姜黄素调控β-分泌酶基因表达抑制老年性痴呆大鼠Aβ蛋白生成的机制

目的：探讨姜黄素对老年性痴呆（ Alzhelmer＇s disease,AD）大鼠海马区β-淀粉样前体蛋白（β-amyloid protein precursor,β-APP）和β-分泌酶（amyloidβ secretase1,BACE1）基因表达的影响。方法：采用Aβ1-40右侧海马区注射,制备AD大鼠模型,腹腔注射姜黄素给予治疗,采用ELISA法检测血清与海马组织中Aβ的含量,免疫组织化学法检测海马区神经元中β-APP蛋白表达,RT-PCR法检测海马组织中β-APP和BACE1 mRNA表达。结果：造模后大鼠血清和脑组织海马中Aβ含量显著升高,脑组织海马区神经元中β-APP蛋白表达、β-APP mRNA和BACE1 mRNA表达明显增加。与模型组比较,姜黄素高剂量组、低剂量组β-APP蛋白表达、β-APP mRNA和BACE1 mRNA明显降低,差异均有统计学意义（ P<0.05）。结论：姜黄素可通过对BACE1 mRNA调控作用,阻断β-APP裂解进程,抑制Aβ在脑内生成与沉积,从而减少Aβ对神经元的毒性作用。     

Alzheimer病铝中毒大鼠模型海马结构中β-APP和GFAP研究

目的　通过用氯化铝灌胃建立的Alzheimer病（AD）动物模型,探讨AD发病中星形胶质细胞增生和β-淀粉样蛋白前体（β-APP）的表达及可能的联系。方法　应用免疫组化方法观察AD动物模型中海马各区胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和β-APP表达情况。结果　（1）GFAP免疫组化标记可见动物模型海马各区星形胶质细胞明显增生（P＜0.01),且增生细胞在CA2和CA3区最明显。（2）β-APP免疫组化标记见动物模型海马各区内β-APP阳性细胞明显增多（P＜0.01),以CA2和CA3区最为明显。结论星形胶质细胞增生在AD发病早期即起作用,与β-APP过表达有密切关系。     

海风藤抑制淀粉样蛋白诱导神经细胞胞浆钙离子升高的研究

为了探索淀粉样蛋白（β－ＡＰ）对神经细胞毒性作用的抑制剂，应用水母发光蛋白导入法研究了海风藤对淀粉样蛋白第２５个氨基酸到３５个氨基酸片断（β－ＡＰ２５－３５）诱导神经细胞胞浆钙离子升高的影响，并应用细胞形态学、细胞存活率、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放、细胞集落等指标观察了海风藤对神经细胞的直接作用。结果显示，海风藤在实验浓度内（２．５ｇ／Ｌ～２５ｇ／Ｌ）对神经细胞无毒性作用；海风藤能抑制β－ＡＰ２５－３５诱导的神经细胞胞浆钙离子升高并随海风藤浓度增加而增强。提示海风藤对神经细胞有保护作用，为海风藤防治Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）提供了依据。     

海风藤抑制淀粉样蛋白诱导神经细胞胞浆钙离子升高的研究

为了探索淀粉样蛋白（β－ＡＰ）对神经细胞性作用的抑制剂，应用水母发光蛋白导入法研究了海风藤对淀粉样蛋白第２５个氨基酸到３５个氨基酸片断（β－ＡＰ２５－３５）诱导神经细胞胞浆钙离子升高的影响，并应用细胞形态学、细胞存活率、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放、细胞集落等指标观察了海风藤对神经细胞的直接作用。结果显示，海风藤在实验浓度内（２．５ｇ／Ｌ￣２５ｇ／Ｌ）对神经细胞无毒性作用；海风藤参抑制β－ＡＰ２５－３     

IL-1对大鼠脑组织β淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的：研究在整体动物水平白细胞介素1（interleukin1，IL－1）对β淀粉样前体蛋白（βamyloidprecursorprotein，APP）基因表达的影响。方法：大鼠侧脑室注射；Northern杂交。结果：首次证实IL－1β在整体动物水平可以诱导大鼠脑组织APPmRNA表达的增加，而且这种诱导作用具有时间依赖性。结论：IL－1β在体内、外均可诱导神经组织内APP基因的表达增加，进而在阿尔茨海默病（Alzheimerdisease，AD）中与促进β淀粉样蛋白（βamyloidprotein，βAP）的沉积可能密切相关。     

