烟曲霉shol基因对渗透压传导的作用和抗真菌药物敏感性的影响

目的:克隆烟曲霉shol基因,并构建烟曲霉shol基因突变株,了解该基因在烟曲霉应对环境变化中的作用.方法:通过基因同源性比对,在烟曲霉基因组中找出与酿酒酵母shol基因同源的基因,PCR扩增烟曲霉shol基因及其上、下游各约1.0 kb的DNA片段,并将其重组到质粒pDHt/SK2中,再利用pyrG作为筛选标记构建重组质粒.将重组质粒转化炯曲霉AF293.1得到烟曲霉△shol.观察烟曲霉△shol和烟曲霉AF293(野生株,wt)在MM、CM、BHI这3种培养基上的生长速度,测定烟曲霉△shol在含有氯化钠、丙三醇这两种渗透压物质培养基上的生长情况,并比较烟曲霉△shol和wt对常用抗真菌药物的敏感性.结果:烟曲霉△shol在CM、MM、BHI这3种培养基上的生长速度均慢于wt;△shol在含渗透压物质小于1 mol/L的培养基上菌落直径没有明显变化,在含渗透压物质大于1 mol/L的培养基上菌落直径明显变小;烟曲霉△shol和wt对抗真菌药物的敏感性没有差异.结论:shol基因影响炯曲霉的生长速度,与培养基类型没有明显关系.烟曲霉shol基因介导渗透压传导.shol基因对烟曲霉的抗真菌药物敏感性没有影响.     

BDNF的酵母双杂交诱饵载体的构建和初步鉴定

目的：构建和转化脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究BDNF的功能及作用机制奠定基础。方法：用PCR扩增BDNF基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段；将该基因片段与plexA载体定向重组；用酶切和测序鉴定重组质粒；将核苷酸序列正确的重组质粒转化人EGY48(p8op-LacZ)酵母菌株。结果：成功构建pLexA-BDNF重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的两种EGY48(p8Op—LacZ)酵母都能在SD／Gal／Raf／-His／-Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD／-His／-Leu／-Ura培养基中生长,在SD／-His／-Ura液中培养16h后,OD_(600)均值均为0.9±0.1。这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,电没有酵母毒性作用。结论：构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。     

外源性指导序列体外转换临床大肠杆菌氯霉素抗性表型的实验研究

目的 研究外源性指导序列(EGS)体外逆转临床分离大肠杆菌氯霉素抗性的能力。方法 构建针对氯霉素(Cm)乙酰转移酶(cat)并含卡那霉素(Km)抗性基因筛选指标的：EGS重组质粒以及只含Km抗性基因但不含EGS的对照质粒。采用CaCl2方法将重组质粒导入临床分离的耐Cm大肠杆菌株中。通过质粒抽提、菌落PCR鉴定EGS阳性克隆子,分光光度计A600检测导入EGS质粒后耐Cm菌株在液体培养基中的生长率以及KB法检测在固体培养基中的药物敏感试验,探讨EGS分子逆转耐药菌的逆转效应。结果 以pEGFP-CI-EGS cat1 cat2重组质粒对16株临床分离的Cma大肠杆菌供试菌进行转化试验,EGS转化子在含Km的培养基上筛选。其中4株转化菌在Cm100～200μg／ml的液体培养基中生长受抑;在Cm 100～200μg／ml的固体培养基中药敏试验对Cm敏感;转化菌质粒抽提检测出特异EGS条带;菌落PCR扩增鉴定存在EGS。表明16株供试菌中4株临床分离株获得了耐药菌型的表型转换、耐Cm的大肠杆菌临床分离株恢复了对Cm的敏感性。结论 EGS分子具有逆转临床耐药菌为敏感菌的能力。     

大蒜芦荟液消除R质粒的实验研究

目的：探讨大蒜芦荟混合液对大肠杆菌耐氯霉素（CM）R质粒和痢疾杆菌耐氯霉素（CM）R质粒消除作用。方法：将大蒜芦荟混合液作为R质粒消除剂,消除痢疾杆菌耐CM质粒和大肠杆菌耐CM质粒。结果：经大蒜芦荟液作用的大肠杆菌和痢疾杆菌在含CM中国蓝培养基和含CMSS培养基均不生长,但在不含CM中国蓝培养基和不含CMSS培养基都能生长。结论：大蒜芦荟混合液对大肠杆菌和痢疾杆菌的R质粒在体外均具有消除作用,说明大蒜芦荟液有预防肠道菌耐药性作用。     

