SNHG7-miR-653-5p-STAT2反馈通路在神经母细胞瘤进展中的调节作用研究CSCD

目的研究lncRNA SNHG7在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)进展中的作用,以及SNHG7-miR-653-5p-STAT2反馈通路在神经母细胞瘤进展中的调节作用。方法从青岛大学附属医院收治的NB患儿体内获得92对NB组织及相邻非肿瘤组织。采用qRT-PCR检测SNHG7在神经母细胞瘤肿瘤组织及细胞中的表达情况。采用Kaplan-Meier分析神经母细胞瘤患儿的总体存活率。采用比色法(MTT法)和集落形成法检测SNHG7对SK-N-SH和SH-SY5Y细胞的作用。采用Transwell侵袭及迁移试验检测SK-N-SH和SH-SY5Y细胞的侵袭和迁移能力。采用荧光素酶检测miR-653-5p和SNHG7、STAT2之间的作用。采用RIP测定及RNA下拉测定检验SNHG7和miR-653-5p在NB中的相对表达情况。采用Spearman相关分析探究SNHG7与miR-653-5p、STAT2的相关性。结果qRT-PCR显示,92对NB组织及相邻非肿瘤组织中,肿瘤组织(n=53)中SNHG7的表达量高于非肿瘤组织(n=39)。SNHG7高表达的NB患儿(n=53)总生存期随月份的增加而逐渐降低,SNHG7低表达的NB患儿(n=39)总生存期随月份的增加也逐渐降低,两组差异有统计学意义(P=0.004)。细胞功能试验:①MTT法和集落形成法检测结果显示,SNHG7的下调对SK-N-SH和SH-SY5Y细胞的存活和增殖有明显抑制作用;②Transwell试验检测结果显示,敲低SNHG7可明显抑制SK-N-SH和SH-SY5Y细胞的细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);③荧光素酶检测显示,miR-653-5p能降低SNHG7-WT(野生型)的荧光素酶活性,且miR-653-5p与STAT2-WT(野生型)之间存在特异性的相互作用。Spearman相关分析显示:①NB组织中SNHG7与miR-653-5p表达水平呈负相关(r=-0.281,P=0.007);②STAT2的表达量与NB组织中miR-653-5p表达水平呈负相关(r=-0.295,P=0.004),STAT2的表达量与NB组织中SNHG7表达水平呈正相关(r=0.296,P=0.004)。结论SNHG7通过miR-653-5p/STAT2通路促使NB进展,这为NB提供了一个新的治疗靶点和预测预后的生物标志物。     

Apelin/APJ在小儿神经母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨Apelin/APJ (putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1)系统与小儿神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)发生发展的关系。方法收集10例NB患儿术后肿瘤组织及对应的癌旁肾上腺组织,采用免疫组化法检测Apelin及APJ蛋白在肿瘤及癌旁组织中的表达; Real-time PCR方法和Western blotting技术检测Apelin/APJ mRNA及蛋白的表达水平,采用ELISA方法检测NB患儿及健康儿童血浆中Apelin-36的水平。结果在收集的NB病例中,免疫组化结果显示,Apelin蛋白主要定位于神经母细胞瘤的细胞浆,呈强阳性表达,而APJ蛋白则主要在肿瘤胞核内表达,呈棕黄色颗粒,表达强阳性或中等阳性,两者均在对照组癌旁肾上腺组织中表达呈阴性或者弱阳性;与瘤旁组织比较,NB组织中Apelin、APJ mRNA和Apelin及APJ蛋白的表达水平均显著升高,且差异有统计学意义(P 0. 05)。NB患儿血浆Apelin-36的水平显著高于健康儿童对照组的水平(P 0. 05)。结论 Apelin/APJ系统在小儿神经母细胞瘤组织中高度表达,提示该系统与NB的发生发展密切相关。     