海风藤酚、甲基海风藤酚、海风藤醇A和海风藤醇B对兔血小板聚集的影响

海风藤酚、甲基海风藤酚、海风藤醇Ａ和海风藤醇Ｂ均有抑制血小板激活因子（ＰＡＦ）诱导的兔血小板聚集作用，ＩＣ_（５０）分别为１７．９、９．２、１４２．０、１４．０μｍｏｌ·Ｌ~（－１）。经阿司匹林（ＡＳＡ）、磷酸肌酸／磷酸肌酸激酶（ＣＰ／ＣＰＫ）预处理的兔洗涤血小板，甲基海风藤酚和海风藤醇Ｂ仍能抑制ＰＡＦ诱导的兔血小板聚集，ＩＣ_（５０）为９．０、１６．５μｍｏｌ·Ｌ~（－１）。同时，４种成分对于二磷酸腺苷（ＡＤＰ），花生四烯酸（ＡＡ）诱导的血小板聚集抑制作用较弱，海风藤Ｂ能使ＰＡＦ诱导血小板聚集量－效曲线平行右移，ＥＣ_（５０）由１．５９ｎｍｏｌ·Ｌ~（－１）升为２０．６ｎｍｏｌ·Ｌ~（－１）。结果表明：４种成分能选择性拮抗ＰＡＦ对兔血小板的聚集作用。     

脑室注射Aβ1—40对海马MAO—B、ChAT、TH基因表达的影响

目的 研究脑室注射Aβ1－40对海马单胺氧化酶B（MAO－B）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）、酪氨酸羟化酶（TH）基因表达的影响。方法 利用立体定向仪将Aβ1－40注射脑室，建立大鼠阿尔采海默病（AD）模型，采用逆转录PCR技术研究MAO－B、ChAT、TH在海马的差异表达。结果 通过莫氏水迷宫实验及胆碱乙酰转移酶的基因表达验证AD模型成功，MAO－B、ChAT、TH的RT－PCR结果表明表明该基因片段在AD鼠海马低表达。结论 MAO－B、ChAT、TH低表达，使神经递质Ach、DA合成减少，参与AD病理过程。     

海风藤抑制淀粉样前体蛋白表达的研究

目的研究中药海风藤对人类神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH淀粉样前体蛋白(APP)基因表达的影响。方法MTT比色法检测海风藤作用后SK-N-SH细胞活性,RT-PCR和Western blot方法分别检测APP基因mRNA及蛋白质的表达。结果海风藤能够选择性降低SK-N-SH细胞APP mRNA表达,且呈药物浓度依赖性,海风藤对APP几种同功异构体的表达均有不同程度的抑制作用。在实验药物浓度内,海风藤抑制APP的表达,未导致SK-N-SH细胞活性下降。结论海风藤能够选择性抑制SK-N-SH细胞系APP的表达。     

脑室注射Aβ1—40对海马NAPOR基因表达的影响

目的：研究脑室注射Aβ1－40对海马NAPOR基因表达的影响。方法：利用立体定向仪将Aβ1－40注射脑室，建立大鼠AD模型，采用逆转录PCR方法研究NAPOR在海马的差异表达，结果：通过莫氏水迷宫实验及胆碱乙酰转移酶的基因表达验证AD模型成功，NAPOR的RT－PCR结果表明该基因片段的AD鼠海马高表达，结论：NAPOR为RNA结合蛋白，其表达的时空模式与神经元凋亡密切相关，结果提示Aβ1－40对海马神经元的毒性可能通过改变NAPOR基因的表达，促进神经元凋亡而实现。     

β分泌酶1抑制剂：从多肽模拟物到小分子

阿尔茨海默病（AD）是一种慢性神经退行性疾病,脑内β淀粉样蛋白（Aβ）的异常聚集和沉积被认为是导致AD发生的主要原因。β分泌酶1（BACE1）是水解淀粉样前体蛋白（β-APP）生成Aβ的限速酶,成为干预AD进程的理想靶点。自从BACE1被克隆和鉴定后,人们设计和开发了多种结构类型的BACE1抑制剂。本文以基于结构发现的BACE1抑制剂的核心骨架为主线,对BACE1抑制剂的研究情况进行综述。     

中药呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的探讨呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白（β-APP）基因表达的影响。方法选用22月龄的老龄大鼠，用海人酸破坏脑基底核法，造成学习和记忆功能障碍的痴呆动物模型，通过水迷宫法和反转录聚合酶链反应（RT-PCR）观察了呆聪液对痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑内β-APP基因表达的影响。结果老龄痴呆模型大鼠学习记忆能力下降，脑内β-APP基因表达增强。呆聪液的3个不同剂量组与痴呆模型组比较差异有显著性（P〈0．05），都能明显提高学习记忆能力，降低脑内β-APP mRNA含量，并有一定的量效关系，结论呆聪液能改善老龄痴呆大鼠的学习和记忆功能并下调β-淀粉样前体蛋白基因的表达。     

