脂质体介导NF-кB decoy ODN低温缺氧对ECV-304的转染及复氧后对下游粘附分子及趋化因子基因表达的影响

目的探讨在Euro-Collin's(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下脂质体(in v1vo Liposome)介导N F-κ B诱捕物寡核苷酸(NF-κ B decoy ODN)对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的转染效率以及复氧后对其细胞分子表达的影响.方法ECV-304在10?S的RPMI 1640培养液,37℃、5%CO2条件下培养,生长至单层融合后进行试验.使用前配制Liposome/decoy ODN和scrambled ODN复合物,Liposome与ODN的 /-电荷比率为2.应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在4℃条件下,ODN浓度1.0μM的ECs缺氧保存6h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和摄取率以及ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照,观察Liposome介导ODN对ECV-304的转染效率.利用RT-PCR方法检测各组ECV-304的ICAM-1、VCAM-1、IL-8、MCP-1以及P-selectin的mRNA表达.结果在ECs中、4℃缺氧保存ECV-304 6h后,LiPosome介导ODN对ECV-304转染的MFI为10172.71±33.14,是裸ODN转染的91.1倍,细胞对ODN的摄取率为93.06±2.60%,是裸ODN转染的71 5倍.Liposome介导ODN转染的ECV-304,荧光显微镜下可见部分荧光颗粒分布于胞浆,胞核内可见强荧光颗粒;而裸ODN转染的ECV-304,胞浆内偶见少量荧光,胞核内未见荧光颗粒RT-PCR检测显示Liposome/decoy ODN转染ECV-304后,其ICAM-1,VCAM-1,IL-8,MCP-1以及P-selectin的mRNA的表达低于未转染组和Scramb.ODN转染组,有显著性差异.结论低温缺氧条件下和ECs中,Liposome能有效地将ODN转染到ECV-304的胞核中,而裸ODN则不能进入细胞;经Liposome/decoy ODN处理的ECV-3 04,其下游粘附分子及趋化因子的基因表达被抑制.     

低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染

目的 研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4 ℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(In vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率。方法 (1) 将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37 ℃、5% CO₂的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验。(2) 使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN 的+/-电荷比率为2。(3) 应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4 ℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25 μmol/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率。结果 在ECs中、4 ℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了最大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异。但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性。结论 在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoy ODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据。     

低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染

目的 研究在Euro-Collins溶液(ECs)中，低温(4℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(In vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率。方法 (1)将ECV-304在含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中以37℃、5％CO2的条件培养，待生长至单层融合后，进行试验。(2)使用前配制脂质体-ODN复合物，脂质体与ODN的 ／-电荷比率为2。(3)应用荧光显微镜和流式细胞仪，观察在ECs中、4℃条件下，ODN浓度分别为0．50、0．75、1．00、1．25μmol/L时，缺氧保存2、4、6、8h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布；同时设立裸ODN转染为对照组，观察对ECV-304的转染效率。结果 在ECs中、4℃缺氧保存条件下．随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高，ECV-304的MFI增强，保存6h后MFI基本达到了最大强度，并且大部分ODN均位于细胞核内；而ODN的细胞摄取率无差异。但与裸转染相比，MFI和细胞摄取率均有显著差异性。结论 在ECs中和低温缺氧条件下，脂质体可以高效地将NF-κB decoy ODN转染到ECV-304细胞核，为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据。     

脂质体介导NF-κB decoy ODN低温缺氧对ECV-304的转染及复氧后对其黏附分子mRNA表达的影响

目的 :探讨在Euro Collin’s(ECs)中 ,低温缺氧条件下脂质体 (invivoliposome)介导NF κB诱捕物寡核苷酸 (NF κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株 (ECV 30 4 )的转染效率以及复氧后对其NF κB活性及受其调控的黏附分子mR NA表达的影响 .方法 :应用脂质体 /decoyODN、脂质体 /scrambledODN复合物 ,在低温缺氧的ECs转染ECV 30 4 .应用荧光显微镜和流式细胞仪 ,观察在 4℃条件下 ,decoyODN浓度为 1 .0 μmol/L的ECs缺氧保存ECV 30 4 6h后的平均荧光强度 (MFI)和摄取率以及ODN的胞内分布 ;同时设立裸ODN转染为对照 ,观察脂质体介导decoyODN对ECV 30 4的转染效率 .应用凝胶电泳迁移改变试验 (EMSA)分析ECV 30 4低温缺氧保存 6h/复氧后不同时间的NF κB活性以及decoyODN对NF κB活性抑制效果 .利用RT PCR方法检测各组ECV 30 4的ICAM 1 ,VCAM 1以及P selectin的mRNA表达 .结果 :ECV 30 4在ECs中 4℃缺氧保存 6h后 ,脂质体介导ODN对ECV 30 4转染的MFI为 1 0 72 .7± 33.1 ,是裸ODN转染的 91 .1倍 ,细胞对ODN的摄取率为 (93.1±2 .6 ) % ,是裸ODN转染的 71 .5倍 ;脂质体介导ODN转染的ECV 30 4 ,荧光显微镜下可见部分荧光颗粒分布于胞质 ,胞核内呈强荧光颗粒 ,而裸ODN转染的ECV 30 4 ,胞质内偶见少量荧光 ,胞核内未     

