Prdx1、Spy1、p27kip1蛋白在肝细胞肝癌中的表达及其相关性*

目的：探讨Prdx1、Spy1、p27kip1蛋白在肝细胞肝癌中的表达及相关性。方法：应用Western blot及免疫组化检测肝癌及相应的癌旁组织中Prdx1、Spy1、p27kip1的表达；免疫共沉淀分析Prdx1、Spy1的相互作用；Western blot分析Prdx1、Spy1相互结合对p27kip1蛋白表达的影响。结果：Prdx1、Spy1在肝癌组织及肝癌细胞中高表达，与p27kip1表达呈负相关；Prdx1、Spy1相互结合使p27kip1的表达水平下调，此作用与Prdx1的抗氧化物活性无关。结论：Prdx1、Spy1蛋白的表达与肝细胞肝癌的发生发展有关，两者的表达可能在肿瘤的恶性进展中起协同作用，而与p27kip1的表达呈拮抗作用。     

p27kip1的亚细胞定位对卵巢癌细胞周期的作用研究

目的 :研究卵巢癌中抑癌基因p27kip1蛋白在不同细胞周期中的亚细胞定位及表达形式,分析其对卵巢癌细胞周期调控的作用机制。方法:以人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,用血清饥饿法同步细胞周期,采用免疫荧光法测定不同细胞周期中p27kip1、p-Ser10p27kip1蛋白的表达定位情况,并用Western Blot法检测p27kip1、p-Ser10p27kip1在不同细胞生长周期的表达。结果:在G0/G1期卵巢癌细胞中,p27kip1定位表达于细胞核,发挥抑制细胞周期的活性的作用。在S期细胞中,p27kip1以p-Ser10p27kip1的形式存在于胞质中。p27kip1的表达水平随着血清释放的时间延长而逐渐减少。p-Ser10p27kip1表达水平随着血清释放的时间延长而逐渐增加。结论:p27kip1定位于卵巢癌细胞核,抑制细胞周期活化,并以磷酸化的形态转移出核,丧失抑癌活性。     

血清饥饿释放过程中Raji细胞内Skp2与p27kip1的表达变化及意义

目的:探讨血清饥饿释放过程中淋巴瘤细胞株Raji细胞内Skp2与p27kip1的表达变化及意义。方法:采用免疫沉淀方法检测Raji细胞中p27kip1与Skp2的结合情况;采用血清饥饿合并释放同步化处理Raji细胞,经WesternBlot技术检测该过程中p27kip1、Skp2在Raji细胞中的表达变化。结果:免疫沉淀结果显示在Raji细胞中p27kip1与Skp2能够相互结合。在Raji细胞血清饥饿释放过程中,Skp2蛋白总量增加,p27kip1蛋白总量减少。结论:在Raji细胞血清饥饿释放过程中Skp2合成增加,可能通过加快p27kip1的泛素化降解而使细胞中p27kip1显著减少,从而推动了细胞周期的进程。     

外源性p27kip1基因表达对人肝癌细胞生长抑制作用

目的: 研究p27kip1基因对人肝癌细胞的生长抑制作用. 方法: 采用可诱导性真核表达载体pMD-kip1,脂质体转染法将p27kip1全长cDNA转入肝癌细胞系HCC-9204中,通过外加Zn离子诱导目的基因的表达. 免疫印迹分析及RT-PCR检测p27kip1基因在蛋白质和mRNA水平上的表达;细胞活力实验检测转染p27kip1基因对细胞增殖的作用;并将转染的肝癌细胞接种于裸鼠皮下,观察该肿瘤细胞的致瘤情况. 结果: 转染p27kip1的HCC-9204细胞在mRNA和蛋白质水平均显p27kip1高表达. 细胞活力检测显示在外加Zn离子48 h后,细胞生长被抑制35%;转染p27kip1的HCC-9204细胞在裸鼠体内的致瘤能力明显下降[(0.62±0.12) vs (1.31±0.17), P<0.01 )]. 结论: 外源性p27kip1基因表达能够抑制人肝癌细胞的恶性增殖和致瘤性.     

