热休克蛋白70基因转染抗心肌细胞凋亡对缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 观察比较热休克蛋白70对心肌细胞急性实验性缺氧/复氧损伤的保护作用及其与热休克心肌细胞保护模型之间作用的异同.方法 进行大鼠乳鼠原代心肌细胞培养,分为4组:空白组(对照),缺氧/再灌组(A/R),热休克蛋白组(A/R+HS)和pCDNA热休克蛋白质粒组(pCDNA HSP70).用脂质体对pCDNA HSP70质粒包裹,并转导入相关心肌细胞内.RT-PCR检测HSP70 mRNA表达、Western印迹检测HSP70蛋白质表达.检测心肌细胞存活率(四甲基偶氮唑蓝比色法)、培养液中乳酸脱氢酶活性、心肌细胞超微结构改变(透射电镜)及凋亡指数观察心肌细胞损伤程度.结果 A/R+HS组和A/R+pCDNA HSP70组细胞存活率显著提高(71.8±10.3)%、(73.4±12.2)%;(LDH)活性明显降低(14.3±2.6)IU/L、(14.6±2.9)IU/L;细胞超微结构明显改善;A/R组的HSP7o mRNA和蛋白质含量比A/R+HS组和A/R+pCDNA HSP70组,明显偏低(1.87±0.23、2.05±0.34倍P＜0.01).二者的细胞凋亡指数也较A/R组明显降低.结论 HSP70基因高表达能对抗缺氧/复氧对心肌细胞的损伤,其作用与抗细胞凋亡有关.     

缺血后处理对高血脂大鼠缺血/再灌注心肌热休克蛋白的影响

目的研究缺血后处理对高血脂大鼠缺血/再灌注心肌热休克蛋白（HSP70）的影响。方法选择高血脂SD大鼠36只,随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组（对照组）和缺血后处理组,每组12只。制备大鼠心肌缺血/再灌注模型。缺血再灌注组：收紧结扎线缺血40 min,放松结扎线再灌注240 min;缺血后处理组：缺血40 min后,再灌注10 s,缺血10 s,连续3个循环,然后再灌注240 min;假手术组：开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线。免疫组织化学染色检测HSP70的表达,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,同时测定血清肌酸激酶活性。结果①血清肌酸激酶活性测定：再灌注结束后缺血后处理组和缺血再灌注组肌酸激酶活性明显高于假手术组,分别为（706.26±48.54）U/L、（914.48±61.37）U/L和（278.62±27.98）U/L（P〈0.05）,缺血后处理组明显低于对照组（P〈0.05）。②心肌凋亡细胞计数：再灌注结束后假手术组未见明显细胞凋亡（〈5%）,缺血后处理组心肌细胞凋亡率明显低于缺血再灌注组,分别为（13.9±2.6）%和（21.8±3.4）%（P〈0.05）。③心肌热休克蛋白表达：缺血后处理组较对照组心肌热休克蛋白表达增强（P〈0.05）。结论缺血后处理可减轻高血脂大鼠缺血再灌注损伤,其机制可能与增强热休克蛋白表达,减少心肌细胞凋亡有关。     

缺血预处理诱导心肌缺血再灌注中HSP70mRNA表达的研究

目的探讨缺血预处理(IPC)对心肌缺血再灌注过程中心肌细胞HSP70mRNA表达的影响。方法钳夹犬的左冠状动脉前降支，造成心肌缺血再灌注模型，应用核酸分子杂交技术观察IPC组与对照组子缺血前及缺血1h后行再灌注达1、2、4h的HSP70mRNA表达水平。并在透射电镜下观察两组中再灌注1h心肌组织超微结构的变化。结果缺血前IPC组HSP70mRNA水平较对照组明显升高(P＜0.05)；缺血再灌注达1h、2h时，两组HSP70mRNA水平有继续增高的趋势，但IPC组较对照组有显著性差异(P＜0.05)；再灌注达4h时，两组HSP70mRNA水平均下降，并接近对照组缺血前水平(P＞0.05)。电镜观察显示，IPC组心肌细胞损伤较对照组明显减轻。IPC能够诱导心肌细胞中HSP70mRNA早期迅速表达，并在缺血再灌注的一定时间内呈表达增高的趋势。结论HSP70可能作为IPC发挥心肌保护作用的一种介质，为进一步开发和利用IPC的心肌保护作用提供理论依据。     

