比格犬雌激素β受体RNA干扰实验细胞及PCR检测引物的筛选

目的筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物。方法根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物,用阳性质粒筛选最佳引物应用于RNA干扰效果检测,并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性。对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测。结果经过三次重复性实验之后,结果显示引物C36684扩增效率高,且没有非特异条带,该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带,但293T细胞中存在人的ERβ基因。结论引物C36684用于检测RNA干扰效率,而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具。     

比格犬ERβ_(1293)基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位

目的观察比格犬Myc标签ERβ1293重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法以pEGFP-N1-ERβ1293重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ1293基因编码区全长。Myc标签ERβ1293重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术(Western blotting)和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence,IF)鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ1293在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ1293重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中。Western blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质。结论前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ1293编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。     

比格犬ERβ1293 基因真核载体构建及在293T细胞中的表达及定位

【摘要】目的：观察比格犬Myc 标签ERβ1293重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法：以pEGFP-N1-ERβ1293重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ1293基因编码区全长。Myc标签ERβ1293重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术（Western Blotting）和间接免疫荧光技术（Indirect immunofluorescence,IF）鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ1293在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果：成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ1293重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中。Western Blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质。结论：前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ1293编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。     

比格犬雌激素受体β的原核表达、纯化及鉴定

目的 研究比格犬雌激素受体β(Estrogen receptor β,ERβ)及其剪接异构体在生殖调控中的功能,构建比格犬ERβ的pMAL-p5x/ERβ 480 DE3 E.coli重组菌株,并进行纯化和鉴定.方法 Trizol法提取发情期比格犬下丘脑总RNA,RT-PCR获得cDNA,以NCBI网站公布的比格犬ERβ基因CDS序列设计特异性引物,扩增ERβ保守区基因编码序列(16-496 bp),连接原核表达载体pMAL-p5x,筛选、鉴定阳性克隆并测序.将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α,再转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物经经麦芽糖亲和树脂(Amylom Resin)亲和层析分离纯化,并对纯化的融合蛋白进行鉴定.结果 构建了pMAL-p5x/ER(a)480重组质粒,在DE3大肠杆菌中诱导表达出MBP-ERβ融合蛋白,SDS-PAGE显示分子量约为60 000,与预期结果一致;优化了MBP-ERβ表达体系的表达条件:分别在0.2％葡萄糖,100 μg/ml Ampcillin,0.1mmol/L IPTG 37℃培养5h或在0.2％葡萄糖,50 μg/ml Ampcillin,0.2mmol/L IPTG 37℃培养3h,融合蛋白表达效果比较好.结论 构建了pMAL-p5x/ERβ480原核表达重组质粒,获得了比格犬MBP-ERβ融合蛋白,为犬种属特异性ERβ多克隆抗体的制备及功能分析奠定了基础.     

荧光定量RCR检测比格犬雌激素β受体mRNA在间情期与发情期表达量的差异

目的对比格犬发情期与间情期ERβ基因在性腺组织器官的变化状况进行荧光定量,明确ERβ基因在发情期与间情期下丘脑-垂体-性腺轴上的表达量差异情况,为深入研究比格犬发情机制提供基础。方法作为调控生殖的关键基因,ERβ基因位于比格犬下丘脑-垂体-性腺轴上,因此分别取处于发情期和间情期的比格犬,提取下丘脑、垂体、卵巢和子宫的RNA,反转录后对ERβ基因mRNA的表达量进行荧光定量PCR检测。结果间情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA的表达量分别是发情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA表达量的0.35倍、0.17倍、0.44倍、0.43倍。结论 ERβ基因在处于发情期的比格犬下丘脑-垂体-性腺轴内表达量均上调。     