阳离子脂质体介导NF-κB"decoy"ODNs转染巨噬细胞条件的优化

目的:观察NF-κB "decoy"ODNs在阳离子脂质体lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞J774.1的优化参数以及在细胞内的分布.方法:改变ODN与lipofectin比率、转染时间;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率;荧光显微镜观察细胞内荧光分布;测定细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)观察细胞损伤情况.结果:lipofectin介导转染显著提高J774.1细胞对NF-κB "decoy"ODNs的摄取;在24孔培养板中,NF-κB "decoy"ODNs与lipofectin比率(W/W)为1∶5、转染6 h时,转染效率最佳而细胞毒性相对较低;lipofectin介导转染6 h后,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核和部分细胞质中,而直接转染时荧光物质多分布于细胞质.结论:lipofectin可增加NF-κB "decoy"ODNs的细胞摄入并改变其细胞内分布;NF-κB "decoy"ODNs与lipofectin比率(W/W)为1∶5、转染6 h时可获得最佳转染效率.     

CD40L诱导ECV-304细胞VCAM-1表达的分子机制

目的 研究人类脐静脉内皮细胞(ECV-304)、CD40/CD40L系统诱导血管细胞黏附分-1(VCAM-1)表达的分子机制。方法 体外培养ECV-304,免疫印迹分析法及TransAMTM系统分别检测CD40L干预前后转染核因子-κB(NF-κB)P65的表达量及活性。阳离子脂质体介导法短暂转染NF-κB(P65)正反义寡核苷酸(ODN),流式细胞仪检测VCAM-1表达。结果CD40L干预后24 h,VCAM-1的表达显著升高(P<0.05);未干预内皮细胞核内几乎无P65蛋白的表达,CD40L刺激30 min后,P65蛋白表达显著升高(P<0.01);CD40L干预后内皮细胞核抽提物的NF-κB(P65)转录因子活性明显升高。阳离子脂质体转染P65反义ODN至内皮细胞,可以显著抑制 rhsCD40L介导的VCAM-1的表达(P<0.05),转染P65正义ODN则不能抑制rhsCD40L介导的VCAM-1的表达。结论 NF-κB的活化可能部分参与了CD40/CD40L介导VCAM-1表达的信号转导途径。     

脂质体转染NF-κB诱捕物寡核苷酸抑制大鼠静脉桥血管内膜增生

目的 探讨转染NF-κB诱捕物寡核苷酸(decoy ODN)对自体移植静脉内膜增生的影响.方法 制作20 只自体颈部动脉上静脉移植SD大鼠模型,无序ODN对照组、decoy ODN实验组各10 只.移植前,实验组移植静脉行脂质体包裹的NF-κB decoy ODN溶液浸泡转染,对照组行脂质体包裹的无序ODN溶液浸泡.移植术后4 周取出移植血管,利用病理学、凝胶电泳迁移率迟滞分析(EMSA)和RT-PCR 分别检测移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、血管组织NF-κB转录活性和TNF-α mRNA 表达情况.结果 实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、NF-κB转录活性、TNF-α mRNA 表达较对照组明显减小或减少(均P＜0.01).结论 NF-κB decoy ODN可有效抑制静脉桥血管NF-κB的激活从而抑制移植静脉内膜的增生.     

阳离子脂质体介导NF-κB“decoy”ODNS转染巨噬细胞条件的优化

目的：观察NF-κB“decoy”ODNS在阳离子脂质体lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞J774．1的优化参数以及在细胞内的分布。方法：改变ODN与lipofectin比率、转染时间;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率;荧光显微镜观察细胞内荧光分布;测定细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)观察细胞损伤情况。结果：Lipofectin介导转染显著提高J774．1细胞对NF—κB“decoy”0DNS的摄取;在24孔培养板中,NF—κB“decoy”ODNS与lipofectin比率(W／W)为1：5、转染6h时,转染效率最佳而细胞毒性相对较低;lipofectin介导转染6h后,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核和部分细胞质中,而直接转染时荧光物质多分布于细胞质。结论：Lipofectin可增加NF—κB“decoy”ODKS的细胞摄入并改变其细胞内分布;NF—κB“decoy”0DNS与lipofectin比率(W／W)为1：5、转染6h时可获得最佳转染效率。     