儿童腹部神经母细胞瘤手术技术探讨CSCD

儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是一种发生于交感神经系统的异质性实体肿瘤,最常见于腹膜后。手术在NB多学科治疗中起着重要的作用,其主要目的是切除肿瘤病灶和尽可能保持周围组织结构的完整。关于NB的最佳手术方案目前尚未达成共识。手术入路很大程度上取决于肿块的解剖位置及对周围组织的侵犯程度。本文结合文献及作者多年临床实践,探讨儿童腹部NB的手术技术。     

儿童腹部神经母细胞瘤手术技术探讨

儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是一种发生于交感神经系统的异质性实体肿瘤,最常见于腹膜后。手术在NB多学科治疗中起着重要的作用,其主要目的是切除肿瘤病灶和尽可能保持周围组织结构的完整。关于NB的最佳手术方案目前尚未达成共识。手术入路很大程度上取决于肿块的解剖位置及对周围组织的侵犯程度。本文结合文献及作者多年临床实践,探讨儿童腹部NB的手术技术。     

神经母细胞瘤与肝母细胞瘤RECK及相关MMPs的表达及与肿瘤转移对比分析研究

目的 检测RECK及相关 MMPs在神经母细胞瘤及肝母细胞瘤细胞中的表达,探讨RECK及相关MMPs在两种肿瘤的转移特性中的不同意义.方法 收集1995年1月至2011年2月手术切除并经病理证实为神经母细胞瘤和肝母细胞瘤的蜡块标本73例,神经母细胞瘤36例,肝母细胞瘤37例.男43例,女30例,年龄6个月～8岁,平均为3.6岁.采用第二代通用型二步法监测系统(PV-6000)免疫组织化学方法检测神经母细胞瘤和肝母细胞瘤组织中RECK及相关MMPs的表达情况.结果 RECK在肝母细胞瘤组织中的阳性率为43.2％ (16/37),高于神经母细胞瘤27.8％(10/36),MMPs在恶性肿瘤的转移特性巾有明显意义.神经母细胞瘤及肝母细胞瘤肿瘤组织中RECK和MMP-14、MT1 MMP的表达均呈负相关(P＜0.05,r=-0.418,P＜0.05,r=-0.583).结论 MMPs在神经母细胞瘤中的表达高于肝母细胞瘤;RECK和相关MMPs的表达随肿瘤的转移、浸润呈负相关.     

色素上皮衍生因子在神经母细胞肿瘤中的表达及促分化作用的研究

目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）在神经母细胞肿瘤中的表达情况及在分化中的作用。方法采用免疫组织化学方法对23例神经母细胞瘤（NB）、17例节细胞神经母细胞瘤（GNB）、18例节细胞神经瘤（GN）的标本进行PEDF免疫染色分析，每张切片采用显微数字分析系统进行定量，统计指标为免疫染色评分（immunostaining score，ISS），ISS=阳性染色面积×阳性染色面积的平均光密度／整个视野面积。进一步采用Western印迹对4例NB、3例GNB进行PEDF定量分析。以β-actin为内参照，统计指标为PEDF／Actin比值。NB、GNB和GN中PEDF表达差异性的比较采用Kruskal—Wallis法和Nemenyi法检验；采用Spearman等级相关进行PEDF表达强度与神经母细胞肿瘤成熟程度相关性分析。NB和GNB中的PEDF／β-actin比值比较采用t检验。结果免疫组织化学显示随着NB向GNB发育过程中，PEDF的表达量逐渐增加（P=0．000），PEDF的表达强度与神经母细胞肿瘤的成熟程度呈正相关（rs=0．889，P=0．000）。GNB中PEDF／Actin的比值较NB中高（P=0．045）。结论PEDF可能为神经母细胞肿瘤内源性促分化因子，诱导原始神经母细胞向成熟的节细胞分化，可应用于消灭微小残留灶的维持治疗中，前景令人鼓舞。     

神经母细胞瘤多药耐药机制的研究

神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见的颅外实体恶性肿瘤,临床表现多种多样,肿瘤转移及复发是其死亡的主要原因.目前NB治疗方法主要集中在手术治疗、系统化疗、放射治疗、清髓治疗联合移植、肿瘤靶向治疗等,但高危患儿的治疗效果仍不容乐观.研究表明多药耐药(multidrug resist-ance,MDR)是成功治疗NB的主要障碍,因此全面认识NB耐药机制对于提高患儿生存率具有十分重要的意义.该文从多方面就NB耐药机制进行综述.     