烟曲霉角鲨烯环氧化酶基因的克隆

目的:克隆烟曲霉角鲨烯环氧化酶基因并探讨其与特比萘芬抗烟曲霉活性的关系.方法:利用聚乙二醇-甘油法将0.5μg烟曲霉基因组DNA文库转化pyrG-烟曲霉AF293.1原生质体;在含有特比萘芬的最低培养基上筛选耐特比萘芬的pyrG 转化子,然后对介导特比萘芬耐药的烟曲霉基因进行序列分析并进行基因克隆;最后将克隆的基因重新转化到烟曲霉中以确认其与特比萘芬敏感性之间的关系.结果:从5×104个转化子中得到一个耐特比萘芬的pyrG 转化子,该转化子表现出特比萘芬特异性耐药性且与质粒高度相关;序列分析发现,是烟曲霉角鲨烯环氧化酶基因介导了特异性特比萘芬耐药;将该基因克隆后重新转化到烟曲霉中,结果敏感的烟曲霉再次获得特异性特比萘芬耐药性.结论:首次获得烟曲霉角鲨烯环氧化酶基因,并发现额外拷贝的该基因可以导致特异性特比萘芬耐药这一新型机制.     

pTAT-XIAP融合蛋白表达载体的构建

目的 探索pTAT-XIAP融合蛋白表达载体的构建.方法 在体外合成大鼠XIAP基因,将其插入pTAT-HA质粒,构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体,将pTAT-XIAP质粒转化至DH5α.堵养筛选成功转化子,提取纯化质粒,电泳鉴定.结果 pTAT-XIAP质粒在含氨苄青霉素的LB固体培养基上呈分散菌落生长,在无氨苄青霉素的LB固体培养基上成片生长,未经质粒转化的DH5α感受态细胞在含氨苄青霉素的LB固体培养基上未见菌落生长.电泳结果 显示pTAT-XIAP质粒约4500bp,pTAT-HA质粒约3000 bp,条带大小与质粒图谱一致.结论 将大鼠XIAP基因插入PTAT-HA质粒,成功构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体.     

柠檬醛对烟曲霉色素及关键基因alb1 mRNA表达的影响

目的研究柠檬醛对烟曲霉色素及其关键基因alb1 mRNA表达的影响。方法观察烟曲霉在含不同浓度柠檬醛的蔡氏固体培养基中的生长情况;RT-PCR检测药物作用后alb1基因mRNA表达的变化。结果在蔡氏固体培养基上随着柠檬醛浓度的增加,菌苔逐渐变稀、薄且烟绿色色素逐渐变淡,甚至白化;柠檬醛对alb1基因表达有明显的抑制作用,随着药物浓度的降低这种抑制作用亦相应呈现不同程度的减弱。结论烟曲霉缺失烟绿色色素可能与alb1 mRNA的表达抑制有关。     

根癌农杆菌介导的尿嘧啶缺陷烟曲霉转化是基因敲除的有效方法

目的:探讨用嘧啶营养缺陷作为筛选标记、根癌农杆菌介导的转化方法敲除烟曲霉基因.方法:以pyrG作为筛选标记,在双元载体pDHt/sk上分别构建烟曲霉FAPI,和SHOI基因的打靶序列.构建好的质粒分别转化入根癌农杆菌.24℃条件下,含打靶质粒的根癌农杆菌与烟曲霉在不含尿嘧啶和尿苷的诱导培养基上共培养48h;然后将培养物转移到37℃,筛选转化子.结果:根癌农杆菌介导的烟曲霉转化同源重组率较高,FAPI基因为44%(7/16)、SHOI基因为35%(7/20).结论:以pyrG作为筛选标记、根癌农杆菌介导的转化方法能高效敲除烟曲霉基因,为烟曲霉基因功能研究提供了有效方法.     

