TRAIL及其受体与隐球菌性脑膜炎的关联性研究

目的研究建立实时荧光定量（RFQ）-PCR法测定TRAIL及其受体DeR1、DcR2、DR4、DR5 mRNA含量的方法，探讨其在隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中表达的检测价值，并分析隐球菌性脑膜炎患者细胞因子与TRAIL及其受体的相关性。方法设计特异性的引物和探针，以人基因GAPDH为内参照，用实时定量PCR的方法检测35例健康人和35例隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中TRAIL及其受体mRNA的表达水平，采用ELISA方法检测血清IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ浓度。结果与健康人比较，隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中TRAIL mRNA的表达明显下降（P〈0．01）；受体DeR1 mRNA的表达显著升高（P〈0．01），受体DeR2、DR4、DR5 mRNA的变化无统计学意义。隐脑患者血清中IL-10显著升高（P〈0．01），与TRAIL的变化成负相关；IFN-γ显著下降（P〈0．01），与TRAIL的变化成正相关。结论隐球菌性脑膜炎患者TRAIL下降及其受体DeR1mRNA的表达明显升高，提示TRAIL及其受体DeR1可能参与隐球菌性脑膜炎的疾病进程，这为有效治疗隐球菌性脑膜炎提供了新的线索。     

人外周血淋巴细胞和粒细胞褪黑素受体亚型mt1 的检测

目的 检测人外周血淋巴细胞和粒细胞的褪黑素受体(MR)亚型mt1和其细胞内定位。方法 分离出健康成年人外周血淋巴细胞和粒细胞，应用RT-PCR技术分别检测其亚型mt1的mRNA，阳性产物用自动测序仪测序；同时将所分离的淋巴细胞和粒细胞制成细胞涂片，应用免疫组化染色检测mt1在淋巴细胞和粒细胞上的分布。结果 RT-PCR产物电泳显示：人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1阳性条带，片段长度约370bp，测序结果显示扩增产物与GenBank的人mt1受体亚型的基因序列相吻合；免疫组化结果显示：人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1受体蛋白，分布于细胞膜、细胞浆和细胞核，以细胞膜和细胞浆为主。结论 人外周血淋巴细胞和粒细胞中均存在MR的亚型mt1,外周血淋巴细胞和粒细胞为褪黑素作用的外周靶器官，提示褪黑素在生理及病理情况下可能对免疫系统有调节作用。     

CpG岛甲基化表型肺癌的分型标记及临床病理特征

目的 比较新的CpG岛甲基化表型(CIMP)筛选标记基因和经典CIMP筛选标记基因在CIMP肺癌筛选中的作用,并分析CIMP肺癌的临床病理特征.方法 取第二军医大学长海医院呼吸科50例肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织,提取DNA,进行甲基化转换后,利用甲基化特异性PCR (MSP)对新的CIMP筛选标记基因(SHISA3、CTSL1、C1ORF103和TMEM200B)和经典的CIMP筛选标记基因(CACNA1G、IGF2、NEUROG1、RUNX3)的启动子CpG岛区域进行扩增,采用琼脂糖凝胶电泳分析其甲基化状态.运用SPSS统计软件对结果进行统计分析.结果 肺癌组织发生明显的甲基化,所研究的8个基因甲基化水平均明显高于癌旁组织(P=0.014).其中RUNX3甲基化与淋巴结转移及功能状态(PS)评分有关(P值分别为0.017、0.018).年龄＞60岁的肺癌患者甲基化率高于≤60岁者(P=0.031).吸烟对CTSL1基因甲基化的影响也很大(P=0.018).结论 CpG岛甲基化表型肺癌具有独特的临床病理特征;新的和经典的甲基化基因组合在CIMP肺癌筛选上都具有较高的灵敏度和特异性.     

细胞因子信号转导抑制因子（SOCS）与免疫调节

细胞因子信号转导抑制因子（suppressor of cytokine signaling,SOCS）是一类可由多种细胞因子诱导产生,又能通过多种途径对细胞因子的信号转导进行负向调节的蛋白质分子。众多研究发现SOCS蛋白家族是一个非常重要的可以负向调节 JAK／STAT信号通路的分子家族。本文将着重阐述介绍SOCS家族在炎症和自身免疫性疾病中的作用。     

提高门诊检验服务质量的做法

门诊是医院的重要组成部分,是面向社会的窗口。门诊检验科人流量大,医务人员工作繁忙。更好地为门诊患者服务是一个值得关注的问题。本文通过对硬件、人员及与患者的沟通等因素进行分析,探讨影响门诊检验科服务质量的原因,就门诊工作流程的改进谈体会。     

热灭活白念珠菌刺激PBMC对颗粒溶素和TNF-α表达的影响

目的:研究热灭活白念珠菌刺激健康个体外周血单个核细胞对颗粒溶素和TNF-α表达的影响。方法:在热灭活白念珠菌刺激的情况下,采用ELISA和RT-PCR检测颗粒溶素的表达;采用SrCl2以及siRNA下调PBMC内颗粒溶素的表达,或者加入外源性颗粒溶素,观察TNF-α在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果:热灭活白念珠菌刺激可以诱导PBMC合成颗粒溶素和TNF-α,采用SrCl2或siRNA下调颗粒溶素的表达均会引起TNF-α在mRNA和蛋白水平表达的下调,而加入外源性的颗粒溶素可以促进TNF-α的表达。结论:热灭活白念珠菌刺激PBMC可以引起颗粒溶素和TNF-α的表达,且颗粒溶素可能是促进TNF-α表达的因素。     