比格犬卵巢子宫内雌激素受体ERα、ERβ的免疫组织化学定位研究

目的 研究雌激素受体α, β在比格犬卵巢及子宫内的定位。 方法 采用免疫组化SP法DAB显色结合BCIP/NBT及AEC显色检测ERα、ERβ在比格犬子宫及卵巢内的表达。 结果 比格犬ERα主要表达于卵泡颗粒细胞、卵巢间质腺腺上皮细胞及子宫内膜腺体腺上皮细胞胞核内,胞质内仅有少量表达，而在卵泡膜内膜的间质细胞，腺体周围的基质细胞及小动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞、小静脉内皮细胞的胞核内有少量表达。而ERβ则以相同的组织特异性主要表达于上述组织细胞的胞质内,在胞核内有微弱表达。ERα 表达于膜黄体细胞的胞核内，而在黄体颗粒细胞胞核与胞质内均有表达。而ERβ则仍特异表达于不同生理阶段黄体细胞的胞质内。BCIP/NBT与AEC双染未见ERα、ERβ在子宫内有明显的共表达现象。结论 比格犬ERα、ERβ 在子宫与卵巢组织内定位不同，ERα主要定位于胞核，在胞质内有微弱表达，而ERβ主要定位于胞质，在胞核内有零星表达。     

比格犬雌激素β受体RNA干扰实验细胞及PCR检测引物的筛选

目的 筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物。方法 根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物,用阳性质粒筛选最佳引物应用于RNA干扰效果检测,并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性。对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测。结果 经过三次重复性实验之后,结果显示引物C36684扩增效率高,且没有非特异条带,该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带,但293T细胞中存在人的ERβ基因。结论 引物C36684用于检测RNA干扰效率,而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具。     

比格犬ERβ1293 基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位

目的 观察比格犬Myc 标签ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法 以pEGFP-N1-ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ₁₂₉₃基因编码区全长。Myc标签ERβ₁₂₉₃重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术（Western blotting）和间接免疫荧光技术（indirect immunofluorescence, IF）鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ₁₂₉₃在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果 成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中。Western blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质。结论 前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ₁₂₉₃编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。     

比格犬雌激素受体β四个剪接异构体的发现

目的在比格犬下丘脑-垂体-性腺轴上筛查雌激素受体13的剪接异构体。方法针对ERβmRNACDS序列的八个外显子,两两外显子依次组合设计引物,运用PCR法,以比格犬下丘脑、垂体、卵巢、子宫组织cDNA为模板扩增相应序列,测序后在NCBI网站比对,确定是目的基因后,用DNAMAN软件比对分析及手工校对,获得ERβ的剪接异构体。结果获得到了比格犬ERβ的四个剪接异构体,分别是第4外显子完整缺失的ERβ剪接异构体（缺失300bp）,部分第4与部分第5外显子组合缺失的两个组合型缺失的ERβ剪接异构体（各缺失334bp,265bp）,以及第七外显子完整缺失的ERβ剪接异构体（缺失181bp）。第4外显子完整缺失的剪接异构体和第7外显子完整缺失的剪接异构体获得了全长编码序列,另两个剪接异构体为部分编码序列。结论研究获得了比格犬ERβ的四个剪接异构体,为后续研究其在比格犬生殖调控中的作用机制打下了基础。     

Noggin基因沉默表达载体的构建及效果评价

目的构建慢病毒介导的Noggin RNAi干扰序列，并分析这些干扰序列对Noggin基因的沉默效果。方法针对目的基因Noggin的mRNA设计四条干扰序列，并将这些序列连接到Lenti-KD慢病毒载体，将重组质粒瞬时转染HEK-293T包装细胞，获得重组慢病毒。将重组病毒感染MC3T3-E1细胞，利用Puromycin进行筛选，获得稳定表达细胞系。通过实时荧光定量PCR和Western Blot技术分析不同干扰序列的干扰效果。结果实时荧光定量PCR结果显示，四种干扰序列对Noggin基因的表达都有一定的沉默效果，但只有shNoggin-1（P<0.01）对其表达影响显著。Western Blot结果显示，四种干扰序列中只有shNoggin-1（P<0.01）对Noggin的表达蛋白具有显著的降低作用。结论 获得了一种Noggin基因的干扰序列，该序列能够干扰Noggin基因mRNA的稳定性，从而影响蛋白的表达。该干扰序列可以用于部分敲除Noggin基因，从而用于研究Noggin基因的功能。     