毒性蛋白表达及其工程菌选用的实验研究

目的 了解人B淋巴细胞表面标志物cDl9与6XHis／pRSET细菌表达栽体重组的基因在不同BL21工程菌中转染的情况，及转染后在固体筛选培养基上菌落的生长情况。筛选其合适转染、表达的工程菌，为高表达和纯化CDl9基因表达产物创造条件。方法 将CDl9基因的850bp片段和全长基因1 600bp分别在EcoRI位点与pRSET原核表达质粒重组后，转染BL21Star(DE3)与BL21Sar(DE3)pLysS工程菌，在LB抗生素筛选培养基上观察菌落生长情况[1,2]。结果实验发现CDl9的850bp基因片段在BL21工程菌中表现毒性较大，在转染于BL21Star(DE3)工程菌后，基本无菌落生长；而BL21Star(DE3)pLysS工程菌对CDl9／pRSET重组基因表达的6XHis-CDl9融合蛋白有较强的抗毒性，菌落生长旺盛且密度大。结论 BL21Star(DE3)pLysS工程菌比较适合用于毒性蛋白表达。     

白念珠菌钙调蛋白定点突变重组菌株的构建和鉴定

目的：构建白念珠菌钙调蛋白（Cmd1）定点突变重组菌株,为进一步探讨钙调蛋白基因突变对真菌生长周期及致病性的影响奠定基础。方法：将含白念珠菌钙调蛋白基因（CMD1）定点突变的重组质粒转染CMD1缺陷HIS3^ 重组单倍体菌株,用His/Trp省却培养基和His/Trp/Ura省却培养基联合选择培养筛选到Cmd1定点突变酵母菌株。结果：经选择培养筛选得到能在His/Trp省却培养基上生长而不能在His/Trp/Ura省却培养基生长的菌株4株。结论：成功构建了4株Cmd1定点突变重组菌染,为进一步探讨Cmd1定点突变对白念珠菌生物学特性及致病性的影响奠定基础。     

妇科消炎片对大鼠输卵管炎性阻塞影响的实验研究

目的 探讨妇科消炎片治疗输卵管炎性阻塞的作用机理。方法 将15％苯酚糊剂注入大鼠输卵管内，建立输卵管炎性阻塞模型，观察妇科消炎片对输卵管炎性阻塞大鼠组织学和血液流变学的影响，并以妇炎康作对照。结果 治疗30d后，治疗组输卵管通畅率、积液率、炎症程度及血液流变学与模型组比较有非常显著性差异(P＜0．01)，其疗效与妇炎康相当。结论 妇科消炎片能改善微循环，抑制炎症，减少炎症渗出，促进受损组织修复，从而达到治疗输卵管炎性阻塞，改善恢复其生理功能的目的。     

升阳十一味丸对bax表达的相关研究

目的:探讨升阳十一味丸治疗肿瘤的分子机制。方法:用升阳十一味丸治疗肿瘤鼠,以免疫组化方法测定bax的表达情况。结果:与阴性对照组相比,治疗组bax表达上调,有显著性差异(P<0.05)。结论:该药有抑制肿瘤的作用。     

印堂穴和前额贴敷法治疗失眠症的疗效观察

目的应用睡眠贴对慢性失眠者进行印堂穴和前额持续贴敷治疗并观察其效果。方法按照随机和自愿原则,选择350例长期失眠的病人作为治疗组,在没有应用镇静催眠药或停用镇静催眠药3天的前提下,每晚应用睡眠贴对印堂穴和前额进行贴敷治疗20天,按照优、良、中、差四个等级对病人的睡眠效果和伴随症状的缓解情况进行评价,并统计起效的天次和不良反应。结果治疗组的治疗效果明显优于对照组（P〈0.05）,显效时间以第7天为多（Mode=7）,治疗组失眠的伴随症状明显改善（P〈0.05）,且无明显副作用。结论应用睡眠贴对印堂穴和前额持续贴敷是治疗失眠症的一种有效并安全的方法。     

情绪对决策影响的研究

情绪对决策行为产生深刻的影响,目前已经成为认知神经科学与心理生理学的热点研究领域。本文就情绪对决策的影响、情绪对决策影响的研究范式来进行阐述,文章最后展望了情绪对决策影响的发展前景。     

