不同转移潜能人神经母细胞瘤细胞系趋化因子受体CXCR4的表达及对瘤细胞趋化作用的影响

目的 以自建的人神经母细胞瘤转移瘤(QDDQ-NM1)及原位瘤(QDDQ-NM2)细胞系的细胞为研究对象,探讨CXCR4在不同转移潜能人神经母细胞瘤细胞系细胞中的表达情况及其对瘤细胞趋化作用的影响.方法 采用RT-PCR检测两神经母细胞瘤细胞系细胞CXCR4 mRNA的表达;流式细胞仪直接免疫荧光法检测两细胞系细胞膜表面CXCR4蛋白的表达;通过趋化和趋化抑制实验观察CXCR4特异性配体CXCL12对QDDQ-NM1和QDDQ-NM2细胞系瘤细胞的趋化作用.结果 RT-PCR显示QDDQ-NM1细胞系CXCR4mRNA的相对含量为0.57±0.08,QDDQ-NM2细胞系为0.29±0.05,两者比较差异有统计学意义(P=0.005＜0.05),流式细胞仪直接免疫荧光法检测两细胞系细胞膜表面CXCR4蛋白表达的阳性率分别为(64.59±1.57)%和(36.72±0.57)%,两者的差异有统计学意义(P=0.00＜0.05),CXCR4特异性配体CXCL12可在一定范围内呈浓度依赖性的趋化QDDQ-NM1和QDDQ-NM2细胞系细胞的迁移,以100 ng/ml的效果较为明显,两细胞系迁移到聚碳酸酯膜下的细胞数差异有统计学意义(P＜0.05).CXCR4特异性拮抗剂AMD3100能有效抑制这种趋化作用(P＜0.05).结论 QDDQ-NM1细胞系的细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4,可能与人神经母细胞瘤QDDQ-NM1细胞系细胞的体外高转移潜能有关.

Abstract：

Objective To study the expression of functional chemokine receptor CXCR4 and its effects on the metastatic potential of human neuroblastoma.Methods Two human neuroblastoma cell lines were used in this study,including QDDQ-NM1 with high metastatic potential and QDDQ-NM2 with low metastatic potential.The expression of CXCR4 was explored at mRNA level using RT-PCR,and the protein level by flow cytometry.Chemotaxis assay was also performed to study the migratory response of QDDQ-NM1 and QDDQ-NM2 to CXCR4 ligand CXCL12.Results The mRNA of CXCR4 was higher in QDDQ-NM1 group than that in QDDQ-NM2 group (0.57±0.08 vs 0.29±0.05,P =0.005).The expression of CXCR4 on QDDQ-NM1 group was also higher than that in QDDQ-NM2 group [(64.59 ±1.57) % vs (36.72 ± 0.57) %,P＜0.05] The QDDQ-NM1 cells exhibited stronger migratory response to CXCL12 in a concentration dependent manner (P＜0.05),and the response peaked to CXCL12 at 100 ng/ml.AMD3100,a specific CXCR4 antagonist,could reverse the tumor's migratory response to CXCL12.Conclusions The expression of CXCR4 is associated with the metastatic potential of human neuroblastoma.     

计算机辅助手术系统在小儿巨大肝间叶性错构瘤诊治中的应用

目的探讨计算机辅助手术系统(海信CAS)在小儿巨大肝间叶性错构瘤(HMH)诊治中的临床价值。方法自2010年9月至2015年10月,我们收治5例HMH患儿,术前均行上腹部增强CT检查,3例(2013年7月至2015年10月)应用海信CAS对患儿CT资料行三维重建及模拟肝切除,制定手术计划,术中实施精准肝切除术。结果 2例(2010年9月至2013年5月)根据术前CT检查分别实施肝右叶切除术及肝左叶切除术。3例(2013年7月至2015年10月)应用海信CAS系统成功进行肝脏及肿瘤的三维重建,并进行模拟肝切除,根据术前制定的手术计划分别成功实施:肝Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅷ部分及Ⅳ全部切除术,肝Ⅴ段切除术,右半肝切除术。术后恢复好,病理检查证实为HMH。随访3个月至5年未见并发症及复发。结论 HMH影像学检查与肝囊肿相似,易误诊。海信CAS能清晰、直观显示HMH的位置、形态及其与肝内管道系统的关系,其术前规划功能利于术者制定最佳手术方案,实施个体化精准肝脏肿瘤切除。     

