肾肉瘤样癌1例

患者男性,56岁。间断性左上腹痛2个月。B超示左肾中极有2个回声结节。静脉肾盂造影示左肾软组织包块。术中见肾中极有一5 cm×6 cm×5 cm肿块,与周围分界清晰,遂行左肾切除术。病理检查巨检:肾切除标本10 cm×9 cm×6 cm大小,肾中极外皮质区可见大小5 cm×6 cm×4 cm肿块,无包膜,切面灰白、灰红色,有出血、坏死,其中可见一直径2 cm的灰白色结节,质细,无包膜。镜检:肿瘤部分由典型的透明细胞癌组成(图1),部分区域肿瘤则由长梭型、多形性瘤巨细胞组成;瘤细胞胞质丰富,红染或空淡透明,细胞核卵圆形、短梭形,核分裂平均6个/10 HPF。瘤组织排列…     

白血病肿瘤疫苗联合1-甲基色氨酸免疫治疗荷瘤小鼠疗效观察

 目的　探讨白血病肿瘤疫苗（简称瘤苗）主动免疫治疗及联合吲哚2,3双加氧酶（IDO）的抑制剂1-甲基色氨酸（1-MT）,在白血病荷瘤小鼠治疗中的作用。方法　采用FBL-3细胞皮下注射建立荷瘤白血病小鼠模型;实验分为5组：正常对照组、PBS对照组、环磷酰胺（CTX）化疗组、单用瘤苗治疗组和瘤苗联合1-MT治疗组;观察各组小鼠的一般状况、肿瘤缓解率、肿瘤大小、转移情况及生存期。结果　PBS对照组小鼠活动迟缓,体质量（含瘤结节质量）比其余各组均高;单用瘤苗组和瘤苗联合1-MT组小鼠活动、进食正常,体质量与正常小鼠差异不大;化疗组体质量明显减轻,出现脱毛、弓背、活动减少等,差异有统计学意义（F＝57.71,P＝000）;单用瘤苗组和瘤苗联合1-MT组治疗相关死亡率明显低于化疗组（0,0,40 %）。瘤苗联合1-MT组完全缓解率与单用瘤苗组（61.1 %、70.0 %）比较,差异无统计学意义（χ2＝0.221,P＞0.05）,但瘤苗联合1-MT组的复发率低于单用瘤苗组（0,36.36 %）;复发小鼠再应用1-MT,能明显抑制瘤结节的生长。单用瘤苗组和瘤苗联合1-MT组小鼠中位存活期明显高于化疗组和PBS对照组（χ2＝52.13,P＜0.01）。各组小鼠整体瘤结节的变化比较差异有统计学意义（F＝89.966,P＝0.000）。结论　白血病瘤苗在动物实验具有肯定的疗效,能明显抑制肿瘤的生长,延长小鼠生存时间,且副作用小。免疫治疗联合1-MT对白血病进行治疗,可以显著减少肿瘤的复发率;而免疫治疗有效后复发时应用1-MT,可以显著抑制肿瘤的生长。     

Eukaryocytic Expression of Human B7. 1 （CD80） and its Antileukemia Effect

Objective: To construct the human B7. 1 (CD80) eukaryocytic expressing veotor and its expression on HL60 cells to investigate the immunotherapeutic and immunoprotective effects of B7. 1 molecule on acute leukemia. Methods: ①B7. 1 gene was subcloned from the cloning vector using PCR. Both of the PCR products and eukaryocytic expressing vector pHook were digested with Apa I , Sal I and linked using T4 DNA ligase. The ligased products were transduced into DH5α.B7. 1 gene containing clones were selected by digestion with Apa I and Sal I which were further con-formed by sequencing. ②HL60 cells were transformed by B7. 1 with lipofectamine and detected by FACS.③Tumor formation, mice survival time and the immunotherapeutic and immunoprotective effects by immunization with B7. 1^ cells were evaluated. Results:①The PCR products were about 620 bp. Six clones were all digested by Apa I and Sal I to produce 620 bp gene fragment which was in the same way as B7. 1. It demonstrated that the recombinant vector had been constructed successfully. Further sequencing confirmed the validity of the construction. There was no nucleotide mutation. ②B7. 1 was availably expressed on HL60 cells. ③ B7. 1 HL60 cells delayed the growth of tumor and prolonged the survival time of leukemic mice, distinctively. So did the immunoprotection of B7. 1 HL60 cell. Conclusion: The human B7. 1(CD80) eukaryocytic expressing vector can be success-fully constructed by molecular cloned methods and can be stably and availably expressed on the membrane of B7. 1 negative acute myelocytic leukemia ( AML ) cell line HL60. Furthermore, the costimulatory molecalar vaccine has siipaficanl effection of immunotherapy and immunoprotection and gives the rationale for clinical application.     

