体温在气腹后4 h和放气后15 min低于气腹前（P〈0.05）。气腹后4 h时2例血K＋分别高达5.0、5.4 mmol/L,行控制PaCO2和呋塞米利尿处理。术后24 h和48 h的VAS评分分别为2.4±0.7和2.8±0.9。结论腹腔镜子宫颈癌根治术,围术期须加强监测;加强呼吸系统管理,及时调整呼吸参数,避免高碳酸血症;维持血流动力学、血气、电解质和血糖的稳定,避免低体温;虽然是微创手术,但术后仍需加强术后镇痛,增加患者舒适度,促进恢复。     

低分子肝素预防合并糖尿病的腹腔镜手术患者围手术期静脉血栓形成的效果

目的 探讨合并糖尿病的腹腔镜手术患者应用低分子肝素(LMWH)预防围手术期深静脉血栓(DVT)的效果。 方法 将100例2型糖尿病腹腔镜手术患者随机分为2组,非LMWH组常规手术,LMWH组术后腹壁皮下注射低分子肝素。于手术前后取患者空腹静脉血,测定血小板功能(PLT、MPV、PCT、CD62p、vWF),凝血-纤溶功能(PT、APTT、Fib、AT-Ⅲ、t-PA、PAI-1)及血液流变学指标(全血粘度、血浆粘度、HCT、RBCAI);并以50例非糖尿病腹腔镜手术者为对照组行对比分析。 结果 非LMWH组下腔DVT发生率高于LMWH组和对照组(P＜0.05),LMWH组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05)。术前,非LMWH组和LMWH组之间PLT、MPV、PCT、CD62p、vWF、全血粘度、血浆粘度、HCT、RBCAI、Fib、AT-Ⅲ、PAI-1、t-PA水平差异均无统计学意义(P＞0.05),且AT-Ⅲ与t-PA低于对照组,其他指标高于对照组(P＜0.05)。术后3组AT-Ⅲ与t-PA降低,且非LMWH组低于LMWH组,LMWH组低于对照组;其他各项指标升高,且非LMWH组高于LMWH组,LMWH组高于对照组,其组间差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论 糖尿病患者血小板、血液流变学及凝血-纤溶参数异于常人,腹腔镜术后DVT发生率高,低分子肝素可起到预防效果,具有较高的应用价值。      

足叶苦素抑制胰岛素样生长因子Ⅰ受体表达对肝癌细胞增殖与运动的影响

目的 观察足叶苦素(PPP)抑制胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-IR)后对肝癌细胞增殖和运动的影响. 方法 体外培养肝细胞L02和肝癌细胞(Bel-7404、Bel-7402、HepG2和Huh-7),以Western blot分析IGF-IR表达,以磺酰罗丹明B法分析细胞活性;在PPP抑制IGF-IR后,以流式细胞术分析细胞周期,以AnnexinV-FITC法分析细胞凋亡;在z-VAD-FMK抑制caspases后,以均质发光法检测caspase-3/7活性;划痕试验分析细胞运动能力.对数据进行析因设计方差分析,采用t检验或one-way ANOVA法进行组间比较.结果 肝细胞L02中几乎检测不到IGF-IR,各肝癌细胞中IGF-IR呈不同程度表达.PPP抑制肝癌细胞增殖呈时间和剂量依赖性,经1.0μmol/L PPP处理HepG2细胞24h,G1、S期和G2/M期细胞比例分别为2.1％±0.4％、11.0％±0.7％和87.1％±0.6％,且划痕不愈合;caspase-3/7活性显著增加(t=11.83,P＜0.01);HepG2细胞凋亡率为16.4％±0.4％,明显高于对照组的5.8％±0.2％ (t=14.05,P＜ 0.01);z-VAD-FMK抑制caspases表达,HepG2细胞凋亡率为11.3％±0.7％,明显高于对照组的5.8％±0.2％ (t=11.83,P＜0.01). 结论 IGF-IR表达与肝癌细胞增殖、运动和凋亡相关,可能是肝癌分子靶向治疗的有效靶点.     

