紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

降钙素基因逆转录巢式PCR及其临床应用价值的研究

目的：建立逆转录巢式（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲ方法扩增降钙素（ＣＴ）基因,探讨急性白血病诱导分化前后ＣＴ基因甲基化模式以及在微小残留病灶（ＭＲＤ）诊断中的临床价值。方法提取骨髓单个核细胞（ＢＭＭＣ）中的总ＲＮＡ,用逆转录酶合成ｃＤＮＡ,再以巢式ＰＣＲ扩增含有Ｍ位点的ＣＴ基因片段,并以Ｈｐａ Ⅱ酶切ＰＣＲ扩增终产物,分析ＣＴ基因的甲基化模式。     

肝细胞损伤时鸟嘌呤酶的释放与动态改变

［目的］探讨鸟嘌呤酶（ＧＵＡ）在肝细胞损伤过程中的动态改变及其临床价值。 ［方法］以２－ＦＡＡ喂饲ＳＤ大鼠,观察大鼠肝细胞从损伤到癌变过程中血清及肝组织中的ＧＵＡ的活性变化。［结果］在鼠肝细胞发生变性至肝组织全数癌变时,各实验组血清及肝组织中ＧＵＡ活性与正常对照组相比,ＧＵＡ第二周开始升高,以后酶活性持续升高,但肝癌鼠ＧＵＡ的动力学常数（Ｋｍ值）与正常鼠的ＧＵＡ相比,未见异常改变。［结论］胞浆酶ＧＵＡ为肝细胞损害的特异标志酶,血清该酶活性的升高幅度反映了肝病的严重程度。     

肝细胞癌变过程中磷脂酰肌醇蛋白多糖-3mRNA扩增及临床价值

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)在肝细胞性肝癌(HCC)形成过程中的表达特点及对HCC的早期诊断价值.方法 以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲雄性SD大鼠诱发肝细胞癌变,观察肝组织病理学改变,并从肝组织中提取总RNA,将GPC-3 mRNA以随机引物经逆转录合成GPC-3cDNA,再以巢式聚合酶链反应扩增GPC-3基因片段.结果 肝细胞在癌变过程中,形态学上呈肝细胞变性、癌前病变到肝癌形成三个发展阶段,肝组织总RNA表达水平呈动态梯度表达,表现为癌变组＞癌前组＞变性组;肝组织GPC-3 mRNA扩增阳性率在癌前组和癌变组均为100%,肝细胞变性组为83.3%,正常对照组未见阳性;肝组织GPC-3 mRNA阳性率与肝总RNA表达水平,两者呈明显的正相关(r=0.475,P＜0.01).结论 GPC-3参与肝细胞的癌变过程,GPC-3 mRNA异常表达是HCC早期诊断有价值的分子标志物.     

IGF-Ⅱ基因启动子低甲基化状态与肝细胞癌变关系的研究

目的:动态观察肝细胞癌变过程中胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)表达及其DNA启动子2(P2)甲基化状态.方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲雄性SD大鼠诱发肝细胞癌,分别观察肝细胞形态学(HE染色)改变、肝及血IGF-Ⅱ动态变化;应用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)扩增分析启动子的甲基化状态.结果:肝细胞在诱癌后从颗粒样变性、不典型增生到高分化肝细胞癌形成过程中,肝和血中IGF-Ⅱ表达呈梯度增加,差异有统计学意义(F=132,P<001).正常鼠、肝细胞变性鼠、癌前病变鼠和肝细胞癌变鼠肝IGF-Ⅱ基因P2低甲基化率分别为0%、27.8%、88.9%和100%,肝细胞癌变过程中肝IGF-Ⅱ基因P2逐步去甲基化,各组间差异有学意义(χ2=28.414,P<0.001),且与肝或外周血IGF-Ⅱ的异常表达呈明显正相关.结论:IGF-Ⅱ基因启动子逐步低甲基化改变与肝细胞的恶性转化关系密切.     

HSB、GSTs和TNF-α联合检测诊断肝癌的比较分析

目的 探讨血清肝癌特异性γ－谷氨酰转移酶（ＧＧＴ）浓度在肝癌诊断与鉴别中的临床价值。方法 定量检测了肝癌、慢性肝病和肝外肿瘤患者血清中肝癌特异性ＧＧＴ区带（ＨＳＢ）活性,并同时检测谷胱苷肽－Ｓ－转换酶（ＧＳＴｓ）和肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）浓度,以比较分析它们在肝癌诊断与鉴别中的临床意义。结果 肝癌组ＨＳＢ和ＧＳＴｓ浓度均明显高于慢性肝病和肝外肿瘤组（ｐ〈０．００１）。ＴＮＦ－α浓度肝癌组明显     

沙利度胺干预核因子-κB活化对肝细胞癌变的影响

我们以2-乙酰氨基芴(2-FAA)诱发鼠肝癌发生,同时给予沙利度胺干预,观察核因子-κB(NF-κB)表达的动态变化及其对肝细胞癌变的影响.     

肝癌组织中HIF-1α的表达与HIF-1α mRNA的扩增分析

目的分析肝癌组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及其基因的表达。方法以自身配对法分别收集经手术切除患者的肝癌及癌周组织各35份,以免疫组化法检测肝癌及癌周组织HIF-1α的表达,从癌组织中制备总RNA、逆转录合成cDNA,以巢式PCR扩增HIF-1α基因片段和DNA测序分析,以探讨HIF-1α及其基因表达的病理特征。结果肝癌及癌周组织中HIF-1α阳性表达呈棕黄色颗粒状,主要定位于胞浆中,部分位于胞核;癌周组织表达较强,中央静脉周闹表达明显;癌周组织HIF-1α表达阳性率明显高于肝癌组织（P〈0.01）;癌周组织中总RNA浓度明显高于肝癌组织（P〈0.01）;肝癌和癌周组织HIF-1α基因阳性率分别为54.3％和74.3％（P〉0.05）;癌组织HIF-1α表达率与肿瘤大小相关,与肿瘤数目和HBsAg阳性间未见明显相关。结论肝癌的发生、发展与肝组织HIF-1α过表达密切相关。     

人肝癌组织中芳香基酰胺酶表达与异常改变的研究

为探讨肝癌不同部分组织中ＡＡＤ的表达和改变规律。方法将自身配对的肝癌、癌周和远癌组织中总ＲＮＡ和ＡＡＤ纯化,并分析了肝匀浆中ＡＡＤ及不同分子形式ＡＡＤ比活性,并与对应组织中ＧＧＴ进行了比较。结果肝癌组织总ＲＮＡ浓度,癌组织明显低于癌周和远癌组织（Ｐ＜０．０１）;总ＡＡＤ比活性（Ｕ／ｇ）在癌组织明显高于远癌组织（Ｐ＜０．０５）;肝癌组织中膜结合性ＡＡＤ升高,但差别不明显（Ｐ＞０．０５）,而可溶性ＡＡＤ在肝癌组织中明显地高于癌周和远癌组织（Ｐ＜０．０５）。结论资料提示肝癌组织可表达大量ＡＡＤ,且以可溶性ＡＡＤ升高为主。