Jmjd3基因慢病毒干扰载体的构建及其去H3K27三甲基化作用研究

目的 构建针对小鼠Jmjd3基因的RNAi慢病毒载体,感染小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,mBM-MSCs)后观察其对Jmjd3基因表达的影响及对组蛋白H3K27me3的去甲基化作用.方法 根据Jmjd3mRNA序列设计并合成3对shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入PLL3.7慢病毒干扰载体,双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,重组质粒与其他3种辅助包装质粒(pRsv-REV,pMDlg-pRRE,pMD2G)共转染293T细胞生产病毒液,病毒液感染mBM-MSCs,荧光定量PCR和Western blot检测目的基因Jmjd3的表达,筛选出最有效的干扰序列.Western blot检测组蛋白H3 K27 me3的表达量,分析Jmjd3的生物学功能.结果 双酶切和测序结果证实Jmjd3基因shRNA序列正确插入慢病毒载体.荧光定量PCR和Western blot结果显示,感染后Jmjd3表达显著下调,与空载体对照组相比,Jmjd3-shRNA1组、Jmjd3-shRNA2组和Jmjd3-shRNA3组分别下调88.9％ (P ＜0.001)、67.9％ (P ＜0.001)和72.4％ (P ＜0.001),Jmjd3-shRNA1组为最佳干扰组.Western blot结果显示干扰Jmjd3之后,H3K27me3的表达较空载体对照组升高.结论 成功构建了针对小鼠Jmjd3基因的慢病毒干扰载体,并能有效抑制mBM-MSCs中Jmjd3基因的表达,Jmjd3具有组蛋白H3K27me3的去甲基化作用.     

GRP78基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定

目的构建葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因短发夹RNA表达载体并鉴定,为探讨GRP78对胃癌发生发展作用及机制提供前期基础。方法运用核糖核酸(RNA)干扰技术构建靶向干扰GRP78蛋白短发夹RNA(GRP78-shRNA)载体,载体经转化、抽提及测序,用脂质体将GRP78-shRNA载体瞬时转染至SGC-7901胃癌细胞中,应用荧光显微镜、反转录定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)观察GRP78表达情况。结果GRP78-shRNA载体测序显示序列正确;转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞可见绿色荧光;qRT-PCR和Western blot结果显示,转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞中GRP78基因和蛋白表达降低。结论成功构建并鉴定GRP78基因短发夹RNA表达载体。     

SPAG6基因RNAi慢病毒载体的构建及其对SKM-1细胞凋亡的影响

目的 构建SPAG6-shRNA慢病毒载体靶向沉默SPAG6基因,探讨SPAG6基因沉默对人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计并构建3条针对SPAG6基因的shRNA质粒表达载体,共转染293T细胞后得到可表达SPAG6基因RNAi的慢病毒载体.转染SKM-1细胞,利用流式细胞术检测转染效率,qRT-PCR及Western blot验证SPAG6基因干扰效果,筛选最佳靶点.CCK-8法检测SPAG6基因沉默对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 成功构建SPAG6-shRNA慢病毒载体,流式细胞术检测转染效率均在60％以上.qRT-PCR及Western blot检测结果显示SPAG6-shRNA3慢病毒载体敲除效率最高,为最佳靶点.SPAG6基因干扰后,干扰组SKM-1细胞的增殖明显受抑,抑制率为(60.18 ±0.37)％,与阴性对照组相比差别有统计学意义(P＜0.05).干扰组SKM-1细胞凋亡率为(16.32±5.80)％,显著高于阴性对照组[(4.28±0.88)％,P =0.024]及空白对照组[(3.08±1.50)％,P=0.019].结论 SPAG6-shRNA慢病毒载体能有效降低SPAG6基因表达水平,抑制SKM-1细胞增殖并促进其凋亡.     