神经母细胞瘤并骨转移患儿临床特征及预后相关因素的单中心分析

目的 分析伴骨转移神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)患儿的临床特征及预后相关因素,总结临床诊疗经验,以提高伴骨转移NB患儿的生存率.方法 以2013年12月至2020年12月重庆医科大学附属儿童医院肿瘤外科收治的伴骨转移NB患儿为研究对象,收集并总结患儿临床资料及预后情况.随访时间截至2021年3月31日...     

p14ARF/p16β与Oct-4、Nestin、GFAP在不同组织结构类型的神经母细胞瘤中的表达及意义

目的 探讨p14ARF＜/p16β与Oct-4、Nestin、GFAP在不同组织结构类型的神经母细胞瘤(组织结构良好型,FH型;组织结构不良型,UFH型)中的表达及其意义.方法 收集近6年来本院保存的儿童神经母细胞瘤石蜡标本33例,男17例,女16例;年龄范围1个月～15岁,平均年龄33.1个月;随访时间21～87个月,平均随访时间45.5个月,其中UFH神经母细胞瘤10例,平均肿瘤分期3期;FH神经母细胞瘤23例,平均肿瘤分期2.57期.利用组织芯片的高通量、低误差、经济省时等优点,将二组标本制作成组织芯片,再行免疫组织化学SP法检测p14ARF/p16β与Oct-4、Nestin、GFAP在神经母细胞瘤中的表达.结果 相对于FH神经母细胞瘤,UFH神经母细胞瘤中的p14ARF/p16β表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);而Nestin和GFAP在二组肿瘤中表达均较低,Oct-4二组表达类似.二组之间差异无统计学意义(P0.05).UFH组失随访1例.平均随访时间34.5个月,随访时存活率66.6%;FH组失随访2例,平均随访时间49.5个月,随访时存活率80.9%,二组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 p14ARF/p16β基因的失活在肿瘤的发生中起着重要作用,UFH神经母细胞瘤中p14ARF/p16β的低表达表明了肿瘤分化较差,肿瘤分期较高;而Nestin、Oct-4和GFAP表达类似.表明了不同组织结构类型的神经母细胞瘤(FH型和UFH型)均具有一些最原始的神经干细胞的生物学特征,具有进一步分化的潜力.并使得神经母细胞瘤进展迅速,呈现恶性的组织表型.FH型预后相对较好,可能与患儿不同的年龄、肿瘤分期、是否转移和复发均有关.     

CD44与nm23在神经母细胞瘤中的表达及意义

目的 检测CD44与nm23基因在神经母细胞瘤(NB)中的表达,探讨CD44和nm23 mRNA的表达与NB发生及转移的关系.方法选择30例术前未经化疗的NB患儿为研究对象,收集术中切除的无坏死新鲜瘤体组织为研究组,相应瘤旁组织为对照组,将标本放置于-80 ℃冰箱保存.依据Trizol试剂说明书于超净工作台分别提取NB和瘤旁组织mRNA,将其反转录为cDNA后进行扩增内参和引物,凝胶电泳检测nm23 mRNA及CD44 mRNA在NB和瘤旁组织中的表达水平.结果 nm23 mRNA在研究组及对照组中均有表达,但研究组表达低于对照组,研究组中有淋巴结转移组织中的表达低于无淋巴结转移组织中的表达.CD44 mRNA亦在研究组和对照组中均有表达,但研究组表达显著高于对照组,且研究组有淋巴结转移组织中的表达高于在无淋巴结转移组织中的表达.结论 nm23 mRNA 及CD44 mRNA的表达水平与NB发生、发展和肿瘤转移密切相关,nm23 mRNA 具有抑制NB发生及转移功能,而CD44mRNA则促进NB的发生及转移.采用PCR技术可以有效检测NB nm23 mRNA及CD44mRNA的表达水平,有助于判断其生物学行为.     

