热休克反应对内毒素所致小鼠巨噬细胞炎症因子表达的抑制作用与MAPK信号转导通路的关系研究

【目的】探讨热休克反应(HSR)对内毒素(LPS)所致MAPK信号通路的影响。【方法】采用400ng／ml LPS处理小鼠巨噬细胞(RAW264．7)，通过免疫印迹，抗磷酸化抗体检测ERK、JNK、p38的磷酸化。热休克反应是将巨噬细胞在42℃的条件下培养1h，随后在37C，5％CO2条件下恢复12h。【结果】ERK、JNK、p38在LPS处理15min后即被活化，30min达高峰并持续至45min，90min后开始恢复。RT—PCR检测发现TNF—α、IL-15 mRNA水平增高。细胞经HSR(42℃ 1h，并恢复12h)后，再经LPS刺激则TNF—α、IL-15 mRNA转录受抑制，但HSR对JNK、p38、ERK等三种MAPK的活化(磷酸化)无影响。【结论】HSR抑制LPS所致的炎症因子表达不涉及MAPK信号通路。     

消化性溃疡治疗的新进展

消化性溃疡的治疗研究具有重要意义。首先阐述了消化性溃疡的产生原因,其次从外科手术新发展、药物治疗新发展方面分析消化性溃疡治疗的新进展,为消化性溃疡的治疗提供参考。     

硬膜外穿刺致棘间韧带损伤性顽固性腰痛8例

自 1998年以来 ,我院收治因硬膜外麻醉穿刺而致棘间韧带损伤性顽固性腰痛患者 8例 ,采用保守疗法 ,效果好。1　临床资料1 1　病例资料　本组男 3例 ,女 5例 ,年龄最小 2 0岁 ,最大 5 0岁。Ｔ12 ～Ｌ13例 ,Ｌ1、2 5例 ,髂胫束松解术2例 ,胫骨骨折切开复位内固定术 3例 ,股骨干骨折切开复位内固定术 1例 ,外踝副韧带重建术 2例。疼痛时间最长 3年 ,最短 2个月。 2例术后仍有疼痛 ,时轻时重 ;6例术后下地活动后出现症状 ,平卧位症状消失 ,腰部前屈或后伸均出现疼痛 ,以前屈位为甚 ,呈“刀割样”剧痛。1 2　治疗方法　病史在 2个月以内者 ,以 …     

热休克反应对氧化应激所致nucleolin裂解的影响

观察热休克反应对氧化应激（0.5 mmol/L H2O2）诱导细胞凋亡发生时 nucleolin(C23)裂解的影响并探讨其机制。方法： 采用caspase-3 活性定量分析及免疫印迹技术检测氧化应激诱导的原代心肌细胞、RAW 264.7巨噬细胞 及K562白血病细胞凋亡及C23的裂解；通过热休克反应观察热休克反应对C23裂解的影响。结果： 0.5 mmol/L H2O2处理细胞2 h caspase-3活性显著升高，12 h达高峰。免疫印迹结果显示上述各种细胞的C23蛋白均发生了裂解（有80 kD裂解片断出现），而且最早出现裂解片段的时间都在H2O2处理30 min到1 h左右；同时热休克反应通过诱导HSP70，HSP25等应激蛋白表达而显著减少氧化应激所致C23的裂解。结论： 氧化应激诱导凋亡发生的同时也引起C23的裂解；热休克反应显著抑制氧化应激所致C23的裂解，其机制与热休克反应诱导多种热休克蛋白表达有关。     

热休克预处理抑制过氧化氢所致C2C12肌原细胞释放天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物及细胞凋亡

为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响，采用0.5mmol／L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞。Hoechst33258荧光染色，观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率，抽提DNA作琼脂糖电泳，以确定细胞凋亡情况。采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化情况。采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放。结果发现，过氧化氢处理1～2h，第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆；处理4h天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9活性升高，12h达高峰；处理24h细胞明显出现凋亡，凋亡百分率明显升高。热休克预处理可诱导C2C12肌原细胞中热休克蛋白90，热休克蛋白70及αβ-晶状体蛋白的表达增高：抑制第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化及细胞凋亡的发生。结果提示，线粒体信号通路在过氧化氢所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用；热休克预处理通过抑制上述通路而减轻过氧化氢所致的细胞凋亡，其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体向胞浆释放、从而抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化有关。     

新辅助化疗诱导结肠癌细胞凋亡及IκBα mRNA的表达

目的探讨羟基喜树碱 (HCPT)联合 5 氟尿嘧啶 (5 Fu)和甲酰四氢叶酸钙 (CF)新辅助化疗诱导结肠癌细胞凋亡及其可能的分子机制。方法2 0例结肠癌患者术前静脉滴入HCPT 10mg/d ,5 Fu5 0 0mg/d,CF 2 0 0mg/d ,共 5天即一周期。术中取结肠癌组织标本 ,应用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的生化改变 ,比色法检测Caspase 3的活性 ,RT PCR半定量技术检测IκBαmRNA的表达 ,并与同期术中取得的 2 0例术前未化疗患者的结肠癌组织及癌旁正常肠组织作比较。结果①新辅助化疗组结肠癌细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的特征性梯状条带 ,术前未化疗组结肠癌细胞无明显的DNA梯状条带 ;②结肠癌细胞Caspase 3活性新辅助化疗组较术前未化疗组结肠癌细胞及癌旁正常结肠细胞明显增高 (P <0 .0 5 ) ;③新辅助化疗诱导后 ,结肠癌细胞IκBαmRNA的表达明显上调 (P <0 .0 5 )。结论HFCF方案新辅助化疗可能通过上调IκBαmRNA表达、激活Caspase 3活性诱导人体内结肠癌细胞凋亡而起作用。     