HSP 72 mRNA的表达在肝脏热缺血-再灌注损伤中的意义

目的研究大鼠肝脏热缺血-再灌注中热休克蛋白(HSP 72) mRNA表达的意义.方法 40只SD大鼠随机分成亚砷酸钠组(SA组)和对照组(NS组).前者预先外周静脉给予SA每千克体质量6 mg,后者给予生理盐水.24 h后阻断肝脏中、左叶血供90 min,再灌注3、6 h,分别采用RT-PCR、Western blot方法检测肝脏中HSP 72 mRNA和HSP 72的表达;外周血测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH);观察7 d存活率.结果肝脏热缺血90 min再灌注3、6 h后,SA组和对照组均有强HSP 72 mRNA表达;SA组有强HSP 72表达,对照组则弱表达;对照组血清ALT、AST、LDH显著高于SA组(P＜0.01);SA组7 d生存率显著高于对照组(P＜0.05).结论肝脏热缺血-再灌注可诱导肝脏产生热休克反应,HSP 72 mRNA的表达反映了肝脏的损伤程度;预先诱导肝脏产生热休克反应,HSP 72 mRNA的表达则反映了肝脏提前出现应激反应,HSP 72的产生直接对肝脏热缺血-再灌注损伤提供细胞保护作用.     

HSP 72 mRNA的表达在肝脏热缺血-再灌注损伤中的意义

目的研究大鼠肝脏热缺血—再灌注中热休克蛋白(HSP 72)mRNA表达的意义。方法40只SD大鼠随机分成亚砷酸钠组(SA组)和对照组(NS组)。前者预先外周静脉给予SA每千克体质量6 mg,后者给予生理盐水。24 h后阻断肝脏中、左叶血供90 m in,再灌注3、6 h,分别采用RT-PCR、W estern b lot方法检测肝脏中HSP 72 mRNA和HSP 72的表达;外周血测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH);观察7 d存活率。结果肝脏热缺血90 m in再灌注3、6 h后,SA组和对照组均有强HSP 72 mRNA表达;SA组有强HSP 72表达,对照组则弱表达;对照组血清ALT、AST、LDH显著高于SA组(P<0.01);SA组7 d生存率显著高于对照组(P<0.05)。结论肝脏热缺血—再灌注可诱导肝脏产生热休克反应,HSP72 mRNA的表达反映了肝脏的损伤程度;预先诱导肝脏产生热休克反应,HSP 72 mRNA的表达则反映了肝脏提前出现应激反应,HSP 72的产生直接对肝脏热缺血—再灌注损伤提供细胞保护作用。     

吗啡预处理对缺血再灌注损伤后大鼠心脏中Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨吗啡预处理(MP)对大鼠全心缺血再灌注损伤(IRI)后心肌组织中Caspase-3表达水平以及心肌细胞凋亡的影响.方法 雄性成年SD大鼠51只随机分为3组:对照组(Sham组)、全心缺血再灌注组(IR组)、MP组(1μmol/L).Sham组持续灌注195 min.IR组灌注K-H液45 min后制备离体全心缺血30 min再灌注10、60、120 min模型.MP组于缺血前灌注含吗啡K-H液和无吗啡K-H液各5 min,3个循环.氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定梗死区(IS)、缺血危险区(AAR)以及IS/AAR比值;化学比色法测定冠脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)活性;Western blot及TUNEL染色分别测定心肌组织Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡情况.结果 与Sham组比较,IR组再灌注末心肌梗死体积百分比增加,再灌注后各时间点LDH活性、Caspase-3蛋白表达及心肌细胞凋亡比率均显著升高(P＜0.05);与IR组比较,MP显著降低IS/AAR比值和再灌注后各时点LDH活性、Caspase-3蛋白表达以及心肌细胞凋亡比率(P＜0.05);IR组与MP组均以再灌注10 min时LDH水平、再灌注60 min时Caspase-3蛋白表达和再灌注120 min时细胞凋亡比例最高.结论 MP的心肌保护作用与降低再灌注前期Caspase-3蛋白表达及减轻再灌注后心肌细胞凋亡有关.     