DKK-1在神经母细胞瘤中的表达及其意义

目的 研究Dickkopf-1 (DKK-1)在儿童神经母细胞瘤(NB)中的表达及其意义.方法 运用免疫组织化学方法检测DKK-1在42例NB,19例神经节细胞瘤及15例正常肾上腺组织中的表达水平.运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting检测DKK-1在分化程度依次增高的3株NB细胞株IMR-32、SK-N-SH和SH-SY5Y中的mRNA及蛋白表达水平.结果 免疫组织化学研究发现DKK-1在正常肾上腺组织中呈强阳性表达(免疫组织化学评分为1.912±0.047),在神经节细胞瘤组织中呈弱阳性表达(免疫组织化学评分为1.214±0.095),在NB组织中呈阴性表达(免疫组织化学评分为0.371±0.293).神经节细胞瘤和NB中DKK-1的表达量分别与正常对照组相比较,差异均有统计学意义(all P＜0.001).在3种组织中,不同组间DKK-1表达量的差异有统计学意义(F=211.375,P＜0.001).qRT-PCR研究发现DKK-1在IMR-3、SK-N-SH和SH-SY5Y中平均相对表达量分别为(25.323±8.651)％、(58.852±10.223)％和(75.385±9.381)％,均呈低表达水平,不同组间DKK-1表达差异有统计学意义(F=57.628,P＜0.001).Western blotting研究发现在IMR-32、SK-N-SH和SH-SY5Y中DKK-1蛋白表达相对灰度值依次增高,分别为0.093±0.016、0.397±0.051和0.411±0.062,不同组间蛋白表达差异有统计学意义(F=156.783,P＜0.001).结论 DKK-1在NB组织及细胞株中均呈低表达水平,且DKK-1在NB中的表达可能与该肿瘤的分化密切相关,提示其或许可以作为一个特殊的分子标记物用于NB的早期诊断及预后监测.     

miR-144通过靶定ITGβ1调控神经母细胞瘤的侵袭转移

目的 本研究旨在探讨miR-144对神经母细胞瘤的侵袭和转移的影响,并探索miR-144是否通过靶定ITGβ1调节神经母细胞瘤的侵袭和转移.方法 利用生物信息学技术预测miR-144的靶基因ITGβ1,应用荧光报告基因检测以及荧光定量PCR、Western Blot实验对靶基因进行验证.在神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-BE分别瞬时转染化学合成的成熟双链miR-144和靶基因敲降质粒及对照质粒,建立过表达miR-144细胞模型和靶基因敲降细胞模型.通过 Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞的体外侵袭和转移能力.结果 Transwell实验结果表明,在神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和SK-N-BE中过表达miR-144后,细胞的侵袭数目分别为41±2和55±2,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).抑制ITGβ1基因的表达后,体外划痕实验结果表明,过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞的转移能力分别下降了65.45%和75.41%(P<0.01).荧光报告基因检测结果显示过表达miR-144后,含有结合位点的荧光报告质粒的相对荧光量降低了37.11%(P<0.01),而将结合位点进行基因突变后miR-144对靶基因的抑制作用消失.过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞内的ITGβ1 mRNA水平分别降低了40%和43%,Western Blot检测结果显示,ITGβ1蛋白水平分别降低了39%和40%.结论 miR-144通过靶定ITGβ1基因抑制神经母细胞瘤的侵袭和转移过程.     

