神经干细胞移植对大鼠视神经损伤后节细胞的保护作用

目的探讨神经干细胞（NSCs）移植对视神经受损SD大鼠视网膜节细胞（RGCs）的保护作用。方法将48只健康成年SD大鼠随机分为N组（NSCs移植组）和C组（对照组），均使用精确校准方法在右眼造成部分视神经损伤，左眼作为正常对照。从胚胎SD大鼠海马分离NSCs。利用细胞培养和体内移植技术。将培养后的NSCs注入N组大鼠右眼玻璃体内，C组大鼠右眼玻璃体内注入同等体积的PBS。处死前3d在双上丘注射3％快蓝逆行标记双眼RGCs。将大鼠分别于注射NSCs或PBS后7d、14d、21d、28d处死，各分为4组。每组6只。分离视网膜置于荧光显微镜下，摄影输入计算机图像分析仪计数RGC。计算RGC标识率。另取6只健康成年SD大鼠作NSCs移植，分别于移植后7d、28d处死，每时间段3只。通过视网膜免疫荧光切片观察NSCs在视网膜的存活、整合情况。结果N组大鼠各时间段RGCs标识率与C组同时间段比较均增高，有显著性差异（P〈0．01）；N组与C组RGCs标识率均随时间延长而降低。且前后段时间比较有显著性差异，但N组降低速度明显慢于C组。NSCs移植7d后部分移植细胞迁移进入视网膜的内网层和节细胞层。28d后可见移植细胞广泛整合至宿主视网膜内。结论NSCs移植入视神经损伤大鼠视网膜后可提高视网膜神经节细胞的存活率．对受损的节细胞具有一定的保护作用。     

神经干细胞移植对大鼠视神经损伤后视觉电生理的影响

目的　观察神经干细胞 (NSCs)对视神经损伤后视觉电生理变化的影响。方法　采用夹持视神经法制作大鼠视神经损伤模型 ,分别于夹伤当天和损伤后 4周一次性向视神经鞘膜内注射NSCs。植入后 4周检测夹伤视神经眼的闪光视觉诱发电位(flare visualevokedpotential,F VEP)。结果　视神经损伤后F VEP潜伏期 (wavelatency ,Wl)延长且振幅 (waveamplitude ,WA)降低 ,与正常眼比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;NSCs移植组损伤眼F VEP与空白对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,延期移植组更为明显。结论　NSCs移植有效促进了视神经损伤后神经传导功能的恢复。     

神经干细胞移植后在视神经损伤大鼠视网膜内表达BDNF的研究

目的探讨神经干细胞(NSC)移植入视神经损伤(ONI)的SD大鼠玻璃体下腔后在视网膜内表达脑源性神经营养因子(BDNF)的情况,为进一步探索NSC移植治疗视神经损伤提供实验依据。方法体外培养NSC,其上清液采用酶联免疫吸附实验(ELISA)定量分析BDNF含量。取34只SD大鼠,其中4只作为正常对照,另外30只制作成右眼ONI模型并随机等分为N组和P组。ONI术后随即向N组大鼠右眼玻璃体下腔注入定量NSC,P组注入等量PBS,并采用半定量RT-PCR方法检测正常大鼠视网膜及N组、P组大鼠术后第3天、1周、2周、3周、4周时视网膜BDNFmRNA的表达水平,行统计学分析。结果正常视网膜内可见BDNF表达;N组与P组大鼠视网膜内表达BDNF的量除第1周差异无统计学意义外,余时间段N组均高于P组。结论NSC能促使视神经损伤大鼠视网膜高表达BDNF,NSC移植治疗视神经损伤值得进一步深入研究。     

神经干细胞移植对大鼠损伤视神经超微结构的实验研究

目的 探讨神经干细胞(NSCs)移植治疗视神经损伤的新方法,为治疗视神经损伤打下基础.方法 制作视神经损伤大鼠模型,分别在急性损伤期和损伤后4周一次性向视神经受损区鞘膜内注射NSCs.注射后4周断颈处死动物,在电镜下观察损伤视神经超微结构.结果 损伤后视神经轴突减少,伴有水泡样变性,髓鞘厚薄不一,结构疏松,局部有缺损破碎,出现脱髓鞘现象,基质增多.NSCs移植组轴突数目增多,水泡样变性少见,髓鞘修复基本完整;延期移植组更加明显:对照组轴突变得透明空虚,髓鞘变成薄膜样结构,可见到鞘膜泡状分离和碎屑,基质成分明显增多.结论 NSCs移植可使损伤视神经超微结构得到有效修复,其有望成为治疗视神经损伤的有效手段.     