热休克蛋白27在缺血后处理肾组织中的表达及意义

目的 观察热休克蛋白27（HSP27）在缺血后处理（IPO）肾组织中的表达及分布情况,探讨其在肾缺血后处理中的作用.方法 结扎右侧肾蒂,夹闭左侧肾蒂60 min、再灌注24 h制备肾缺血/再灌注损伤模型.雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组（S组）、缺血/再灌注组（I/R组）、缺血后处理组（IPO组）,每组8只.再灌注24 h后处死大鼠,腹主动脉取血并切取左肾.测定血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）浓度;光镜下观察肾组织病理学改变;免疫组织化学方法检测肾组织中HSP27的表达;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡指数（AI）.结果 与S组比较,I/R组Cr和BUN浓度显著升高,组织损伤明显,肾组织中HSP27表达增多,肾小管上皮细胞凋亡指数较高（P〈0.05）;与I/R组比较,IPO组Cr和BUN浓度显著降低,组织损伤较轻,HSP27表达进一步增强,肾小管上皮细胞凋亡指数较低（P〈0.05）.结论 肾缺血后处理能上调肾组织中HSP27的表达,抑制肾小管上皮细胞凋亡,继而减轻肾缺血/再灌注损伤.     

HSP-70和HO-1诱导对鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨缺血预处理(IPC)和阿霉素预处理(DPC)延迟保护作用的发生机制.方法:建立大鼠部分肝脏热缺血再灌注模型.IPC组采用肝脏缺血10 min,再灌注10 min,DPC组经静脉注射阿霉素(1 mg/kg体重),对照组等量生理盐水注射.肝组织热休克蛋白70(HSP-70)、血红素氧化酶1(HO-1)蛋白、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)浓度分别采用Western blot法和ELISA法测定.结果:IPC后HO-1和HSP-70含量分别于12 h和24h达到高峰;IPC和DPC后24 h诱导HSP-70、HO-1的量无显著差异(P＞0.05).对照组缺血再灌注后3 h血清中TNF-α、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)及湿重/干重(W/D)的水平明显升高,而IL-10的含量降低,与假手术组相比差异显著(P＜0.01);IPC或DPC后降低了TNF-α的释放和AST、ALT、LDH及W/D的水平,提高了IL-10的含量,与对照组相比差异显著(P＜0.01).结论:IPC和DPC的延迟保护作用与HSP-70和HO-1的诱导生成有关.     

艾灸预处理对心肌缺血再灌注大鼠细胞凋亡及HSP70 mRNA表达的影响

目的：探讨艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法：利用大鼠心肌缺血再灌注模型,观察艾灸预处理组（分为艾灸每日1次组和艾灸每日2次组）、缺血预处理组、单纯模型组、假手术组和正常对照组大鼠细胞凋亡及热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）mRNA表达的情况。结果：艾灸预处理组细胞凋亡降低,HSP70 mRNA表达增加,且与艾灸预处理的次数有相关性。艾灸预处理每日1次与缺血预处理预防心肌缺血再灌注损伤的效应无显著性差异,艾灸预处理每日2次纽优于缺血预处理组。结论：艾灸预处理对心肌细胞缺血再灌注具有保护作用,其效应与每日艾灸次数有关。     

L-卡尼汀对移植再灌注损伤心肌热休克蛋白70表达的影响

目的探讨L卡尼汀对大鼠心脏移植再灌注损伤心肌热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法采用大鼠颈部异位心脏移植模型,将SD大鼠随机分为2组:L卡尼汀组和对照组。采用免疫组化和Westernblot检测再灌注2h心肌HSP70的表达,电镜观察心肌线粒体的病理变化。结果L卡尼汀组心肌HSP70的表达较对照组明显升高(P<0.01),心肌线粒体等结构损伤明显减轻。结论L卡尼汀对移植再灌注损伤心肌的保护作用可能与其诱导心肌HSP70的表达有关。     

热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡及其机制

目的：探讨缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡发生的机制及热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡的机制。方法：采用结扎小鼠左冠状动脉制备在体小鼠心肌缺血-再灌注损伤（I/R）模型，经DNA ladder检测细胞凋亡，并检测caspase-3，caspase-8，caspase-9的活性。部分小鼠经热休克预处理后再进行上述实验。 结果：缺血-再灌注后心肌组织中出现DNA梯状条带，caspase-3，caspase-8，caspase-9活性显著增高；热休克预处理后，多种热休克蛋白（HSPs）表达增加，DNA片断化减轻及caspase的活性受到抑制。结论：缺血-再灌注损伤可激活膜死亡受体信号通路和线粒体信号通路，导致心肌细胞凋亡；通过诱导多种HSPs的表达，热休克预处理可抑制上述两条信号通路的活化和心肌细胞凋亡的发生。     

热休克蛋白70对H2O2损伤心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对损伤大鼠心肌细胞凋亡的保护作用.方法体外培养大鼠心肌细胞,免疫组化、DNA Ladder、流式细胞仪、细胞色素C氧化酶比活力的测定、电镜观察等作为检测指标,观察过氧化氢(H2O2)造成心肌细胞损伤,以及HSP70的保护作用.结果温度诱导后HSP70在胞浆中大量表达,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力有显著性差异(P<0.01).电镜观察损伤组细胞膜、细胞器损伤明显,并出现凋亡小体.结论 HSP70可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用.     