神经母细胞瘤及胚胎肾上腺组织端粒酶基因表达的研究

目的 观察神经母细胞瘤和胚胎肾上腺组织中端粒酶基因（hTR/hTRT)的表达,以及神经母细胞瘤细胞在药物诱导分化时端粒酶基因表达的变化,探讨端粒酶在神经母细胞瘤形成和发展中的作用。方法 体外转录法制备生物素标记的hTR、hTRTcRNA探针。神经母细胞瘤存档石蜡标本20例,2-5个月胎儿肾上腺组织石蜡标本12例,应用原位杂交组织化学（ISHH）方法检测hTR及hTRT表达,用维甲酸类似物R9158诱导人神经母细胞瘤细胞系SH-SY-5Y及SK-N-SH,细胞（90.0%)阳性。各月龄胎儿肾上腺组织均有hTR及hTRT表达,神经嵴细胞和继发皮质细胞内信号强于原发皮质细胞,神经嵴细胞形态极似神经母细胞瘤细胞,维甲酸敏感细胞SH-SY-5Y在R9158作用5d后出现明显形态学变化,表达hTR的细胞明显减少,维甲酸耐受细胞SK-N-SH玩明显变化。结论 端粒酶基因在神经母细胞瘤和胚胎肾上腺组织中高表达,神经母细胞瘤细胞在药物诱导下分化时端粒酶基因hTR表达明显降低。端粒酶在神经母细胞瘤形成和发展中有重要作用。     

Cytotoxicity of lymphokine-activated killer cells against human neuroblastoma cells: modulation by neuroblast differentiation

The cytolytic activity of lymphokine-activated killer (LAK) cells against human neuroblastoma (NB) cells was investigated using the continuous NB cell lines, IMR-32, Kelly, and two subclones of SK-N-SH, SH-SY5Y (neuroblastic phenotype), and SH-EP (non-neuronal phenotype). NB cells were found to be sensitive targets of LAK. Of the SK-N-SH subclones, the neuroblasts, SH-SY5Y, were more susceptible to LAK killing than were the non-neuronal cells, SH-EP. Pretreatment of the targets SH-SY5Y and SH-EP with the differentiating agents, retinoic acid (RA, 10 microM), herbimycin A (236 nM), or nerve growth factor (10 ng/ml), did not substantially alter LAK killing. Furthermore, these differentiating agents did not measurably affect LAK activity during the cytolysis assay or with 1-h preincubation of the LAK effectors. However, co-incubation of the LAK cultures over the 3-day activation period with RA (1 microM) or PGE2 (1 microM) inhibited cytolysis by 80%, suggesting that these agents interfere with an early activation step of LAK. These results support the potential use of LAK treatment for neuroblastoma, in combination with differentiation agents that do not affect neuroblastoma sensitivities toward LAK cells. However, some differentiation agents, (e.g., RA) and endogenous prostaglandins (e.g., PGE2) may interfere with LAK activation.     

MiR-34a-5p在MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老中的作用机制

目的研究小分子AURKA抑制剂MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老的作用机制。方法利用细胞转染的方法改变SK-N-SH细胞中miR-34a-5p的表达水平,通过SA-β-gal染色方法及流式细胞术检测细胞衰老及细胞周期情况。运用CCK8检测不同处理下细胞增殖的变化情况。RT-PCR及蛋白质免疫印迹(Western blot)方法用来检测细胞中相关基因及蛋白的表达情况。结果(1)MLN8237在SK-N-SH细胞中可以通过激活P53/P21通路诱导细胞衰老,同时引起miR-34a-5p表达上调(P值均<0.05)。(2)SA-β-gal染色及流式检测细胞周期显示,过表达miR-34a-5p可以引起SK-N-SH细胞衰老,靶向调控衰老相关靶基因SIRT1的表达,并导致P53、P21蛋白及mRNA表达升高(P值均<0.05),激活P53/P21衰老通路。(3)将miR-34a-5p抑制剂与MLN8237联用后,与单用MLN8237相比可以减少衰老细胞,降低P53、P21的表达(P值均<0.05),并抑制P53/P21衰老通路,且CCK8结果提示,两者联用可以显著减弱MLN8237对SK-N-SH细胞的增殖抑制作用(P值均<0.05)。结论在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中MLN8237是通过激活P53/miR-34a-5p/SIRT1反馈环路来诱导细胞衰老的过程。     

