小干扰RNA抑制核因子-κB活化对HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA(SiRNA)抑制核转录因子(NF)-κB活化对肝癌细胞凋亡的影响.方法 化学合成NF-κB siRNA和阴性对照siRNA,脂质体法转染HepG2细胞,用巢式RT-PCR和荧光定量PCR检测NF-κB mRNA表达情况;免疫组织化学法、酶联免疫吸附法、Western b10t检测NF-κB蛋白表达情况;用磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素法检测细胞凋亡,分析NF-κB表达抑制和细胞凋亡间关系.多个样本均数间的比较先行方差齐性检验,方差齐时行单因素方差分析;计数资料比较采用确切概率法分析.结果 NF-κBp65 mRNA在HepG2细胞相对表达量为1.13±0.03,在正常肝细胞L02为0.29±0.07,两者比较,t=27.02,P<0.05,差异有统计学意义.利用NF-κB siRNA干扰可下调NF-κB表达,且呈剂量、时间依赖;NF-κB siRNA转染HepG2细胞72h后,NF-κBmRNA和蛋白表达分别下降了93%和62%,抑制NF-κB表达使HepG2细胞凋亡增加85%. 结论 NF-κB在肝癌细胞中高表达,NF-κB SiRNA能特异性抑制其在肝癌细胞中活化并促进癌细胞凋亡发生.     

IGF-Ⅱ基因启动子低甲基化状态与肝细胞癌变关系的研究

目的:动态观察肝细胞癌变过程中胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)表达及其DNA启动子2(P2)甲基化状态.方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲雄性SD大鼠诱发肝细胞癌,分别观察肝细胞形态学(HE染色)改变、肝及血IGF-Ⅱ动态变化;应用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)扩增分析启动子的甲基化状态.结果:肝细胞在诱癌后从颗粒样变性、不典型增生到高分化肝细胞癌形成过程中,肝和血中IGF-Ⅱ表达呈梯度增加,差异有统计学意义(F=132,P<001).正常鼠、肝细胞变性鼠、癌前病变鼠和肝细胞癌变鼠肝IGF-Ⅱ基因P2低甲基化率分别为0%、27.8%、88.9%和100%,肝细胞癌变过程中肝IGF-Ⅱ基因P2逐步去甲基化,各组间差异有学意义(χ2=28.414,P<0.001),且与肝或外周血IGF-Ⅱ的异常表达呈明显正相关.结论:IGF-Ⅱ基因启动子逐步低甲基化改变与肝细胞的恶性转化关系密切.     

肝细胞癌变过程中磷脂酰肌醇蛋白多糖-3mRNA扩增及临床价值

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)在肝细胞性肝癌(HCC)形成过程中的表达特点及对HCC的早期诊断价值.方法 以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲雄性SD大鼠诱发肝细胞癌变,观察肝组织病理学改变,并从肝组织中提取总RNA,将GPC-3 mRNA以随机引物经逆转录合成GPC-3cDNA,再以巢式聚合酶链反应扩增GPC-3基因片段.结果 肝细胞在癌变过程中,形态学上呈肝细胞变性、癌前病变到肝癌形成三个发展阶段,肝组织总RNA表达水平呈动态梯度表达,表现为癌变组＞癌前组＞变性组;肝组织GPC-3 mRNA扩增阳性率在癌前组和癌变组均为100%,肝细胞变性组为83.3%,正常对照组未见阳性;肝组织GPC-3 mRNA阳性率与肝总RNA表达水平,两者呈明显的正相关(r=0.475,P＜0.01).结论 GPC-3参与肝细胞的癌变过程,GPC-3 mRNA异常表达是HCC早期诊断有价值的分子标志物.     

外周血AFP mRNA和ALB mRNA在肝癌诊断和转移监测中的价值

目的探讨外周血白蛋白（Alb）基因和甲胎蛋白（AFP）基因在肝癌（HCC）早期诊断和鉴别诊断中的临床价值。方法以巢式聚合酶链反应（RT—PCR）分析Alb基因和AFP基因在67例肝癌患者外周血中的表达。结果肝癌患者外周血中AFP基因和Alb基因的检出率分别为53．7％和59．7％,前者明显高于肝硬化、慢性肝炎、急性肝炎和肝外肿瘤组患者（P〈0．01）;后者明显高于肝硬化、慢性肝炎和肝外肿瘤组患者（P〈0．01）,但与急性肝炎组差异无统计学意义（P〉0．05）;在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中,Ⅲ期AFP基因片段和Alb基因片段阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期肝癌组;肝内有无转移的肝癌组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论联合分析外周血中AFP和Alb基因有助于肝癌的诊断、肝癌远处转移判别及肝癌术后复发的监测。     