卵巢癌细胞中RNF123对p27Kip1蛋白稳定性的调控作用

目的:研究卵巢癌细胞中RNF123对p27Kip1蛋白稳定性的调控作用?方法:流式细胞分析仪测定血清饥饿释放过程中SKOV3细胞的周期分布情况,利用Western blot检测该过程中干扰RNF123前后p27Kip1蛋白的表达水平?在SKOV3细胞中转染sictrl和siRNF123,Western blot检测p27Kip1的半衰期?结果:SKOV3细胞血清饥饿48 h,SKOV3细胞周期阻滞在G1/G0期,而血清释放后S期显著增加?在此过程中,p27Kip1表达下调?转染siRNF123组相较于sictrl组,p27Kip1蛋白水平增高?降低RNF123表达后,p27Kip1的半衰期延迟?结论:在卵巢癌细胞中降低RNF123的表达能抑制p27Kip1的降解?     

FOXO3a在三氧化二砷诱导肝癌HepG2细胞周期阻滞中的作用

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对肝癌HepG2细胞增殖的影响及其与细胞周期素依赖性激酶抑制剂（CDKI）p27kip1和p27kip1相关蛋白FOXO3a的关系。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2经2μmol/L As2O3处理72 h,用流式细胞仪检测细胞周期变化,并采用核浆分离、Western blot技术及细胞免疫荧光技术检测该过程中p27kip1和FOXO3a在HepG2细胞中的表达变化和亚细胞定位情况。结果与对照组比较,As2O3使HepG2细胞周期阻滞在G2/M期,并诱导凋亡。As2O3作用后,HepG2细胞的p27kip1蛋白和FOXO3a蛋白总量也增加,并且p27kip1的表达变化与FOXO3a的表达水平高低及核-胞浆易位相关。结论 As2O3可能通过上调FOXO3a的表达影响p27kip1基因的转录,从而调控肝癌细胞的增殖。     

p27kip1在胃癌中的表达和意义

目的 探讨p27kip1（细胞周期素依赖性激酶抑制因子）在胃癌中表达及其与胃癌临床病理学特征的关系。方法 采用免疫组织化学方法检测p27kip1在60例胃癌组织原发灶和淋巴结转移灶中的表达。结果 p27kip1在胃癌的阳性表达率为43．33％（26／60）,阳性细胞定位于细胞浆,在高分化及Ⅰ,Ⅱ期胃癌高表达（P＜0．05）,且与淋巴结转移密切相关（P＜0．01）。结论 p27kip1表达与胃癌组织分化程度、淋巴结转换呈负相关;p27kip1表达对估计胃癌预后有一定意义。     

急性髓细胞白血病中p27kip1的表达及临床意义

目的探讨急性髓细胞白血病中p27kip1的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测37例急性髓细胞白血病及10例正常对照者骨髓中p27kip1蛋白的表达情况,并结合临床病历资料进行分析。结果p27kip1蛋白在急性髓细胞白血病的阳性表达率为29．7％,正常对照组表达率为70．0％,二者比较差异有显著性（P〈0．05）;在34例接受化疗的急性髓细胞白血病中,p27kip1阳性表达组化疗后的缓解率（81．8％）高于p27kip1表达阴性组的缓解率（43．5％）,差异有显著性（P〈0．05）。结论p27kip1在急性髓细胞白血病患者中存在异常表达,且其蛋白的表达水平可能会影响化疗疗效。     