HA117调节DPF3表达对神经母细胞瘤分化的影响

目的 探讨HA117及DPF3在儿童神经母细胞瘤(NB)中的表达及意义,及其对NB分化的影响和可能机制.方法 运用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、免疫组化法检测HA117、DPF3在35例NB、8例节细胞神经母细胞瘤(GNB)和10例神经节细胞瘤(GN)中的表达水平.构建HA117过表达和空载慢病毒,分别转染SH-SY5Y细胞株,构建HA117过表达组和对照组.采用qRT-PCR和Western Blot检测HA117和DPF3的RNA和蛋白质表达水平.采用10 μmol/L维甲酸诱导HA117过表达组和对照组细胞,普通光学显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测神经特异性标志物MAP2蛋白质表达,Western Blot检测HA117过表达组和对照组细胞MAP2、NSE蛋白质的表达情况.结果 HA117的RNA在NB中的相对表达量为30.14±15.96,明显高于GNB/GN的1.03±0.37(P＜0.05),DPF3的mRNA在NB中的表达量为0,81±0.17,明显低于GNB/GN的3.14±1.09(P＜0.05),与HA117的表达趋势相反.免疫组化检测发现DPF3在GNB/GN中呈强阳性表达,在分化中的NB中呈弱阳性表达,在未分化/分化差的NB中呈阴性表达.过表达HA117可在mRNA和蛋白水平明显下调SH-SY5Y中DPF3的表达.经10 μmol/L维甲酸诱导7d后,对照组细胞生长明显减慢,细胞长出突起,发生神经元样分化;HA117过表达组SH-SY5Y的MAP2、NSE的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 HA117和DPF3的表达可能与NB的分化相关,HA117可能通过下调DPF3的表达抑制NB的分化.     

Avastin对神经母细胞瘤株SK-N-SH增殖影响的体外研究

目的 以人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株为研究对象探讨Avastin对其增殖的影响及可能机制.方法测定不同 Avastin浓度对SK-N-SH细胞上清液VEGF水平的影响,对该株细胞的细胞毒作用及对其细胞周期及凋亡的影响.结果 随着Avastin浓度升高,细胞上清液中游离VEGF水平逐渐下降;在一定剂量范围内,Avastin对该株细胞无明显细胞毒性作用;不同浓度Avastin作用于该株细胞,呈时间依赖性,影响细胞周期分布.结论 Avastin可中和SK-N-SH细胞分泌的VEGF,无明显细胞毒性作用,但可影响细胞周期分布,提示Avastin与化疗药物联合应用可能有协同作用.     

苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用及机制

目的 探讨苦参碱(matrine,Ma)对人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB) SH-SY5Y细胞的作用及机制。方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞无Ma)及4个浓度组（Ma的作用浓度）分别为0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml和3.0mg/ml,每组5个复孔。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测凋亡率;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达。最后采用SPSS 16.(0统计软件进行单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义。结果 MTT比色法检测对照组及各浓度组增殖抑制率分别为(7.25±1.55)％、(12.56±1.94)％、(17.22±0.90)％、(22.39±0.78)％和(25.35±1.38)％;流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为(5.30±0.60)％、(10.04±1.18)％、(14.34±1.79)％、(21.36±0.96)％和(24.80±1.53)％;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达,对照组及各浓度组的灰度值分别为：0.502±0.043、0.584±0.032、0.644±0.052、0.836±0.056和0.948±0.030。以上检测各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 苦参碱在体外环境下作用神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、诱导调亡并促进TrkA mRNA的表达,这为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

神经母细胞瘤骨髓转移细胞体外原代培养技术的实验研究

目的：根据神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)易发生早期骨髓转移的特点，建立NB骨髓转移细胞体外原代培养的实验技术。方法：对27例伴骨髓转移的NB患者进行NB骨髓转移细胞体外原代培养，并与已建立的SMS-KCNR和SH-SY5Y细胞系进行比较，在倒置相差显微镜下观察细胞生长情况及形态学特点，同时应用单克隆抗体F3系列检测原代培养的NB骨髓转移细胞。结果：在27例NB骨髓转移细胞体外原代培养中，培养成功9例，其细胞生长情况及形态学特点与SMS-KCNR和SH-SY5Y细胞系基本一致，单克隆抗体F3系列检测均阳性。结论：NB骨髓转移细胞体外原代培养技术的成功建立为NB体外诱导逆转及多药耐药等复杂机制研究提供更接近体内生物学性状的细胞来源。