神经干细胞移植对视网膜节细胞再生的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）在视神经损伤后对视网膜节细胞轴突再生的作用及其在视神经内迁移和分化。方法实验动物分对照组（PBS组），实验组（NSCs组）；成年SD大鼠在眼球后1min处切断视神经。移植NSCs或PBS至视神经断端；4周后以霍乱毒素B亚基顺行标记观察轴突再生情况，并观察NSCs在视神经内的迁移及免疫组织化学法检测移植后的细胞表达神经丝蛋白（NF）、2，3-环核苷酸磷酸二酯酶（CNP）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的情况。结果4周后视网膜节细胞再生轴突穿过视神经断端到达远端，移植的NSCs分化为星形胶质细胞并在视神经内迁移0．5～1min。免疫组织化学法检测NSCs部分呈GFAP阳性，未见NF、CNP表达。结论NSCs移植可促进视网膜节细胞轴突再生，能在视神经内迁移并在视神经周围分化为星形胶质细胞。     

F-VEP在监测EAE大鼠视神经病变中的作用

目的研究闪光视觉诱发电位(F-VEP)在监测实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)视神经病变中的作用。方法制作Wistar大鼠EAE模型,以对照组大鼠F-VEP检测值确定正常参考值范围。模型组大鼠于豚鼠脊髓匀浆乳化剂免疫后不同时间点进行F-VEP检测,发病大鼠于发病后第6天行电生理检查后取视神经、脑、脊髓等通过伊红(HE)染色和LFB-焦油紫染色法进行病理检查。结果发病大鼠均出现不同程度F-VEP异常和视神经病理表现异常:F-VEP异常主要表现为P波和/或N1波潜伏期延长,最长延长分别为59.58%和35.33%;视神经病理改变主要表现为髓鞘脱失和炎性反应。F-VEP检测大鼠视神经病变的灵敏度达到100%,特异度为50%。结论 F-VEP可用于评价视觉系统损伤。     

移植时间对大鼠视神经损伤后神经干细胞迁移的影响

目的探讨移植时间对大鼠视神经损伤后神经干细胞(NSCs)在视网膜内迁移的影响。方法 18只SD大鼠行右侧视神经损伤后按随机数字表法随机平均分为3组,并分别于损伤后当天及伤后7d和14d采用微量注射法行右眼视网膜下腔移植2μl(105个/μl)转染绿色荧光蛋白基因的NSCs(GFP-NSCs)。4周后处死大鼠,取右眼球做冰冻切片,对迁移到视网膜内的移植细胞进行计数。各组切片分别用胸腺细胞表面糖蛋白、胶质纤维酸性蛋白、β微管蛋白、视紫红质抗体进行免疫标记,观察各组移植细胞在视网膜上的分化情况。结果损伤当天及伤后7和14d移植组视网膜上的GFP阳性细胞数分别为(163441.14±16876.81)个、(145736.57±27449.07)个和(117291.33±15849.19)个,两两相较,均差异显著(P<0.01)。三组的移植细胞均可在宿主视网膜内存活、迁移,且可分化为神经胶质细胞、神经元和视网膜神经节样细胞。结论大鼠视神经损伤后随着移植时间的推迟,迁移到宿主视网膜内的移植细胞量下降。     

雪旺细胞和神经干细胞共移植治疗大鼠帕金森病的实验研究

目的 研究雪旺细胞（SCs）和神经干细胞（NSCs）共移植治疗大鼠帕金森病（PD）的疗效。方法 18只PD模型的SD大鼠随机平均分成3组：对照组、NSCs组及共移植组。PBS、NSCs及SCs加NSCs分别植入PD大鼠右侧纹状体内。NSCs来源于孕14～16d胎鼠中脑腹侧的脑组织．SCs来源于1～3dSD新生鼠的坐骨神经。结果 移植10周后NSCs组及共移植组中纹状体区都出现TH染色阳性的神经元，与NSCs组相比，共移植组中的神经元体积及细胞核均较大。细胞数量多（P〈0．05）。与对照组相比，NSCs组及共移植组中大鼠的行为学均有明显的好转（P〈0．01），但NSCs组和共移植组相比，行为学的改变无明显差异（P〉0．05）。结论 SCs和NSCs共移植能有效治疗PD模型大鼠。     