雌激素受体β干扰质粒对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响及ERK1/2信号通路的作用

目的 探讨雌激素受体 β(ERβ)干扰质粒对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响,以及ERK1/2信号通路在其中的作用.方法 针对ERβ 特定靶定位置,构建干扰质粒psilencer-2.1-U6-neo-shERβ(shERβ),利用Lipofectemine2000作为载体将shERβ 转染PC3细胞,采用G418筛选稳定低表达ERβ 的PC3细胞.Real-time PCR及Western blot检测ERβ 的表达.实验分为空白对照组、阴性对照组、shERβ 组,将3组细胞注射在裸鼠皮下建立移植瘤模型,空白对照组未加入任何处理因素;阴性对照组转染空质粒psilencer-2.1-U6-neo;shERβ组转染重组质粒psilencer-2.1-U6-neo-shERβ.绘制肿瘤生长曲线和称取瘤重;应用免疫组织化学检测肿瘤组织ERβ 的表达及ERK1/2活化;应用Western blot检测肿瘤组织VEGF的表达.结果 测序比对分析表明成功完成了干扰质粒psilencer-2.1-U6-neo-shERβ 的构建,Real-time PCR及Western blot结果显示成功转染并筛选出稳定低表达ERβ 的PC3细胞.体内成功建立PC3细胞裸鼠移植瘤模型,移植瘤生长曲线显示shERβ 组移植瘤生长速度明显快于其他两组.免疫组化结果显示ERβ阳性表达shERβ 组最低;ERK1/2阳性表达在3组之间无明显差异,p-ERK1/2阳性表达shERβ 组最高(P<0.05).Western blot结果显示shERβ 组VEGF蛋白表达明显高于其他两组(P<0.05).结论 ERβ 可通过抑制ERK1/2信号通路活化来抑制前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为.     

一种比格犬雌二醇β受体剪切异构体的克隆和序列分析

目的 分析比格犬下丘脑-垂体-性腺轴,雌二醇β受体剪切异构体的存在情况.方法 根据NCBI数据库上的比格犬雌二醇受体的基因序列,设计两对特异性引物,以比格犬的卵巢、子宫、下丘脑和垂体的总RNA为模板进行反转录,并利用两对特异性引物扩增比格犬雌二醇受体的基因,对其中的主要条带进行克隆测序.结果 获得了比格犬雌二醇受体的全长cDNA序列,对主要条带进行克隆测序的结果表明,该序列是一种比格犬雌二醇受体的剪切异构体.结论 比格犬雌二醇β受体剪切异构体与小鼠和人的组成有较大的不同,需要进一步系统研究.     

人鼠共打靶 ERβ特异性基因沉默载体的构建和鉴定

目的：：构建人和鼠共打靶特异性 ERβ基因沉默慢病毒载体。方法：检索人和小鼠 ERβ基因转录本及其序列,应用 SiRNA Target Finder 软件设计人和小鼠共打靶 ERβ基因沉默 siRNA 和阴性对照siRNA,合成发夹状双链 shRNA,与线性化质粒 PLL3.7连接构建为重组质粒(ERβ-shRNA-PLL3.7和阴性对照质粒 ER-N-shRNA-PLL3.7),经鉴定后,转染人成骨肉瘤细胞 MG63和小鼠成骨细胞株MC3T3-E1,经 Realtime-PCR 和 western blot 法检测重组质粒对目的基因沉默效果。应用 SPSS16.0软件统计分析,检验水准为α=0.05。结果：经测序证明重组质粒中含有目的 shRNA 序列。分别转染小鼠成骨细胞株 MC3T3-E1和人成骨肉瘤细胞 MG63细胞后,无论 Realtime-PCR 检测 ERβ基因表达,还是western blot 法检测蛋白表达,均较空白对照组或阴性对照组显著降低,差异有显著性,P <0.05。结论：成功构建了人和小鼠共同高效打靶的 ERβ基因沉默慢病毒载体质粒,并包装成假病毒颗粒,为利用小鼠作为动物模型研究人基因功能或开发基因药物奠定了基础。     

慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞系建立

目的构建靶向糖原合成激酶3β(GSK-3β)基因的RNA干扰慢病毒载体,建立其对GSK-3β基因沉默表达的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的细胞系模型。方法根据GSK-3βmRNA序列设计合成靶向目的基因的短发夹状RNA(shRNA)序列并构建慢病毒表达载体,经酶切和测序鉴定,将慢病毒重组载体与包装载体共转染293T细胞,获得纯化浓缩病毒液,侵染SH-SY5Y细胞,采用绿色荧光示踪观察细胞的转染情况,设为慢病毒干扰组(实验组)、阴性对照组(Lenti-NC组)、空白对照组(Blank组),利用qRT-PCR和Western blot法检测GSK-3βmRNA和蛋白表达水平。结果成功构建了靶向GSK-3β的shRNA慢病毒,重组慢病毒转染人SH-SY5Y细胞,72 h后观察转染效率达90%以上,与对照组比较,靶基因变化结果显示,实验组中GSK-3βmRNA和蛋白的表达均显著降低(均P<0.01)。结论有效建立慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞模型,为体外评价研究GSK-3β沉默后药物或行为治疗AD提供试验工具细胞模型。     