短干扰RNA特异性抑制哺乳动物β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达

目的：探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶（β-site APP cleaving enzyme，BACE）的短干扰RNA（short interfering RNAs，siRNA）是否能抑制BACE在哺乳动物细胞中的表达，为阿尔茨海默病（AD）的治疗提供新的手段。方法：采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、U6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA（siBACE），随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN，通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE进行鉴定；制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株，用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果：成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论：成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达，为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供了重要的实验基础。     

吲哚胺-2,3-二氧化酶在肿瘤免疫中的作用的探讨

吲哚胺-2,3-二氧化酶（indoleamine-2,3-dioxygenase,简称IDO）是一种含铁血红素单体蛋白,也是一种黄素依赖酶,可以使色氨酸分解代谢.已有研究表明吲哚胺-2,3-二氧化酶与免疫排斥反应、病原体感染、中枢神经系统疾病（如抑郁）、硬皮病-筋膜炎-嗜酸粒细胞增多综合征以及自身免疫病中的消耗症状等有关.近年来发现该物质在肿瘤免疫过程中也有着重要的作用.本文就其在肿瘤免疫中的作用做一综述.     

在哺乳动物细胞中用于表达干扰RNA的启动子

RNA干扰是由双链RNA诱导的特异性转录后基因表达沉默。目前用于在哺乳动物细胞中表达干扰RNA的启动子分为RNA聚合酶Ⅲ类启动子(polⅢ)及RNA聚合酶Ⅱ类启动子(polⅡ)。不同的启动子及经过不同方法改造后的启动子能满足不同研究目的的需要,从而极大地拓展了RNA干扰的应用范围。     

干扰素-γ在肿瘤免疫编辑过程中的作用

免疫系统不仅具有抑制、杀伤肿瘤细胞的保护性功能，同时对肿瘤细胞亦有“塑形作用”，使其获得弱的免疫原性而逃逸。干扰素-γ在肿瘤免疫编辑过程中发挥关键作用，但不同阶段其作用机制各不相同。     

构建RNA干扰载体特异性抑制绿色荧光蛋白表达的研究

目的:利用PCR构建RNA干扰质粒载体的方法,促进RNA干扰技术的广泛开展.方法:PCR方法获得小鼠U6 27启动子序列,以及干扰绿色荧光蛋白(EGFP)表达的siRNA的相应DNA模板序列.将其序列克隆入pUC19,获得RNA干扰载体pU6-siEGFP.将pU6-siEGFP及pcDNA3.1/EGFP共转导COS-7细胞,观察EGFP表达情况.结果:所构建的pU6-siEGFP能够成功干扰COS-7细胞中EGFP的表达.结论:PCR方法成功构建了RNA干扰载体,为RNA干扰技术在更多实验室的广泛开展奠定基础.     

吲哚胺2,3-二氧化酶在人急性单核细胞白血病(M5)和急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及其抑制剂1-甲基色氨酸的治疗作用

本研究旨在探讨吲哚胺2,3-二氧化酶（IDO）在白血病细胞中的表达和作用。应用间接免疫荧光染色光法检测人急性单核细胞白血病（M5）和急性淋巴细胞白血病（ALL）的细胞内吲哚胺2,3-二氧化酶的表达情况,并以小鼠急性淋巴细胞白血病细胞系L1210建立白血病小鼠模型以观察吲哚胺2,3-二氧化酶抑制剂1-甲基色氨酸是否具有抑制白血病细胞生长的作用。结果表明：M5和ALL的白血病细胞中吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率分别为29.4±11.2%和24.7±7.96%,而对照组的外周血单个核细胞中吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率仅为3±1.2%;两个白血病组与正常对照组在吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率方面的差异均有显著的统计学意义（P〈0.05）,而M5与ALL组之间在吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率方面无显著性差异（P〉0.05）;1-甲基色氨酸（1-MT）治疗的白血病小鼠与对照组比较,肿瘤消退,生存期延长（P〈0.05）,部分治疗小鼠达到无病长期生存（注射肿瘤细胞后生存期超过3个月）。结论：人急性单核细胞白血病（M5）和急性淋巴细胞白血病（ALL）的细胞均表达吲哚胺2,3-二氧化酶,1-甲基色氨酸对白血病小鼠有一定的治疗作用。     

多发性骨髓瘤相关抗原的免疫学筛选及生物信息学分析

本研究采用“cDNA表达文库的血清学分析（ serological analysis of cDNA expression library, SEREX ）”技术筛选骨髓瘤HMy2细胞cDNA表达文库。将得到的30个阳性克隆全部进行测序,并进行BLAST同源序列比对分析。结果表明：获得已知基因6条,骨髓瘤相关肿瘤抗原新基因12条。经部分序列EST拼接,已知基因6条如环指蛋白167、KLF10因子、TPT1蛋白、p02蛋白、cDNA FLJ46859 fis、DNMT1甲基转移酶等,它们与其他肿瘤的形成、发展与预后有一定的关系。利用生物信息学对新基因结构和功能初步分析和预测显示,其中MMSA-3、MMSA-8和MMSA-11有完整的编码区,编码的蛋白长度分剐为215、160和122个氨基酸;除MMSA-1可能定位于性染色体,其余均可能定位于常染色体;MMSA-4和控制转录的肿瘤蛋白高度相似,MMSA-5可能参与细胞的吞噬作用,MMSA-7可能使NF-κB失活,MMSA-12可能为淋巴细胞的胞质蛋白。CrELISA初步分析表明,MMSA-3和MMSA-7等新基因特异性较高。结论：本项研究所筛选和鉴定的肿瘤抗原可用于多发性骨髓瘤的早期免疫学诊断、残留病灶监测、判断预后及肿瘤疫苗制备等多种研究。