靶向下调SGTA抑制肝细胞肝癌细胞周期及细胞增殖

目的 :研究靶向下调小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α抗体(small glutamine-rich tetratricopeptide repeatcontaining protein alpha,SGTA)的表达对肝癌Hu H7细胞周期及细胞增殖的影响。方法:选择Hu H7细胞系作为研究对象,进行血清饥饿释放同步化处理后采用Western Blot方法检测SGTA蛋白表达水平变化;通过SGTA特异性si RNA下调Hu H7细胞中SGTA的表达,采用细胞计数盒8(cell counting kit 8,CCK8)、流式细胞术等方法检测细胞增殖能力及细胞周期。结果:血清饥饿使Hu H7细胞生长周期停滞,血清释放后刺激Hu H7细胞增殖,Western Blot显示SGTA﹑增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白随着细胞周期的进展表达增加,而细胞周期负性调控因子p27kip1蛋白表达却下降。SGTA缺失可引起cyclin A、cyclin B的表达下降、细胞增殖的下降以及细胞周期的阻滞。结论:SGTA特异性si RNA能明显抑制肝癌Hu H7细胞的增殖,细胞周期阻滞,提示其可为肝癌的靶基因治疗提供新的分子靶点。     

p27kip1与肝癌细胞增殖和凋亡的关系

目的: 探讨p27kip1对肝细胞癌增殖和凋亡的影响. 方法: 利用DNA缺口末端标记技术(TUNEL)检测52例肝细胞肝癌(HCC)组织中的凋亡细胞,同时采用免疫组织化学方法检测p27kip1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达. 结果: 在包膜受侵犯者及低分化的肝癌组织中p27kip1蛋白表达和凋亡指数明显降低,而PCNA的表达却明显增高(P<0.05). 进一步的观察显示,在p27kip1高表达的HCC中其凋亡指数(0.56±0.27)明显高于低表达组(0.39±0.21, P<0.05),而PCNA的阳性指数却显著降低(29±7 vs 33±5, P<0.05). 结论: 随着HCC恶性程度的增高,p27kip1基因的表达降低,提示p27kip1蛋白表达降低可能是导致肝癌细胞的过度增长和凋亡机制缺陷的因素之一.     

外源性p27Kip1基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响

目的：探讨外源性p27Kip1基因对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响。方法：应用脂质体转染法将含人野生型p27Kip1基因质粒DNA转染乳腺癌MCF-7细胞,免疫细胞荧光化学方法验证p27Kip1基因转染MCF-7细胞后蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,观察外源性p27Kip1对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。结果：免疫细胞荧光化学方法证实p27Kip1基因转染MCF-7细胞后存在蛋白表达;流式细胞仪检测结果提示,细胞周期出现G0/G1期阻滞;细胞计数法绘制细胞生长曲线显示细胞增殖明显抑制。结论：外源性p27Kip1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和细胞周期有明显抑制作用。     

腺病毒介导的p27kip1基因转移对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 :研究p2 7kip1基因转移对食管癌的体内、外抑制作用 ,并探讨其抑癌机制。方法 :①构建携带人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 (Ad p2 7kip1) ;②将Ad p2 7kip1转染人食管癌细胞Eca970 6 ,MTT法、3 H TdR和3 H Leucine掺入试验检测对细胞增殖的影响 ,流式细胞仪 (FCM)、DNA片段分析检测对细胞周期和凋亡的影响 ,TRAPPCR -ELISA法检测端粒酶活性 ,免疫细胞化学法及Westernblotting法检测p2 7kip1和Survivin的表达 ;③Ad p2 7kip1直接注射入人食管癌裸鼠移植瘤中 ,观测抑瘤效应 ,并检测p2 7kip1和Survivin的表达。结果 :①Ad p2 7kip1转染食管癌细胞后 ,细胞增殖明显受抑制 ,G0 /G1期细胞比例增加 ,并出现明显的亚二倍体凋亡峰和特征性的凋亡梯状条带 ,细胞端粒酶活性降低 ,p2 7kip1表达增强 ,Survivin表达降低 ;②采用p2 7kip1基因治疗 ,食管癌裸鼠移植瘤生长明显受抑制 ,肿瘤生长抑制率达 6 4 .1% ,移植瘤中p2 7kip1表达增强 ,Survivin表达降低。结论 :p2 7kip1基因转移对食管癌具有较显著的体内、外抑制作用 ,其机制是增强p2 7kip1表达、抑制Survivin表达 ,使细胞产生G1期阻滞 ,抑制端粒酶活性 ,并诱导凋亡 ,表明该基因疗法是食管癌治疗的新途径。     