靶向小干扰RNA抑制人神经母细胞瘤裸鼠荷瘤生长及转移的实验研究

目的 探讨靶向CXCR4的小干扰RNA(siRNA)对人神经母细胞瘤QDDQ-NM细胞裸鼠肿瘤的生长及转移的抑制作用.方法 采用本实验室已成功建立QDDQ-NM裸鼠荷瘤模型,以CXCR4为靶基因,设计合成siRNA序列及对照序列HK.通过瘤体局部多位点注射,将CXCR4-siRNA转染到裸鼠皮下荷瘤内.A组(阳性治疗组),B组(阴性治疗组),同时设立空载体对照组(C组)和空白对照组(D组).观察肿瘤的转移及治疗前后体积变化,并用RT-PCR方法及免疫组化方法检测CXCR4的基因转录及蛋白表达情况,来评价CXCR4-siRNA对肿瘤的作用.结果 A组转移率为25％明显小于其余3组对照组(75％,58％,75％),其肿瘤体积也显著低于其余3组,利用RT-PCR检测CXCR4基因在转录水平的表达,A组为1.0451±0.0778,B、C、D组分别为1.4286±0.0655、1.3839±0.0037、1.3882±0.0733(P＜0.05),A组CXCR4蛋白表达水平也显著低于B、C、D组(P＜0.05).结论脂质体介导的CXCR4-siRNA对神经母细胞瘤的生长及转移有明显抑制作用,可为下一步肿瘤治疗提供基础.     

前动力蛋白Prokineticin-1对神经母细胞瘤QDDQ-NM细胞VEGF表达的影响

目的 探讨前动力蛋白(prokineticin-1,Prok-1)对神经母细胞瘤细胞QDDQ-NM细胞血管生成的影响.方法 应用Prok-1蛋白受体基因PKR1小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人神经母细胞瘤ODDQ-NM细胞,分别用Prok-1、AKT蛋白激酶抑制剂LY294002处理后,采用Western blot检测AKT蛋白磷酸化水平,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清内血管内皮生长因子(VEGF)的含量.结果 Prok-1可激活ATK信号通路,磷酸化AKT蛋白水平升高;同时上调QDDQ-NM细胞VEGF的表达.在Prok-1蛋白激酶抑制剂处理浓度分别为0和100 ng/ml时,培养细胞上清VEGF浓度分别为(212±23) pg/ml和(416±43) pg/ml,两者差异有统计学意义(P＜0.01).而AKT蛋白激酶抑制剂LY-294002可抑制Prok-1上调VEGF的表达.结论 Prok-1可能通过AKT信号传导途径上调神经母细胞瘤VEGF的表达,促进肿瘤血管形成,进而促进神经母细胞瘤的增殖和转移.     

计算机辅助手术系统在先天性胆管扩张症诊治中的应用

目的研究计算机辅助手术系统在小儿先天性胆管扩张症诊断与治疗中的应用价值。方法回顾性分析2013年6月至2015年1月青岛大学附属医院收治的25例先天性胆管扩张症患儿的肝脏64排螺旋CT扫描原始数据,采用计算机辅助手术系统(Hisense CAS)进行肝脏及胆道三维重建,根据三维重建结果进行精准的术前诊断和病理形态分析,以及辅助手术规划,确定最佳手术方案。观察术中所见与术前规划的符合程度、术中出血量、并发症等。结果 25例中,囊肿型14例,梭状型11例;合并肝内胆管扩张18例;少见的复杂胆道畸形3例。肝脏及其内部管道系统的三维模型形态逼真、立体感强,清晰地显示胆管的分布走形及其与肝内三套血管系统的空间位置关系。术前手术方案与实际手术方式符合率为88%(22/25)。术中出血量中位数为12 mL,最少出血量为6 mL。术后无一例出现严重并发症或死亡。结论通过计算机辅助手术系统对CT数据进行三维重建,实现了胆道系统的数字化解剖,并能清晰显示胆道及其周围血管系统的空间位置关系,提高先天性胆管扩张症手术的精准性和手术安全性。     

小儿门静脉分型及肝脏体积测量的数字化研究

目的 应用海信计算机辅助手术系统(海信CAS)研究小儿门静脉解剖变异并测量相应的流域体积,为实施小儿精准肝切除术提供理论依据.方法 应用海信CAS将106例儿童上腹部增强CT进行肝脏及血管三维重建,分析小儿肝脏门静脉主干解剖变异并进行分型,按照年龄分组,自动测量右前叶、右后叶及左叶的流域体积.结果 海信CAS能够立体、清晰地显示小儿肝脏门静脉主干的解剖走行,并自动测量各流域体积.门静脉分型:a型82例(77.4％),b型12例(11.3％),c型8例(7.6％),d型2例(1.9％),e型1例(0.9％),f型1例(0.9％).根据门静脉右前支、右后支及左支供血区域实现个体化肝段划分.各年龄段组间肝脏体积差异有统计学意义(P＜0.05);肝脏总体积与年龄、身高、体重、体表面积均呈正相关(年龄:R=0.889,P＜0.05;身高:R=0.914,P＜0.05;体重:R=0.919,P＜0.05;体表面积:R=0.931,P＜0.05).结论 海信CAS能准确立体的显示出肝内血管走行并自动测量流域体积,为小儿门静脉分型及个体化肝段划分提供可靠依据,对小儿精准肝切除术的实施具有重要意义.     

