XIAP在鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2和5-8F中的表达与研究

目的比较CNE1、CNE2及5-8F鼻咽癌细胞株中X链锁调亡抑制蛋白(XIAP)的表达差异。方法体外培养鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2及5-8F,采用RT-PCR法检测CNE1、CNE2及5-8F细胞株中XIAP基因表达情况。结果 XIAP基因在CNE1低表达,而在CNE2和5-8F高表达。结论 XIAP与NPC的恶性程度和转移潜能有关。     

XIAP基因调节机制研究进展

凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein．IAP）是一类在结构上具有同源性的细胞内源性凋亡抑制蛋白家族，目前为止在人类已经发现的IAPs至少有8种。它们能够对抗各种凋亡诱导因素，抵抗细胞凋亡。X-连锁调亡抑制蛋白（X—linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）是IAP家族的重要成员，定位于Xq24—25，编码区由7个外显子组成，cDNA全长2540bp，mRNA全长为9kb，但实际编码区仅有1．5kb，XIAP含497个氨基酸，分子量为57kD。     

外源性IL-18基因转染联合顺铂对胶质瘤C6细胞凋亡的诱导作用

目的研究外源性IL-18基因联合顺铂对胶质瘤C6细胞的凋亡诱导作用,为胶质瘤治疗提供新的途径。方法将IL-18基因及pLXSN病毒载体导入胶质瘤C6细胞,建立C6/IL-18及C6/pLXSN细胞;C6/IL-18、C6/pLX-SN及胶质瘤C6细胞均以RPMI1640培养基培养,经0.3、3、30、60、120μg/ml顺铂作用48h后,用酶标仪在490nm波长处测吸光度值,计算细胞抑制率;以顺铂的10倍血浆峰浓度作用（3μg/ml）细胞24h后,采用吖啶橙/溴乙啶（A//EB）双荧光染色法检测细胞凋亡率。结果 C6/IL-18细胞、C6/pLXSN细胞及亲代C6细胞经120、60、30、3、0.3μg/ml顺铂作用后的抑制率依次降低,C6/IL-18细胞抑制率明显高于C6/pLXSN和C6细胞（P均〈0.05）。以30μg/ml顺铂作用后C6/IL-18细胞的凋亡率明显高于C6/pLXSN和C6细胞（P均〈0.05）。结论外源性IL-18基因联合顺铂可明显增加对胶质瘤C6细胞的抑制作用,其相关机制有待进一步探讨。     

pTAT-HA质粒载体在受体菌DH5α中的转化及鉴定

目的探索pTAT-HA质粒在受体菌DH5α中转化的方法。方法配制LB培养基,将pTAT-HA质粒转化至DH5α,培养筛选成功转化子,电泳鉴定。结果pTAT-HA质粒转化菌可在Amp＋LB培养基中生长,电泳结果显示质粒大小准确无误（约3000bp）。结论pTAT-HA质粒转化成功,转化菌可冷冻保存质粒,提取的质粒可用于下游分子生物学实验。     

pTAT-XIAP融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建pTAT-XIAP原核表达载体,以获得pTAT-XIAP融合蛋白;为其用于神经系统疾病的治疗奠定基础。方法体外合成大鼠XIAP基因,将其插入pTAT-HA质粒,构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体,转入大肠杆菌表达菌株BL21plysS进行诱导表达。SDS-PAGE及Western blot法鉴定融合蛋白。结果表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析后,于64 kD处有一明显表达条带,与理论结果相符。结论成功构建了pTAT-XIAP原核表达载体并成功表达出目的融合蛋白,该载体成功表达pTAT-XIAP融合蛋白,有望用于临床神经系统疾病的治疗。     

TAT-XIAP融合蛋白对学习记忆障碍大鼠的影响及其机制

目的 探讨TAT-XIAP融合蛋白对学习记忆障碍大鼠的影响及其与大脑海马神经元凋亡的关系,为学习记忆的深入研究提供实验依据.方法 利用基因工程技术制备具有生物学活性的TAT-XIAP融合蛋白,通过D-半乳糖(D-Gal)腹腔注射和Aβ1-42海马注射建立学习记忆障碍大鼠模型,将大鼠随机分为TAT-XIAP组(左侧脑室注射TAT-XIAP融合蛋白,每天80 mg/kg,共3d)和模型组(侧脑室注射等体积PBS)各30只,采用水迷宫评价大鼠的学习记忆能力,TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡.结果 1TAT-XIAP组大鼠在各象限入水至爬上平台的时间均明显缩短,平均值为(48.31±9.44)s,明显低于模型组的(87.80±10.32)s(P＜0.05);TAT-XIAP组大鼠穿越平台的次数、在原平台象限游程百分比、在原平台象限时间百分比均明显增加,分别为(4.78±0.93)次、(47.39±5.84)％、(48.43±5.75)％,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).2 TAT-XIAP组大鼠海马凋亡神经元明显减少,凋亡神经元计数为(16.37±3.15)个/mm2,模型组为(54.66±7.20)个/mm2,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TAT-XIAP融合蛋白可明显改善学习记忆障碍大鼠学习记忆功能,其机制可能与大鼠海马神经元凋亡减少有关.     

X-连锁凋亡抑制蛋白与肿瘤关系的研究进展

凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein．IAP）是一类在结构上具有同源性的细胞内源性凋亡抑制蛋白家族,它们能够对抗各种凋亡诱导因素,抵抗细胞凋亡。X-连锁凋亡抑制蛋白（X—linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）是IAP家族中最有效的caspase抑制物,近年来发现XIAP在肿瘤中高表达,与肿瘤的分化程度及预后有关。已成为肿瘤基因治疗的新靶点和研究热点。本文就XIAP与肿瘤关系的研究进展作一综述。     

pTAT—HA质粒转化菌保存效果的实验研究

目的探讨保存pTAT—HA质粒转化菌简单有效的方法。方法配制LB细菌培养基,将pTAT—HA质粒转化至DH50α感受态细胞,筛选成功转化子并扩增培养,将转化菌接种在不同浓度甘油菌液和新鲜牛奶中,-70℃保存6个月和1年后分别复苏,计算存活率,分析保存效果。结果保存6个月以30％甘油、40％甘油和新鲜牛奶保存效果较好,保存1年仅见30％甘油、40％甘油和新鲜牛奶冻存管有存活菌。结论pTAT-HA质粒转化菌宜使用30％-40％甘油菌液或新鲜牛奶保存。     

VEGF抗体靶向血管治疗增生性瘢痕的研究

目的探讨VEGF抗体靶向血管治疗对烧伤后增生性瘢痕的治疗作用.方法将人的增生性瘢痕植入裸鼠肩胛部皮下,建立裸鼠增生性瘢痕移植模型.3周后,用不同剂量血管内皮生长因子单克隆抗体进行瘢痕内注射治疗.治疗3周后解剖取材,通过测量瘢痕的大小观察瘢痕的体积变化,用Masson 染色和免疫组化技术观察移植瘢痕胶原和微血管数量的变化.结果与PBS对照组相比,靶向血管治疗3周后, 增生性瘢痕的体积明显减小, 瘢痕胶原和微血管明显减少.结论 VEGF抗体靶向血管治疗具有抑制增生性瘢痕微血管生成、胶原合成及抑制瘢痕生长的作用.