神经干细胞移植治疗大鼠创伤性脑外伤的实验研究

目的 将神经干细胞(NSCs)移植于大鼠创伤性脑损伤部位,观察NSCs对创伤性脑损伤的治疗作用.方法 首先进行NSCs的体外培养,同时采用5-2-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记,脑外伤模型采用自由落体撞击大鼠左侧大脑皮质运动感觉区来制作,脑外伤后24h内移植NSCs,分别于脑外伤前、脑外伤后1、2、3周时行神经运动行为学评分(NMFE)和免疫组织化学染色检测BrdU、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷酯(GalC)蛋白表达和TUNEL原位杂交染色,经计算机图像分析系统处理.结果 大鼠自由落体撞击伤后,右下肢神经运动功能障碍明显.神经运动行为学评分在第1周时,实验组与对照组无明显差异,而在第2、3周时,实验组的评分明显低于对照组,有统计学意义(P＜0.05).第2、3周时实验组NSE、GFAP和GalC染色阳性细胞数要多于对照组,nestin染色在第1周时表达最高,而后逐渐下降.BrdU阳性细胞在损伤灶中心区最多,在损伤灶的远隔部位也有少许发现,而TUNEL染色则对照组明显比NSCs组高,有统计学意义(P＜0.05).结论 脑外伤移植NSCs可以在损伤区存活、增殖及分化,并在损伤的远隔部位有少许NSCs迁移、分化.NSCs移植有利于大鼠脑自由落体撞击伤后期的功能恢复.     

神经干细胞和GABA能神经元治疗大鼠颞叶癫痫实验研究

目的探讨并比较神经干细胞(NSCs)和γ-氨基丁酸(GABA)能神经元移植治疗大鼠颞叶癫痫的疗效。方法取孕12 d SD大鼠胎鼠脑组织,分离培养NSCs并鉴定,取第3代NSCs定向诱导分化为GABA能神经元。48只SD大鼠随机分为4组,空白对照组、未移植组、NSCs移植组和GABA能神经元移植组,移植细胞用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记,在模型建立后的第4 d将上述两种细胞移植到癫痫大鼠右侧海马。分别在细胞移植后的4 w、8 w、12 w处死大鼠留取脑标本。常规HE染色和Nissl染色观察大鼠右侧海马的损伤与治疗情况并进行评价。结果 NSCs移植组和GABA能神经元移植组均于移植后第8 w时海马CA3(CA3)区神经元计数最多,组内比较时,与另外两个时间点之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。进而取第8 w时间点进行组间比较,结果各组海马区神经元计数之间的差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论两治疗组在移植后第8 w时海马区神经元计数最多,且NSC移植组的疗效优于GABA能神经元移植组。     

局部应用医用生物蛋白胶释放NGF治疗大鼠视神经不完全损伤

目的研究局部应用医用生物蛋白胶释放神经生长因子(NGF)对大鼠视神经不完全损伤的治疗作用。方法将含有NGF生物蛋白胶放入培养基,于不同时间检测培养基中NGF的活性。将24只SD雄性大鼠随机分为假手术组(第1组),空白对照组(第2组),NGF肌注组(第3组)和实验组(第4组);每组6只。用手术造成左侧视神经不完全性损伤。第3组术后肌注NGF450U/d,共10d;第4组术中于损伤视神经局部注入生物蛋白胶0.2m(l含NGF450U),分别于术后第14、28天进行闪光视觉诱发电位(F-VEP)检测和视网膜节细胞(RGC)计数。结果 NGF在10h内逐渐从生物蛋白胶中释放至培养基。与第1组相比,第2、3、4组在术后第14天受损视神经的F-VEPP1潜伏期分别延长100%、45.5%和13.6%,波幅分别下降58.6%、44.6%和21.4%。术后第28天第2组受损视神经无电活动;与第1组相比,第3、4组P1潜伏期分别延长95.9%和34.9%,波幅分别下降60.9%和38.2%。各组不同时间F-VEPP1潜伏期和波幅均有明显差异(P0.05)。与第1组相比,第2、3、4组术后第14天受损侧RGC计数分别减少50.5%、34.4%和21.3%,第28天分别减少64.7%、47.6%和29.6%。各组之间受损侧RGC计数差异显著(P0.01)。结论医用生物蛋白胶可释放NGF。局部应用医用生物蛋白胶释放NGF对大鼠视神经不完全损伤疗效优于NGF肌肉注射。     

Pattern electroretinography and visual evoked potentials in optic nerve diseases.