RECK及MMP-14蛋白在神经母细胞瘤组织中的表达及与肿瘤转移关系的研究

目的 检测RECK蛋白及膜型基质金属蛋白酶MMP-14在神经母细胞瘤中的表达,探讨其在神经母细胞瘤的发生、发展、浸润和转移中的作用.方法 选择临床及病理资料齐全的存档神经母细胞瘤蜡块标本36例,另取节细胞神经瘤蜡块标本10例作对照.采用第二代通用型二步法监测系统(PV-6000)免疫组织化学方法 检测RECK及MMP-14蛋白的表达.结果 RECK蛋白在神经母细胞瘤组织中低表达(16.7%),并随肿瘤浸润深度的加深、远处转移的发生而降低(P=0.015<0.05).MMP-14在神经母细胞瘤组织中高表达(58.3%),并随肿瘤浸润深度的加深、远处转移的发生而增高(P=0.002<0.05).神经母细胞瘤组织中RECK与MMP-14蛋白的表达呈负相关(r=-0.418,P<0.05).结论 神经母细胞瘤组织中RECK低表达,而MMP-14高表达.RECK及MMP-14可能成为评估神经母细胞瘤发生浸润转移的重要指标.     

RECK及MMP-14蛋白在神经母细胞瘤组织中的表达及与肿瘤转移关系的研究

目的 检测RECK蛋白及膜型基质金属蛋白酶MMP-14在神经母细胞瘤中的表达,探讨其在神经母细胞瘤的发生、发展、浸润和转移中的作用.方法 选择临床及病理资料齐全的存档神经母细胞瘤蜡块标本36例,另取节细胞神经瘤蜡块标本10例作对照.采用第二代通用型二步法监测系统(PV-6000)免疫组织化学方法 检测RECK及MMP-14蛋白的表达.结果 RECK蛋白在神经母细胞瘤组织中低表达(16.7%),并随肿瘤浸润深度的加深、远处转移的发生而降低(P=0.015<0.05).MMP-14在神经母细胞瘤组织中高表达(58.3%),并随肿瘤浸润深度的加深、远处转移的发生而增高(P=0.002<0.05).神经母细胞瘤组织中RECK与MMP-14蛋白的表达呈负相关(r=-0.418,P<0.05).结论 神经母细胞瘤组织中RECK低表达,而MMP-14高表达.RECK及MMP-14可能成为评估神经母细胞瘤发生浸润转移的重要指标.     

RECK及MMP-14蛋白在神经母细胞瘤组织中的表达及与肿瘤转移关系的研究

目的 检测RECK蛋白及膜型基质金属蛋白酶MMP-14在神经母细胞瘤中的表达,探讨其在神经母细胞瘤的发生、发展、浸润和转移中的作用.方法 选择临床及病理资料齐全的存档神经母细胞瘤蜡块标本36例,另取节细胞神经瘤蜡块标本10例作对照.采用第二代通用型二步法监测系统(PV-6000)免疫组织化学方法 检测RECK及MMP-14蛋白的表达.结果 RECK蛋白在神经母细胞瘤组织中低表达(16.7%),并随肿瘤浸润深度的加深、远处转移的发生而降低(P=0.015<0.05).MMP-14在神经母细胞瘤组织中高表达(58.3%),并随肿瘤浸润深度的加深、远处转移的发生而增高(P=0.002<0.05).神经母细胞瘤组织中RECK与MMP-14蛋白的表达呈负相关(r=-0.418,P<0.05).结论 神经母细胞瘤组织中RECK低表达,而MMP-14高表达.RECK及MMP-14可能成为评估神经母细胞瘤发生浸润转移的重要指标.     

CTU及三维重建对小儿重肾和双输尿管畸形诊断价值

目的探讨CT尿路造影(CTU)检查及三维重建对重肾及双输尿管畸形的临床诊断价值。方法回顾性分析28例重肾、双输尿管畸形病人CTU检查及三维重建资料。病儿均应用64层螺旋CT机对自肾上极至耻骨联合范围行CT平扫和增强扫描,分别采用多平面重建(MPR)、最大密度投影(MIP)、曲面重建(CPR)和容积再现(VR)等软件进行图像处理。并与B超和手术结果比较。结果CTU检查及三维重建图像能够清晰显示双肾盂、双输尿管扩张或梗阻的部位和程度,本组28例先天性重肾、双输尿管畸形CTU检查及三维重建诊断结果全部与手术结果相符。结论CTU检查及三维重建是重肾和双输尿管畸形一种重要的影像学诊断方法,能够准确作出诊断,并可指导术式选择。