热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡及其机制

目的：探讨缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡发生的机制及热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡的机制。方法：采用结扎小鼠左冠状动脉制备在体小鼠心肌缺血-再灌注损伤（I/R）模型，经DNA ladder检测细胞凋亡，并检测caspase-3，caspase-8，caspase-9的活性。部分小鼠经热休克预处理后再进行上述实验。 结果：缺血-再灌注后心肌组织中出现DNA梯状条带，caspase-3，caspase-8，caspase-9活性显著增高；热休克预处理后，多种热休克蛋白（HSPs）表达增加，DNA片断化减轻及caspase的活性受到抑制。结论：缺血-再灌注损伤可激活膜死亡受体信号通路和线粒体信号通路，导致心肌细胞凋亡；通过诱导多种HSPs的表达，热休克预处理可抑制上述两条信号通路的活化和心肌细胞凋亡的发生。     

热休克预处理抑制过氧化氢所致心肌细胞Smac的释放及细胞凋亡

目的：探讨热休克预处理(heat shock pretreatment，HS)对过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)所致心肌细胞凋亡及促凋亡分子线粒体释放的第二种Caspase激活物(the second mitochondria-deftved activator of easpases，Smac)从线粒体释放的影响。方法：①采用H2O2(0．5mmol／L)导致心肌细胞凋亡；②采用热休克预处理(42℃，1h，恢复12h)诱导热休克蛋白表达；③采用Hoechst荧光染色，观察细胞凋亡发生并计算凋亡核百分率；④采用easpase活性定量检测及Western-blotting观察caspase-3，9的活化；采用免疫荧光及Western-blotting检测细胞成分分离后Smac从线粒体的释放。结果：①H2O2处理2h，Smac从心肌细胞线粒体释放入胞浆；处理4hcaspase-3，9活性升高，12h达高峰；处理24h心肌细胞明显出现凋亡，凋亡核百分率明显升高；②热休克预处理可诱导心肌细胞中HSP90。HSP70及αB-晶状体蛋白的表达增高；抑制Smac释放、caspase-3，9的活化及细胞凋亡的发生。结论：线粒体信号通路在H2O2所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用；热休克预处理通过抑制上述通路而减轻H2O2所致的细胞凋亡，其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断Smac从线粒体向胞浆释放、抑制caspase-3，9的活化有关。     

过氧化氢对K562细胞凋亡的影响

目的 :探讨活性氧对K5 6 2细胞凋亡的影响。方法 :用过氧化氢 (hydrogenperoxide ,H2 O2 )作用于对数生长期的K5 6 2细胞。结果 :Hoechst 332 5 8染色法观察到K5 6 2细胞明显凋亡 ;caspase活性定量测定及WesternBlotting检测显示caspase 3, 8, 9同时被激活。结论 :H2 O2 可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,且通过同时激活线粒体途径和死亡受体途径起作用。     

热休克预处理抑制过氧化氢所致心肌细胞Smac的释放及细胞凋亡

目的 :探讨热休克预处理 (heatshockpretreatment,HS)对过氧化氢 (hydrogenperoxide ,H2 O2 )所致心肌细胞凋亡及促凋亡分子线粒体释放的第二种Caspase激活物 (thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspases ,Smac)从线粒体释放的影响。方法 :①采用H2 O2 (0 .5mmol/L)导致心肌细胞凋亡 ;②采用热休克预处理 (4 2℃ ,1h ,恢复 12h)诱导热休克蛋白表达 ;③采用Hoechst荧光染色 ,观察细胞凋亡发生并计算凋亡核百分率 ;④采用cas pase活性定量检测及Western blotting观察caspase 3,9的活化 ;采用免疫荧光及Western blotting检测细胞成分分离后Smac从线粒体的释放。结果 :①H2 O2 处理 2h ,Smac从心肌细胞线粒体释放入胞浆 ;处理 4hcaspase 3,9活性升高 ,12h达高峰 ;处理 2 4h心肌细胞明显出现凋亡 ,凋亡核百分率明显升高 ;②热休克预处理可诱导心肌细胞中HSP90 ,HSP70及αB 晶状体蛋白的表达增高 ;抑制Smac释放、caspase 3,9的活化及细胞凋亡的发生。结论 :线粒体信号通路在H2 O2 所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用 ;热休克预处理通过抑制上述通路而减轻H2 O2 所致的细胞凋亡 ,其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断Smac从线粒体向胞浆释放、抑制caspase 3,9的活化有关。