肥胖症患者腹腔镜胃减容术中二氧化碳气腹对呼吸循环功能的影响

目的 评价全麻腹腔镜袖套式胃减容术治疗病态性肥胖时二氧化碳气腹对患者呼吸和循环功能的影响.方法 2006年12月至2009年6月对18例肥胖患者行择期腹腔镜袖套式胃减容术,平均体重（102.3±27.1）kg,平均体重指数（BMI）37.2±6.1,ASA Ⅰ～Ⅱ级.均选择气管插管全身麻醉,术中控制呼吸,调整呼吸频率（RR）和潮气量,控制呼气末CO2分压（PETCO2）在35～40mmHg,外科医生根据手术视野暴露情况调整气腹压力于10～15cmH2O.观察18例患者麻醉前、气腹前、气腹后5min、30min、1h、2h和放气后5min时的BP、HR,记录上述除麻醉前外的各时点的Ppeak、PETCO2,并于相应时间点抽取桡动脉血进行血气分析测定PaO2、PaCO2、pH、SBE,通过血气分析和监测结果计算出VCO2、A-aDO2、Pa-PETCO2.结果 SBP与麻醉前相比在气腹前降低,在气腹后30min、气腹后1h时升高（P〈0.05）;Ppeak在气腹后5min、30min、1h、2h与气腹前相比均有明显增高（P〈0.01）;PETCO2和PaCO2在根据监测适时调整呼吸参数的情况下各时点相比均无明显差异;PaO2与气腹前相比,气腹后各时点均有所降低（P〈0.05）;A-aDO2在气腹后5min、30min、1h时增大（P〈0.05）;VCO2在气腹后各时间点均有明显升高,且逐渐增大（P〈0.05）;Pa-PETCO2在气腹后30min与气腹前相比有增大（P〈0.05）.结论 腹腔镜袖套式胃减容术的肥胖患者,气腹使Ppeak明显升高,O2在肺部的交换减少,VCO2增大,但在合理调整呼吸参数的情况下,能维持血流动力学、PETCO2、PaCO2在正常范围.     

正、反义β1,4半乳糖基转移酶-V表达质粒的构建

目的 :探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 -V (β -1,4-GalTV)表达水平的生物学意义 ,构建正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。方法 :设计 β -1,4-GalTV全长引物 ;提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到全长 β -1,4-GalTV基因片段 ,将其克隆到 pGEM -T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将 β -1,4-GalTV全长序列克隆到 pcD NA 3 .1表达载体中。设计反义引物 ,以pGEM -β -1,4-GalTV质粒为模板 ,将PCR产物克隆到 pcDNA 3 .1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,得到了正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。 结论 :正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β -1,4-GalTV表达水平的生物学意义奠定基础。     

阿扎司琼和氟哌利多预防腹腔镜胆囊切除术后恶心呕吐的效果观察

目的观察阿扎司琼和氟哌利多对腹腔镜胆囊切除手术(LC)患者术后恶心呕吐(PONV)的预防作用。方法150例ASAⅠ~Ⅱ级LC患者随机分为3组,每组50例,全麻诱导前静脉注射C组生理盐水2ml,B组氟哌利多5mg和A组阿扎司琼10mg。观察3组患者手术结束后0~4小时、5~8小时、9~24小时、25~48小时各时段恶心、呕吐和48小时内头痛、头晕、嗜睡和锥体外系症状的发生情况。结果3组中A组PONV的发生率最低(P<0.05),B组次之;头晕发生率B组明显高于C、A两组(P<0.05),头痛发生率B组高于C组(P<0.05),C、A两组间无显著性差异,嗜睡的发生率B组高于C组。结论阿扎司琼10mg和氟哌利多5mg静脉注射能明显减少LC患者PONV的发生率,但阿扎司琼10mg效果更佳,不良反应少;使用氟哌利多5mg会增加头痛、头晕、嗜睡的发生率。