p27~(kip1)和Cyclin E在子宫内膜癌表达的临床病理意义

目的 :研究 p2 7kip1和 Cyclin E在子宫内膜癌组织的表达以及与临床病理参数的关系 ,探讨其在肿瘤发生、发展及预后的意义。方法 :采用免疫组化 S- P法检测 p2 7kip1和 Cyclin E在正常子宫内膜 ( 8例 )、子宫内膜不典型增生 ( 8例 )和子宫内膜癌 ( 5 2例 )组织中的表达。结果 :1 p2 7kip1和Cyclin E阳性表达主要定位于细胞核 ,与正常子宫内膜和内膜不典型增生组织相比 ,p2 7kip1在子宫内膜癌的表达明显下降 ,Cyclin E明显上升 ,差异具有显著性 ,在内膜癌中 p2 7kip1与 Cyclin E蛋白表达呈负相关 ( r=- 0 .30 2 6,P<0 .0 5 )。 2 p2 7kip1和 Cyclin E蛋白表达与内膜腺癌组织学分化程度和肿瘤肌层浸润程度或有无淋巴结转移有关 ,与病理类型无关 ;Cyclin E表达高低也与临床分期和 5年生存率有关。结论 :p2 7kip1表达降低和 (或 ) Cyclin E过度表达与子宫内膜癌的发生发展有关 ,Cyclin E可作为判定内膜癌预后的指标     

p27kip1基因转染增强放射抗拒人食管癌细胞的放射敏感性

目的研究腺病毒介导的p27kip1基因转染对人放射抗拒食管癌细胞放射敏感性的影响。方法以重组腺病毒介导的p27kip1基因转染人放射抗拒食管癌细胞EC9706R,免疫细胞化学法检测p27kip1表达;流式细胞仪检测转染前后肿瘤细胞周期,克隆形成实验检测p27kip1基因转染前后两种EC9706R细胞的放射敏感性。结果腺病毒转染后放射抗拒食管癌EC9706R细胞p27kip1表达明显升高,细胞周期结果显示G0/G1期阻滞;转染p27kip1前后放射敏感性参数检测结果比较:转染前EC9706R细胞SF2=67.4%,Dq=1.66 Gy,转染后SF2=49.7%,Dq=1.03 Gy,放射增敏比SERSF2、SERDq分别为1.36,1.61,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p27kip1基因转染能增强人放射抗拒食管癌细胞的放射敏感性。     

p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

目的 探讨外源性 p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义.方法 应用脂质体介导法分别将构建的plRES-p27~(waf1)、p27~(kip1)、pIRES-p21~(waf1)-p27~(kip1)真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,未转染组、转染空质粒组细胞做对照,Western免疫印迹法验证转染前后p21~(waf1)、p27~(kip1)基因蛋白表达情况;噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化;免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况.结果 Western免疫印迹法证实p27~(waf1)、p27~(kip1)、p27~(waf1)基因转染24 h后,其蛋白表达量明显增多(P<0.01),与对照组比较,各转染实验组细胞生长明显受抑制(P<0.01),细胞周期大部分停滞于G1期,各实验组G.期和S期细胞比例依次为:(69.52±3.21)%、(18.38±2.51)%,(60.83±3.02)%、(24.52±1.89)%,(78.37±2.83)%、(15.27±1.74)%,对照组则为(47.28±2.25)%、(33.52±1.97)%,中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前(13.47±0.33)%明显减少:(5.07±0.38)%,(6.28±0.35)%,(3.47±23)%,两两比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 外源性p21~(waf1)和p27~(kip1)基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制,二者联合转染时效果显著.提示,乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程,p21~(waf1)和p27~(kip1)在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用,对于p21~(waf1)、p27~(kip1)基因失活、低表达或不表达的乳腺癌,联合转染外源性p21~(waf1)、p27~(kip1)基因不失为一种有效的治疗手段.     