胰腺MR检查序列应用探讨

目的 分析97例胰腺MRI检查中不同序列图像,探讨胰腺MR扫描序列优化方案.方法 胰腺检查患者97例,其中,正常36例、囊肿2例、胰腺炎42例、胰腺肿瘤17例.平扫序列横轴位T2WIFSE、T2WI FS-FSE、T1WI SPGR In phase和Out of phase,TjWI FS-SPGR;冠状位FIESTA,T1WISPGR,动态增强检查序列为LAVA.重点分析胰腺疾病征象在各序列中的显示情况.结果 胰腺病变总显示率96.7％,其信号改变以T1WI FS-SPGR显示最优(91.8％);胰周、肾前筋膜改变T2WIFS-FSE序列显示率分别为70.5％、62.3％,二者均具有显著性优势P＜0.05;FIESTA对胰管及胰周改变显示率与T2WI FS-FSE相比没有显著性优势P＞0.05;MRCP胰管显示率100％,LAVA对各项观察指标显示率并不优于所有平扫序列,对肿瘤病变显示率为94.1％,高于胰腺炎显示率52.4％,但没有统计学意义(P＞0.05).结论 T1WI FS-SPGR序列,可作为胰腺MR平扫的基本序列,T2WI首选T2WI FS-FSE序列,二者结合能很好显示胰腺及周围病变,配合冠状位T1WI SPGR和3D MRCP,显示胰周脂肪结构及胰管情况,部分病变能初步定性,如怀疑胰腺肿瘤,LAVA序列必不可少,可确定病变范围及周围血管、腹膜后受累情况.     

Noxa的促凋亡作用与肿瘤关系的研究进展

Noxa是Bcl-2家族中促凋亡的BH3-only亚家族成员之一,是p53的下游靶基因,其表达主要受p53调控。它定位于线粒体,其BH-3结构域主要与Mcl-1结合,启动caspase级联反应,诱导细胞凋亡。Noxa可以通过p53依赖途径及p53非依赖途径促进细胞凋亡,在肿瘤的形成和治疗中发挥着重要作用。     

怒志对高血压的影响探析

人的情志活动与脏腑气血津液有着密切的联系,气血津液是构成人体和维持生命活动必不可少的物质。怒志会引起人体脏腑气血阴阳的失调,从而诱发高血压等疾病。现代心理生理学研究发现怒志的变化能够引起血压的改变,表明怒志与高血压有密切联系。因此,怒志的调节对高血压的治疗和预防具有重要意义。     

壳聚糖固定L-天门冬酰胺酶的研究

研究了以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，固定化Ｌ－天门冬酰胺酶的最适条件，并对固定化天门冬酰胺酶的理化性质进行了初步探讨。分别从不同固定化程序、缓冲液及保护剂等方面进行了固定化天门冬酰胺酶的条件优化；固定化酶的活力回收可达２０％左右。固定化酶的最适范围变宽，由游离酶的最适ｐＨ＝４～６变为ｐＨ＝６～１０。连续使用６次后仍可基本维持固定化酶的活力。固定化酶对胃蛋白酶的水解性也较游离酶大大提高。     

完全胃肠外营养治疗的护理

目的：探索完全胃肠外营养治疗的护理。方法：通过复习献,综述国内外部份护理工作对完全胃肠外营养治疗的护理经验。结果：完全胃肠外营养治疗不当可给患带来不必要的损害,甚至危及患生命,产生原因主要来自操作技术及护不当。结论：为使TPN支持顺利进行,减少或避免并发症的发生,要求熟练掌握配制技术,做好导管护理,在输液过程中观察病人的反应,监测有关指标,掌握滴注速度等。     

针灸治疗抑郁症机理的研究

通过整理、分析、归纳近几年有关针灸治疗抑郁症机理方面的文献,提示针灸治疗抑郁症机理包括影响行为学、调节神经内分泌、保护受损的海马神经、通过调节细胞因子含量增强免疫功能、调整中枢神经递质的含量及增加受体结合位点等方面。然亦发现针灸治疗抑郁症的机理还存在许多不足,是亟待深入探索的问题。