BACKGROUND: To evaluate transient pattern electroretinography (PERG) and pattern visual evoked potential (VEP) for the diagnosis, differential diagnosis and follow-up of optic nerve diseases. METHODS: Twenty-nine consecutive patients (14 female, 15 male) with the diagnosis of ischaemic optic neuropathy (n=14) and optic neuritis (n=15) were included in this study. Mean age of the patients with ischaemic optic neuropathy was 63.3+/-3.3 (60-78) years and the mean age of the patients with optic neuritis was 28.3+/-8.4 (19-43) years. In each patient ophthalmological examination and systemic evaluation were done and VEP and PERG were recorded. As a control group, VEP recordings of 35 healthy subjects were included. RESULTS: In the ischaemic optic neuropathy group (group 1), mean VEP amplitude (+/-SD) (1.96+/-0.95 microV) was found to be decreased significantly in the affected eyes in comparison to the control group and the unaffected eyes. The delay in latency (116.3+/-20.14 msec in the affected eyes compared with 101.31+/-6.19 msec in unaffected eyes) was statistically significant when compared with the healthy subjects. In the optic neuritis group (group 2), VEP amplitude was decreased (4.13+/-4.04 microV vs 6.97+/-3.35 microV and 6.97+/-4.43 microV) and latency was increased (122.59+/-20.09 msec vs 101.31+/-6.19 msec and 108.76+/-13.57 msec) in affected eyes significantly in comparison to the unaffected eyes and control group, respectively. Even though there were no significant differences for P50 latency and N95/P50 ratios between affected and unaffected eyes in both groups, N95 amplitude decreased significantly in the affected eyes of the ischaemic optic neuropathy patients and N95 latency was found to be decreased in optic neuritis patients. There was no correlation between VEP and PERG findings in both groups. CONCLUSION: VEP amplitude decreased significantly in ischaemic optic neuropathies while latency delay was more significant in patients with optic neuritis. PERG findings showed decreased N95 amplitude in ischemic optic neuropathy without associated latency changes.     

Overexpression of Wnt3a facilitates the proliferation and neural differentiation of neural stem cells in vitro and after transplantation into an injured rat retina

Neural stem cell‐based therapy is a promising option for repair after injury. However, poor stem cell proliferation and insufficient differentiation of the stem cells into neurons are still difficult problems. The present study investigated whether transplantation of neural stem cells (NSCs) genetically modified to express Wnt3a is a promising approach to overcome these difficulties. We explored the possibility that Wnt3a might contribute to the therapeutic effect of NSC transplantation in retinal repair. The relative promotion of proliferation and neural differentiation by modified NSCs was investigated in a rat model of optic nerve crush. A recombinant lentivirus (Lenti‐Wnt3a) was engineered to express Wnt3a. NSCs infected with control lentivirus (Lenti‐GFP) or Lenti‐Wnt3a were transplanted into the subretinal space immediately after the optic nerve crush. The proliferation and neural differentiation activity of the NSCs were assessed in vitro and in vivo. Overexpression of Wnt3a in NSCs induced activation of Wnt signaling, promoted proliferation, and directed the differentiation of the NSCs into neurons both in vitro and in vivo. Our study suggests that Wnt3a can potentiate the therapeutic benefits of NSC‐based therapy in the injured retina. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.     

神经干细胞移植联用神经节苷脂对脑损伤大鼠神经学功能恢复的影响*

背景：研究表明, 神经节苷脂(GM1)通过激活神经营养因子,抑制毒性产物对神经元的损害,并且能够减少兴奋性氨基酸所引起的神经细胞的死亡起到促进神经细胞修复的作用。 目的：神经干细胞移植同时应用GM1,观察两者对脑损伤大鼠恢复的影响。 方法：取健康Wistar大鼠制成重型液压颅脑损伤模型,随机分成3组：损伤组(培养液移植组),神经干细胞移植组,神经干细胞+GM1组。脑损伤后4 d用RT-PCR、Western Blot检测脑组织中AQP4基因表达和蛋白合成的变化,并于脑损伤后24 h,3 d及伤后1,2,3,4 周行动物神经学缺损评分,在脑损伤后21~28 d进行Morris水迷宫试验。4周后处死大鼠行免疫组化、苏木精-伊红染色组织学观察。 结果及结论：脑损伤后4 d脑损伤周围组织AQP4及其mRNA的表达损伤组高于神经干细胞移植组,神经干细胞移植组高于神经干细胞+ GM1组(P < 0.05);移植后1,2,3,4 周,大鼠神经学缺损评分及水迷宫测试结果显示,神经干细胞移植可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经功能,联合应用GM1有协同效果。移植4周后苏木精-伊红染色神经干细胞+ GM1组出现典型的神经细胞样形态学改变且软化灶消失。免疫组化染色结果显示大鼠损伤灶脑组织中的BrdU阳性细胞数神经干细胞+GM1组高于NSCs移植组和损伤组。提示神经干细胞移植可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经学功能,联合应用GM1有协同效果。     