血管内皮生长因子m-RNA表达与大肠癌生长转移的关系

目的 :探讨血管内皮生长因子表达与大肠癌组织的生长、侵袭和转移关系。方法 :应用逆转录聚合酶链(RT- PCR)法 ,对 2 3例大肠癌组织、远癌组织及 16例结肠息肉的血管内皮生长因子基因进行扩增。结果 :2 3例大肠癌组血管内皮生长因子 m RNA阳性率 6 5 .2 2 % ,明显高于远癌组 (2 1.74 % )及结肠息肉组 (18.75 % )。差异有显著性 (P<0 .0 1)。且与大肠癌临床病理分期有关。结论 :血管内皮生长因子 m RNA可作为大肠癌生长、侵袭和转移的临床预后判断指标     

肿瘤相关ALP同工酶的检测及临床意义

肿瘤相关ＡＬＰ同工酶的检测及临床意义姚登福，孟宪镛南通医学院附院内科（南通市２２６００１）人类碱性磷酸酶（ＡＬＰ）分为组织非特异性（肝、骨、肾）、胎盘型和小肠型。组织癌变时，控制ＡＬＰ合成的基因表达异常，产生和分泌肿瘤相关的ＡＬＰ［１，２］，如Ｒｅｇ...     

重视对丙型肝炎病毒感染慢性化机制的研究

丙型肝炎病毒 (HepatitisCVirus,HCV)感染的防治是全世界的医学难题。短短十余年间 ,世界范围内已有数十个病毒株的核苷酸序列被全部或部分解析 ,证明HCV属于高变异病毒 ,它的基因型与地理分布、临床表现、预后以及疗效间有着较密切的关系。目前从感染HCV的人和动物的血浆中分离出的病毒颗粒属于黄病毒属 ,从HCV的基因构成和组成特点可以证明该病毒具有异源性。HCV感染的特点是 :面广 ,临床谱广 ,易慢性化。急性丙型肝炎仅少数康复 ,约85 %隐匿性进展为慢性肝病包括无症状携带者与慢性肝炎 ,表现为间歇性或持续性血清转氨酶升高 ,伴…     

HS-GGT和AFP-mRNA联合分析在肝癌诊断中的临床价值

目的　探讨肝癌特异性γ 谷氨酰转移酶 (HS GGT)和AFP mRNA联合分析在肝癌诊断中的临床价值。方法　从肝癌患者外周血有核细胞中提取总RNA ,以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增分析AFP mMNA ,同时定量分析患者血HS GGT水平 ,比较它们在肝癌诊断中的临床价值。结果　所设计RT PCR扩增AFP基因片段大小为 15 9bp ,肝癌患者外周血AFP mRNA阳性率为60 3 % ,显著高于急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝外肿瘤及正常对照组 (P <0 0 1)。另外 ,AFP mRNA阳性率 ,在AFP浓度低于 5 0ng/ml肝癌组中为 5 7 1% ,在伴肝外转移的肝癌组中全数阳性。AFP mRNA阳性与肿瘤大小间无明显相关性 ,与HS GGT联合分析诊断肝癌的总阳性率达 93 6% 结论　HS GGT定量和外周血AFP mRNA分析有助于肝癌诊断、远处转移或术后复发的监测     

癌胚型GPC-3特异诊断原发性肝细胞癌及其靶向治疗进展

原发性肝细胞性肝癌(primary hepatocellular cancer,PHC)的发生、发展是一个多因素、多步骤、多中心的复杂过程,他的早期诊断和有效治疗至关重要.磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC-3)在PHC进展过程中起重要作用.在肝细胞恶性转化过程中G P C-3呈进行性升高表达;人肝癌G P C-3阳性率与乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,Hbs Ag)、TNM分期、门脉癌栓及肝外转移显著相关.GPC-3及m RNA与甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)联合检测,对PHC诊断阳性率可提高至94.3%;沉默GPC-3可改变肝癌细胞迁移、转移和侵袭的生物学行为,伴随β-catenin、p-糖原合成激酶3β(pglycogen synthase kinase 3β,p-GSK3β)和cyclin D1表达明显减少,提示癌胚性GPC-3不仅是PHC特异诊断标志物,而且有可能成为PHC治疗的潜在靶点.     

聚集素的结构特点与功能及其在肝细胞癌诊疗中的作用

肝细胞癌（HCC）是我国常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展机制十分复杂。聚集素（CLU）被证实对 HCC 的发生、发展起重要作用。综述了 CLU 的分子结构特点和生物学功能及其对 HCC 的诊断价值,分析了化疗多药耐药联系和未来靶向治疗前景。认为 CLU 有望作为 HCC 新的分子标志物及靶向治疗位点。