慢病毒介导HIF-1α沉默对缺氧肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的HIF-1α基因沉默对体外模拟缺氧条件下的肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法:设计合成1条针对HIF-1α基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒GV248中,转染293T细胞包装产生慢病毒,转染人肝癌细胞株HepG2细胞,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。将HepG2细胞分为正常对照组、干扰对照组(转染NC-shRNA)、干扰组(转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl2)模拟肿瘤细胞缺氧微环境,应用Western Blot检测HepG2细胞中HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,CCK-8检测沉默HIF-1α基因对HepG2细胞增殖的影响,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测沉默HIF-1α基因对细胞凋亡的影响。Western Blot检测HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质细胞色素C(Cyt-C)表达的变化。结果:①成功构建HIF1α-shRNA慢病毒载体并转染HepG2细胞,缺氧培养细胞24h后,与正常对照组及干扰对照组相比,干扰组细胞内HIF-1α蛋白表达明显降低(P<0.01),证实慢病毒载体能够有效沉默HIF-1α基因。②沉默HIF-1α基因后缺氧培养的HepG2细胞增殖率下降(P<0.05),而细胞凋亡比例升高(P<0.01)。③Western Blot结果显示,与正常对照组及干扰对照组相比,沉默HIF-1α基因后细胞内凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质Cyt-C表达上调(P<0.05或P<0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P<0.01),Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高。结论:通过shRNA慢病毒载体途径可有效沉默缺氧HepG2肝癌细胞HIF-1α基因,HIF-1α沉默能显著抑制缺氧HepG2细胞增殖活性,促进细胞凋亡,其凋亡途径可能与激活内源性线粒体凋亡通路有关。     

Reg3β干扰载体的构建及在H9C2心肌细胞中的鉴定

目的 构建再生基因蛋白3β(regenerating islet-derived protein 3 beta,Reg3β)干扰载体,并在H9C2大鼠心肌细胞中优化转染条件,鉴定抑制效果,为深入探索Reg3β在心血管疾病的作用提供有利的工具。方法 设计合成Reg3β干扰序列,在5′端加入一个SacⅠ的酶切位点,3′端加入LOOP环序列和反向互补序列,构建pG1.2-Reg3β shRNA沉默载体。接着分别用Lipofectamine2000和Lipofectamine3000优化摸索转染大鼠H9C2心肌细胞的效率,以q-PCR和Western blot法检测H9C2细胞内Reg3β的表达量。结果 设计合成了3对Reg3β干扰序列,从中筛选出抑制效率最高达67.93%的序列,酶切和测序结果证实成功构建了pG1.2-Reg3β shRNA。经过优化比较发现,pG1.2-Reg3β shRNA沉默载体Lipofectamine3000比例为1μg∶3μl时,其转染效率最高(50%以上)。q-PCR和Western blot法检测结果显示,最佳干扰载体在最高转染条件下可使H9C2细胞Reg3β表达量降低50%以上。结论 成功构建了pG1.2-Reg3β shRNA沉默载体,并在H9C2细胞中有效干扰Reg3β的表达,可用于探讨Reg3β在心血管疾病中的作用。     

雌激素受体亚型ERα和ERβ在子宫内膜癌的表达研究

目的:探讨雌激素受体亚型ERα和ERβ在子宫内膜癌发生发展中的作用及意义。方法:采用免疫组化方法,分别检测了43例子宫内膜癌组织和15例正常子宫内膜组织中ERα和ERβ表达情况。结果:(1)正常内膜和内膜癌组织间ERα蛋白表达强度有统计学差异(P<0.05)。(2)正常内膜和内膜癌组织间ERβ蛋白表达强度有统计学差异(P<0.01)。(3)ERα、ERβ在子宫内膜的表达从正常内膜到内膜癌随着病变的进展呈逐渐下降的趋势。内膜癌中ERα缺失18例占41.86%,ERβ缺失16例占37.21%,ERα/ERβ之值在内膜癌中呈下降的趋势。(4)ERα表达在内膜癌发生中的变化显著高于ERβ。结论:在子宫内膜癌的发生过程中,ERα的缺失起主要作用,ERβ则起调节作用。