神经生长因子联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

背景：单纯的神经干细胞移植对受损脊髓组织的修复作用并不理想,研究证实神经生长因子兼有神经元营养和促突起生长双重作用,可以有效的促进脊髓损伤后神经功能的恢复。 目的：观察神经干细胞移植联合应用神经生长因子对脊髓损伤后大鼠运动功能恢复的影响。 方法：SD大鼠42只,建立急性脊髓损伤模型后随机分成3组,伤后1周于损伤处分别注入培养液、单纯神经干细胞或神经干细胞联合神经生长因子。于伤后1,2,4,6,8周进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测。伤后4周取材行病理切片苏木精-伊红染色及BrdU免疫组化染色,伤后8周取材行辣根过氧化物酶示踪观察及体感诱发电位观察神经电生理恢复情况。 结果与结论：伤后4周单纯神经干细胞组、神经干细胞联合神经生长因子组大鼠后肢运动功能均有较明显恢复,神经干细胞联合神经生长因子组较单纯神经干细胞组快,差异有显著性意义(P < 0.05)。培养液组亦有所恢复,但程度较轻。病理切片显示培养液组未见神经轴索通过。单纯神经干细胞组可见少量神经轴索样结构,神经干细胞联合神经生长因子组可见较多神经轴索样结构。BrdU的阳性细胞数及HRP阳性神经纤维数：神经干细胞联合神经生长因子组>单纯神经干细胞组>培养液组且各组之间差异有显著性意义(P < 0.01)。神经干细胞联合神经生长因子组大鼠体感诱发电位的潜伏期、波幅优于单纯神经干细胞组(P < 0.05),明显优于培养液组(P < 0.01)。结果提示神经干细胞移植对于后肢功能的恢复有促进作用,联合应用神经生长因子有协同效果。     

HIF-1α基因修饰神经干细胞移植对大鼠损伤脊髓NF200和GFAP表达的影响

【摘要】目的研究低氧诱导因子-1α（HI-1α）基因修饰的神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经丝蛋白200（NF200）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响及意义。方法采用电控脊髓损伤打击装置制作大鼠脊髓损伤模型。按随机数字表将120只SD大鼠平均分为4组：假手术组（Sham组）,单纯损伤组（SCI组）,神经干细胞组（NSC组）和HIF-1α基因修饰NSC组（HIF—NSC组）。应用免疫组化法检测受伤脊髓中HIF-1α、NF200和GFAP的表达。结果HIF-NSC组中HIF-1αt免疫阳性细胞平均光密度值比其他各组各时间点均高（P〈O．01）,且表达高峰延迟至移植后14d;除第1天外,HIF—NSC组NF200表达比SCI组和NSC组明显增高（P〈0．05）,移植后28dNF200免疫阳性轴突数目也比SCI组和NSC组明显增多（P〈0．01）;移植后7d、14d、28dGFAP免疫阳性细胞面积均比SCI组和NSC组明显减少（P〈0．01）。结论HIF-1α基因修饰NSC移植可引起HIF-1α在损伤脊髓内有效表达,且能明显的促进NF200的表达,并能在脊髓损伤的后期抑制GFAP的表达。这提示HIF-1α基因修饰的NSC移植可减少受伤脊髓中胶质细胞的增生和胶质疤痕的形成,促进轴突再生。     

Modulation of vibrissa-evoked cortical potentials after infraorbital nerve crush in rats.

Cortical potentials evoked by unilateral stimulation of the major vibrissae were recorded in 12 rats subjected to unilateral crush of the infraorbital nerve. Immediately after nerve crushing, the latency of the initial positive potential evoked at contralateral scalp sites by stimulating the vibrissae of the nerve-crushed side was increased. In contrast, the latency of the ipsilaterally evoked potential was shortened. The relative amplitude of the negative component to the positive one of the evoked potentials tended, immediately after the nerve crush, to be smaller on the contralateral cortex (N/P-contra) and greater on the ipsilateral cortex (N/P-ipsi). These changes disappeared largely by the 2nd post-operative week. It is suggested that reduction of the tactile signals transmitted through the crossed pathway is responsible for the prolonged latency and the smaller N/P-contra. Shortening of the ipsilateral latency and the enhanced N/P-ipsi may be due to liberation of the ipsilateral sensory system from inhibition by the contralateral one.