热灭活白念珠菌通过Dectin-1诱导外周血单个核细胞表达IL-12和IFN-γ

为研究Dectin-1在热灭活白念珠菌刺激外周血单个核细胞(PBMC)免疫应答中的作用。我们用不同浓度昆布多糖(Dectin-1封闭剂)与PBMC共培养1 h后,再用热灭活白念珠菌刺激PBMC 4 d;同时用不同剂量的Dectin-1激活剂酵母聚糖(zymosan)刺激PBMC 4 d,收集培养液上清,经ELISA检测IL-12和IFN-γ水平。结果发现,昆布多糖可以部分抑制热灭活白念珠菌刺激PBMC合成IL-12和IFN-γ的能力,酵母聚糖可以诱导PBMC合成IL-12和IFN-γ。因此,Dectin-1是介导热灭活白念珠菌诱导PBMC产生IL-12和IFN-γ的受体之一。     

自身免疫性胰腺炎患者血清外泌体中CD69表达升高及意义

目的探究自身免疫性胰腺炎(AIP)患者血清外泌体中CD69的表达情况,初步探讨其对疾病病理过程的影响。方法收集2012年10月~2016年12月来长海医院就诊的35例AIP患者血清和同期就诊的35例健康个体血清,分别作为实验组和对照组。以ELISA法检测血清中的细胞因子浓度,以磁珠结合抗体的方法在流式细胞仪中检测血清中外泌体表面分子的表达情况,两组之间计量资料的比较采取两独立样本t检验,两变量之间的相关性以Pearson系数表示。结果流式细胞仪分析显示,实验组血清中外泌体CD69表达水平高于对照组(85.76±19.45vs 17.01±5.89)%,差异有统计学意义(t=20.01,P0.0001);实验组中CD69+的外泌体所占百分比与血清中IL-4,IFN-γ,TGF-β表达量呈正比(r=0.456,0.678,0.548,均P0.05),CD69-的外泌体所占百分比与血清中IL-4,IFN-γ,IL-10,TGF-β呈反比(r=-0.589,-0.399,-0.784,-0.657,均P0.05)。结论 CD69在外泌体的表达可能通过影响CD4+T细胞功能参与了AIP病程,是该病潜在的监测指标和治疗靶点。     

隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞中microRNA-31表达及相关免疫分子水平研究

目的 探讨隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞中micorRNA-31表达情况及与疾病的相关性.方法 收集2007年9月-2012年8月期间,在上海长海医院和上海长征医院确诊的隐球菌脑膜炎患者和同期健康对照各30例,使用密度梯度离心法,分离30例隐球菌脑膜炎患者和30例健康对照外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,采用实时荧光定量PCR检测microRNA-31（miR-31）的表达,并分析其与患者临床特征（血清中IgG,IgA,IgM）和细胞因子（IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-α）的相关性.结果 与健康对照相比,隐球菌脑膜炎患者PBMCs中miR-31表达（0.856±0.231 vs 0.470±0.242）增高,差异有统计学意义（t=6.320,P＜0.001）且与血清IL-4水平正相关（r=0.644,P＜0.001）,与IgG,IFN-γ负相关（r=0.645, 0.671;P值均＜0.001）.结论 提示miR-31可能通过调节炎症性细胞因子的产生,参与了隐球菌脑膜炎的发病机制,这为进一步研究隐球菌脑膜炎患者的表观遗传学调控提供了新的线索.     

TRAIL在原发免疫性血小板减少症患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的：探讨原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia,ITP）中TRAIL的表达及其在发病机制中的作用。方法使用Ficoll密度梯度离心法,收集28例ITP患者和30例健康对照的外周血单个核细胞（PBMC）。采用实时荧光定量PCR检测TRAIL基因的表达,采用 ELISA方法检测血清中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-4和 IL-10的量,并分析TRAIL与患者TNF-α,INF-γ,IL-10和血小板计数的相关性。结果与健康对照组相比,ITP患者 PBMC中 TRAIL表达显著增高（2.80±0.43 vs 1.00±0.24,t＝19.72,P＜0.001）。与健康对照组相比,ITP患者血清中IFN-γ和TNF-α升高（52.43±11.04 pg/ml vs 23.26±8.15 pg/ml;69.14±10.89 pg/ml vs 36.14±13.17 pg/ml,t＝10.36～11.50,P值均＜0.001）,IL-10降低（11.18±6.13 pg/ml vs 33.28±9.85 pg/ml,t＝10.17,P＜0.001）,IL-4的变化差异无统计学意义（35.75±12.52 pg/ml vs 40.16±14.26 pg/ml,t＝1.25,P＞0.05）。且ITP患者TRAIL的表达与血清中IFN-γ,TNF-α正相关（r＝0.432,0.541,P 值均＜0.05）,与 IL-10,血小板计数负相关（r＝-0.424,-0.553,P 值均＜0.05）。结论TRAIL可能通过介导细胞因子免疫紊乱,参与了 ITP的发生与发展,这为进一步研究 ITP的免疫干预治疗提供了新的线索和思路。