缺血后适应对再灌注小鼠心肌梗死面积、心肌酶以及血流动力学的影响

目的：探讨缺血后适应对小鼠心肌缺血再灌注（I/R）损伤的影响,为临床急性心肌缺血事件发生后的心肌保护措施提供可靠的实验依据。方法：成年60只雄性KM小鼠随机分为缺血后适应、I/R、假手术3组,每组20只。后适应组采用开胸手术结扎左冠状动脉缺血45min,建立急性心肌梗死模型,在完全再灌注早期给予反复短暂再通/闭塞的后适应;I/R组为同期开胸完成I/R,在结扎冠状动脉前后不做任何特殊处理;假手术组开胸不结扎冠状动脉。采用伊文思蓝（Evans blue）和三苯基氯化四氮唑（TTC）染色的方法确定缺血心肌范围[缺血心肌重量（AI）/左室重量（LV）]以及梗死心肌范围[梗死心肌重量（AN）/AI],并测定血清磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平以及血流动力学指标主动脉平均动脉压（MAP）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）及左心室压力变化最大、最小速率（dp/dtmax、dp/dtmin）。结果：缺血后适应组与I/R组小鼠AI/LV、AN/AI均大于假手术组（P〈0.05）,缺血后适应组AN/AI明显小于I/R组（P〈0.05）;缺血后适应组血清CK、LDH、AST水平均明显低于I/R组（P〈0.05）;与I/R组比较,缺血后适应组MAP、LVSP、dp/dtmax、dp/dtmin明显升高而LVEDP明显降低（P〈0.05）。结论：在恢复冠脉血流的早期施行缺血后适应可以有效地减少小鼠再灌注心肌梗死面积,降低血清心肌酶的水平,并改善心功能的恶化。     

热休克蛋白70对兔未成熟心肌和心肌间质的影响

目的: 探讨热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌和心肌间质的影响. 方法:健康新生长耳大白兔12只随机分为2组. 对照组(C组):ip生理盐水0.4 mL,24 h后取离体心脏,常规建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注15 min转为工作心15 min后停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min;实验组(E组):ip去甲肾上腺素, 24 h后取离体心脏,方法同对照组. 测定心肌细胞中HSP70含量、血流动力学指标、心肌含水量(MWC)、心肌肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量、心肌组织羟脯氨酸(HP)含量、内皮素(ET) 含量、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体Ca2 -ATPase活性及其Ca2 含量、心肌线粒体合成ATP能力[ATP]m,心肌超微结构. 结果:E组HSP70含量明显高于C组(P<0.01);MWC低于C组(P<0.05);ATP含量、SOD活性、心肌线粒体Ca2 -ATPase活性、[ATP]m, HP含量优于C组(P<0.01),MDA含量、CK, LDH漏出率、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体Ca2 含量、ET含量低于C组(P<0.01),心肌超微结构损伤较C组明显减轻. 结论:HSP70对缺血再灌注未成熟心肌和心肌间质具有明显的保护作用.     

核黄素对异丙肾上腺素所致的缺血后再灌注损伤大鼠心肌的保护作用

目的:观察核黄素对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)引起的心肌缺血后的离体心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用。方法:健康雄性SD大鼠30只,随机分为3组,即正常对照组(NC),心肌缺血组(MI),核黄素预处理组(RBF),每组10只。采用大剂量ISO复制大鼠心肌缺血损伤模型,测定3组血清中过氧化氢酶(CAT)活性,乳酸脱氢酶(LDH)含量及血小板聚集性;随后3组均采用Langendroff离体心脏灌流装置再复制心肌缺血再灌注模型,分别测定心肌匀浆中CAT活性,LDH及丙二醛(MDA)含量。结果:与MI组相比较RBF组可明显降低血清中LDH含量(P<0.01)并可明显抑制血小板聚集性(P<0.05),显著提高血清CAT活性(P<0.05);离体心脏缺血再灌注后RBF组可显著提高MI组心肌匀浆中的CAT活性(P<0.05),显著降低MDA含量(P<0.05)。结论:核黄素对ISO所致的心肌缺血后的离体心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化,稳定细胞膜和改善微循环有关。     