△Np63基因沉默对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的探讨癌基因△Np63对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法通过将△Np63特异性短发夹RNA(△Np63-shRNA)和非特异性短发夹RNA(Control-shRNA)转染膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinom a of bladder,TCCB)5637细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测△Np63、p27kip1、p57kip2mRNA和蛋白的表达水平,WST-1法检测细胞增殖活性,利用流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果特异性的△Np63-shRNA能够有效地沉默△Np63并上调p27kip1和p57kip2的基因和蛋白水平,转染△Np63-shRNA的5637细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),且明显促进了细胞的凋亡(P<0.05)。结论靶向△Np63基因的shRNA片段可以有效的抑制人膀胱癌5637细胞的增殖并促进其凋亡,其可能的机制是通过上调p27kip1和p57kip2的表达实现的。     

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的 研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制.方法 MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定Cyclin D1, p27kip1 mRNA表达变化,Western blot检测Cyclin D1,p27kip1蛋白表达变化.结果 crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系.FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/L crocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,Cyclin D1 mRNA表达明显下调,p27 mRNA无显著变化;Western blot结果表明Cyclin D1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加.结论 crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响Cyclin D1 mRNA转录,但并不影响p27 mRNA表达水平,并调控Cyclin D1、p27kip1蛋白表达.     

外源性P27kip1基因转染诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的　探索前列腺癌基因治疗的新途径。方法　用脂质体介导 p2 7kip1基因转染前列腺癌 PC- 3 M细胞 ,SABC免疫组化法检测癌细胞外源性 p2 7kip1基因表达 ;MTT比色分析检测癌细胞体外生长活性 ;流式细胞仪 ( FCM)分析细胞周期改变 ;DNA L adder、吖啶橙 -溴化乙啶荧光染色法检测细胞凋亡。结果　发现外源性 p2 7kip1基因转移后 ,前列腺癌细胞 p2 7kip1蛋白水平显著增强 ( P<0 .0 1) ,体外生长抑制 12 .2 4%～ 3 6.5 2 % ( P<0 .0 1) ,出现 G0 / G1 期细胞周期阻滞及凋亡性“亚 G1期”峰 ,电泳可见典型的“梯状”条带 ,凋亡比率为 18.5 % ( P<0 .0 1)。结论　转染外源性p2 7kip1基因能增强对细胞周期的负性调节 ,显著诱导前列腺癌细胞凋亡 ,是前列腺癌基因治疗的潜在途径     

Skp2和p27^kip1蛋白在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨泛素降解途径蛋白Skp2和p27^kip1在前列腺癌中的表达及与前列腺癌各项临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性。方法：应用免疫组织化学法和图像分析系统研究41例前列腺癌标本、20例开放手术切除良性前列腺增生标本中Skp2和p27^kip1的表达情况。分析临床病理资料与免疫组化的结果及Skp2、p27^kip1之间的相关性。结果：在前列腺癌中的Skp2蛋白染色阳性率显著高于良性前列腺增生（P〈0.01）;前列腺癌中的p27^kip1蛋白染色阳性率显著低于良性前列腺增生（P〈0.01）。Skp2蛋白表达与前列腺癌术前前列腺特异性抗原（PSA）水平、肿瘤穿透前列腺被膜、肿瘤分期、病理分级均显著相关（均P〈0.05）。p27^kip1蛋白表达与上述临床病理特征负相关（均P〈0.05）。Skp2和p27^kip1蛋白表达呈负相关（r=-0.572,P〈0.01）。结论：Skp2蛋白在前列腺癌中表达增加,其参与了前列腺癌的发病过程。Skp2蛋白表达与p27^kip1蛋白表达之间负相关。Skp2可能成为前列腺癌治疗的一个新的靶标。