TGF—β1对大鼠系膜细胞增殖和纤溶酶原激活物及其抑制剂表达的影响

目的：通过对大鼠系膜细胞转染TGF－β1基因和反义TGF－β1基因,观察该细胞增殖和纤溶酶原激活物及其抑制剂表达的影响。方法：采用MTT、细胞计数和流式细胞仪检测检测细胞增殖;Northernblot和Western blot法检测其纤溶酶原激活性物质抑制－1（PAI－1）的表达,酶谱分析法检测其纤溶酶原激活物（tPA)活性。结果：过表达TGF－β1的系膜细胞生长受抑制,其PAI－1mRNA和蛋白表达增强,而tPA酶活性则降低;而低表达TGF－β1的系膜细胞增殖加速,其PAI－1mRNA和蛋白表达降低,tPA酶活性增强。结论TGF－β1可通过对大鼠系膜细胞增、纤拳激活性及其抑制因子表达的影响,而促进肾小球纤维化的发性。     

短干扰RNA特异性抑制哺乳动物β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达

目的：探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶（β-site APP cleaving enzyme，BACE）的短干扰RNA（short interfering RNAs，siRNA）是否能抑制BACE在哺乳动物细胞中的表达，为阿尔茨海默病（AD）的治疗提供新的手段。方法：采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、U6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA（siBACE），随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN，通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE进行鉴定；制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株，用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果：成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论：成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达，为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供了重要的实验基础。     

佛波酯对促进人绒毛膜癌AJR细胞侵入机制的研究

目的：探讨佛波酯（PMA）是否通过改变细胞因子的生成而影响滋养细胞的侵袭性。方法：用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测人绒毛膜癌JAR细胞与侵袭力调节有关的多种细胞因子基因表达的变化。结果：JAR细胞表达肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF－Ⅱ）、转化生长因子β（TGF-β）、白细胞介素1β（IL－1β）和血管内皮生长因子（VEGF），且VEGF的表达以VEGF121和VEGF165为主，而不表达IGF－I。100nmol/L PMA处理细胞24h可显著上调IL－1β、HGF、IGFⅡ mRNA的表达，同时抑制TGF－β2、TGF－β3 mRNA的表达，而对TGF－β1、VEGF mRNA的表达未见有明显变化。结论：HGF、IL－1β、IGF－Ⅱ对滋养细胞的侵入起促进作用，而TGF－β2、TGF－β3具有抑制效应。说明丝裂原PMA可能通过调节这几种细胞因子的自分泌机制，从而增强JAR细胞的侵袭能力。     

银杏内酯对拟AD模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响

目的：研究银杏内酯对拟阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响。方法：采用冈田酸（OA）海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型，3周后银杏内酯腹腔注射，水迷宫行为学试验检测学习记忆能力，免疫组织化学方法观察海马CA1区Aβ1-40的表达。结果：与拟AD模型组比较，银杏内酯组平均逃避潜伏期明显缩短（P〈0．01），银杏内酯组海马CA1区Aβ1-40表达明显减少或消失（P〈0．01）。结论：银杏内酯显著改善拟AD模型大鼠学习记忆能力，其机理可能是抑制海马Aβ1-40的表达及tau蛋白磷酸化，减轻OA对大鼠海马神经元的病理损害。     

维拉帕米阻断TGF-β1诱导的α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活

目的：探讨维拉帕米对α1(Ⅰ）胶原基因启动子活性的影响。方法：将人α1(Ⅰ）胶原基因启动子重组体pCOLH1.5、pCOLH2.5转染至大鼠肾小球纱膜细胞，分别经不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1）和纺拉帕米处理后，ELISA法测定细胞CAT表达水平。结果：TGF－β1作用后，pCOLH1.5和pCOLH2.5的CAT活性明显增加，分别为对照组的1.498和1.551倍；维拉帕米对两上重组体的CAT表达均有抑制作用，与单纯TGF－β1组比较，维拉帕米加TGF－β1组pCOLH2.5的CAT活性明显降低（维拉帕米低浓度组P＜0.05，高浓度组P＜0.01）。结论：维拉帕米不仅直接抑制启动子的活性，而且还部分阻断TGF－β1诱导的α1(Ⅰ）胶原基因启动子激活。     