葛根素对大鼠急性脑缺血及缺血再灌注损伤后HSP70蛋白表达的影响

目的：探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤及缺血再灌注损伤后HSP70表达的影响.方法：采用夹闭大脑中动脉造成局部脑缺血模型,夹闭大脑中动脉后再通造成局部脑缺血再灌注模型,对脑组织用免疫组化SP法作HSP70染色,观察其HSP70表达情况.结果：大鼠急性脑缺血损伤后葛根素干预实验组的HSP70表达强度明显强于单纯缺血实验组（P〈0.01）;大鼠脑缺血再灌注损伤后葛根素保护组实验侧HSP70表达强度明显强于非保护组实验侧（P〈0.01）.结论：葛根素有上调大鼠急性脑缺血及缺血再灌注损伤后HSP70表达的作用.     

丙泊酚预处理对兔心肌缺血再灌注损伤能量代谢的影响(英文)

目的观察丙泊酚预处理对兔心肌缺血再灌注损伤（MIRI）能量代谢的影响。方法实验用新西兰雄性大白兔40只，随机分为4组（n=10）：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IR组）、缺血预处理组（IP组）和丙泊酚预处理组（PP组）。采用高效液相色谱（HPLC）法测定心肌组织中高能磷酸化合物三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）和总腺苷酸量（TAN）、能荷（EC）的含量。检测心肌组织Na＋／K＋-ATPase，Ca^2＋／Mg2＋-ATPaSe和血清乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸激酶（CK）的活性。结果IP组和PP组较IR组的ATP、ADP、AMP、TAN和EC含量明显增加，ATPase活性显著升高，LDH、CK-MB含量明显降低（P〈0．05，P〈0．01）。而IP组与PP组比较，各指标差异无统计学意义（P〉0.05）。结论丙泊酚预处理同缺血预处理一样可改善缺血再灌注损伤时的心肌能量代谢，其作用机制可能与增加缺血区的心肌能量储备。保护ATPase活性，改善能量代谢障碍有关。     

缺血预适应减轻心肌缺血-再灌注损伤的机制研究

目的:探讨缺血预适应在预防或减轻心肌细胞损伤和心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用新西兰兔制备缺血预适应(IP)、缺血-再灌注损伤(RI)、持续缺血(CI)和正常对照组(control)4种模型。模型制备后采集血标本,以及心脏病变部位心肌标本,并常规组织学处理、石蜡包埋后切片。结果:①CI组心肌梗死面积最大,其次为RI组,均明显高于IP组(P<0.01);②RI组和CI组的血清各项心肌酶含量均明显高于control组和IP组(P<0.01),而后两组之间则无显著性差异(P>0.05);③RI组和CI组的血浆SOD活性均明显降低,尤其以RI组最为显著,与IP组和control组相比较(P<0.01);而在control组和IP组之间则无显著性差异(P>0.05);RI组的血清丙二醛含量明显高于其他各组(P<0.01);④缺血预适应组虽然也有一定的心肌细胞凋亡率,但较再灌注损伤组和持续缺血组则明显为低(P<0.001)。⑤从各组心肌梗死面积与细胞凋亡发生率的相关分析中,可见心肌凋亡细胞的数量与心肌梗死面积的大小之间有明显的正相关(RI、IP和CI组的γ值分别为0.92,0.94和0.87,P<0.01)。结论:在心肌缺血缺氧早期,心肌梗死面积的大小与心肌细胞凋亡数量的多少有关;缺血预适应处理能减轻缺血-再灌注和持续缺血引起的心肌损伤,减少心肌梗死面积;同时能明显减少这2种情况所诱导的心肌细胞凋亡的发生率。     

黄芪多糖对Hhcy大鼠心肌缺血再灌注过氧化的影响

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus Polysacharin,APS)对高同型半胱氨酸血症(hyperhomecysteinemia,Hhcy)大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:应用腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml/kg复制Hhcy大鼠模型,10周后,腹腔注射戊巴比妥钠麻醉下气管插管安装呼吸机,开胸结扎冠状动脉左室降支90 min后松开结扎线再灌注90 min。标Ⅱ导联全程记录心电图,并于再灌注90 min取血。检测肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)、同型半胱氨酸(Hcy)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)。结果:每天腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml/kg,10周后,血浆Hcy升高。黄芪多糖干预组与Hhcy模型对照组比较CK、LDH、Tn-Ⅰ水平明显降低,而CAT、SOD明显升高。结论:黄芪多糖对Hhcy大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与抗过氧化密切相关。