苦参碱对内皮素诱导心肌细胞肥大及肌球蛋白基因表达的影响

目的：探讨苦参碱对内皮素（ET）诱导心肌细胞肥大及肌球蛋白重链（MHC）基因表达的影响。方法：采用测定心肌细胞直径、数目、^3H－亮氨酸(^H-Leu）掺入率及分子杂交的方法，观察内皮素（ET）对大鼠培养心肌细胞肥大及MHC基因表达的影响，并用苦参碱治疗。结果：ET显著促进心肌细胞直径增大（P＜0．05）及^3H-Leu掺入率的增加（P＜0．01），并诱导心肌细胞β-MHC基因表达，α－MHC基因表达相对减少，苦参碱对ET诱导心肌细胞直径增大及^3H-Leu掺入率增加作用无明显影响，但显著抑制ET致心肌细胞MHC同功蛋白的病理性转换作用，即增加α－MHC基因表达，减少β－MHC基因表达。结论：苦参碱对ET诱导心肌细胞肥大作用无明显影响，但显著逆转MHC同功蛋白的病理性转换作用，故苦参碱在心肌细胞肥大的防治中仍有一定价值。     

重组腺病毒载体介导人抑瘤素M基因对胰腺癌细胞体外增殖的抑制作用

目的构建了含人抑瘤素M（HOSM）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体AD—HOSM，观察其对人胰腺癌细胞株Capan－2在体外生长抑制情况，为胰腺癌的基因治疗提供参考。方法通过同源重组方法构建含HOSM基因的缺陷型腺病毒载体AD—HOSM，报告基因AD—GFP检测腺病毒的对胰腺癌细胞系的转染效率；人胰腺癌细胞株Capan－2转染含HOSM基因的缺陷型腺病毒载体AD—HOSM后，用RT—PCR法检测外源HOSM基因在其中的表达；苔盘兰染色、细胞计数法检测AD—HOSM对Capan－2的体外增殖抑制情况。结果成功构建了重组腺病毒载体AD—HOSM，AD—HOSM对胰腺癌细胞Capan－2有较高的转染效率，HOSM基因在转染细胞能有效的表达。休外试验示AD—HOSM明显抑制CAPAN－2的的生长。结论重组腺病毒介导HOSM表达能有效抑制Capan－2在体外的增殖，提示重组腺病毒介导的HOSM基因治疗可能成为胰腺癌治疗的侯选方案。     

白细胞介素—10抑制人肾系统膜细胞脂酶A2及其前列腺素E2的合成

目的：观察白细胞介素－10（IL－10）对白细胞介素－1β（IL－1β）诱导的人系膜细胞HMC）胸质型磷脂酶A2（cPLA2）基因和蛋白表达及其前列腺素E2（PGE2）释放的影响。方法：利用体外培养的HMC，设立对照组、IL-10处理组、IL－1β处理组及IL－10＋IL－1β处理组；采用放免法检测培养上清中PGE2，应用逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）和蛋白质印迹（Western Blot)检测cPLA2mRNA和蛋白水平。结果：正常情况下，HMC低水平表达cPLA2mRNA和并蛋白并释放少量的PGE2；IL－1β能显著上调HMCPGE2释放及cPLA2mRNA和蛋白的表达（P值均＜0．01）；IL－10对基础状态下的HMCPGE2释放及cPLA2mRNA和蛋白表达无明显影响（P值均＞0．05），但可呈剂量依赖性地下调IL－1β诱导的PGE2释放及cPLA2mRNA和蛋白表达（P值均＜0．01）。结论：IL－10抑制诱导的HMCPGE2释放及cPLA2表达，提示IL－10对HMC具有多方面抗炎作用。     

脑室注射Aβ1—40对大鼠皮质和海马纤连蛋白基因表达的影响

目的：研究脑室注射Aβ1-40对大鼠皮质、海马纤连蛋白基因表达的影响。方法：通过脑室注射Aβ1－40，建立大鼠AD模型，采用逆转录PCR方法研究纤连蛋白在皮质、海马的表达情况。结果：通过Morris氏水迷宫实验、脑片刚果红染色及胆碱乙酰转移酶表达水平等方面验证AD模型成功，在AD鼠皮质、海马纤连蛋白基因高表达。结论：纤连蛋白为整合素的配体，Aβ1-40诱导基基因高表达可能介导Aβ1-40与小胶质细胞的结合，激活小胶质细胞促进神经元死亡。