大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后NF-κB P50/c-Rel对Bcl-xL表达的影响

目的探讨脂质体(TransfastFastTM Transfection Reagent)介导转录因子NF-κB圈套物(decoy)寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODNs)对Wistar大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后受NF-κB P50、c-Rel调控的抗凋亡因子Bcl-xL表达的影响。方法原代大脑皮质神经元体外培养,建立OGD/R模型,分为OGD 4 h/R 6 h组、NF-κB decoy ODNs组、无关decoy ODNs组、脂质体组;同时设立正常对照组。采用蛋白质印迹分析检测NF-κB P50、c-Rel蛋白表达;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠皮质神经元内Bcl-xL mRNA表达。结果蛋白质印迹分析显示OGD 4 h/R6 h组P50、c-Rel蛋白表达较正常组升高(P<0.01);转染NF-κB decoy ODNs后P50、c-Rel蛋白表达低于OGD 4 h/R 6 h组、脂质体组、无关decoy ODNs组(P<0.05);RT-PCR显示OGD 4 h/R 6 h组Bcl-xL mRNA表达较正常组升高(P<0.05);NF-κB decoy ODNs组Bcl-xL mRNA表达低于OGD 4 h/R 6 h组、脂质体组、无关decoy组(P<0.05)。结论 NF-κB decoy ODNs可有效抑制大脑皮质神经元OGD/R后受NF-κB亚基P50、c-Rel调控的抗凋亡因子Bcl-xL mRNA表达,这可能是NF-κB神经保护作用的部分机制。     

NF-κB圈套寡脱氧核苷酸联合紫杉醇对肺癌血管生成的影响

目的 探讨NF-κB圈套寡脱氧核苷酸技术（NF-κB decoy ODN ）联合紫杉醇对肺癌血管生成的影响。 方法 培养人肺癌细胞A549:⑴用脂质体瞬时转染法介导NF-κB全硫代圈套寡核苷酸(decoy ODN)和全硫代错义圈套寡核苷酸(scramble decoy ODN)处理A549 细胞;⑵分为对照组、NF-κB decoy ODN组、紫杉醇组(1 000 ng/mL)和NF-κBdecoy ODN +紫杉醇组,RT-PCR法测COX-2mRNA水平表达;⑶免疫组织化学法测VEGF蛋白表达。 结果 ⑴NF-κB decoy ODN、紫杉醇干预后A549细胞的COX-2 mRNA水平表达下降,各组浓度分别是：0.71、0.44、2.51、0.34μg/μL（F＝7.8,P＜0.05）。⑵NF-κB decoy ODN、紫杉醇干预后A549细胞的VEGF蛋白表达下降,各组细胞阳性率分别是：85%、63%、57%、21%（F＝21,P＜0.05）, 结论 NF-κB decoy ODN 联合紫杉醇可明显抑制肺癌细胞血管生成,该作用可能与COX-2、VEGF 表达相关。     

CD40L诱导ECV-304细胞VCAM-1表达的分子机制

目的研究人类脐静脉内皮细胞(ECV-304)、CD40/CD40L系统诱导血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的分子机制.方法体外培养ECV-304,免疫印迹分析法及TransAMTM系统分别检测CD40L干预前后转染核因子-кB(NF-кB)P65的表达量及活性.阳离子脂质体介导法短暂转染NF-кB(P65)正反义寡核苷酸(ODN),流式细胞仪检测VCAM-1表达.结果CD40L干预后24 h,VCAM-1的表达显著升高(P<0.05);未干预内皮细胞核内几乎无P65蛋白的表达,CD40L刺激30 min后,P65蛋白表达显著升高(P<0.01);CD40L干预后内皮细胞核抽提物的NF-кB(P65)转录因子活性明显升高.阳离子脂质体转染P65反义ODN至内皮细胞,可以显著抑制rhsCD40L介导的VCAM-1的表达(P<0.05),转染P65正义ODN则不能抑制rhsCD40L介导的VCAM-1的表达.结论NF-кB的活化可能部分参与了CD40/CD40L介导VCAM-1表达的信号转导途径.     

辛伐他汀抑制CD_(40) L介导的内皮细胞激活的分子机制研究

目的 研究在人脐静脉内皮细胞中3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A (HMG-CoA) 还原酶抑制剂降低CD_(40) /CD_(40) L系统介导内皮细胞活化的分子机制.方法 采用人脐静脉内皮细胞株ECV-304,阳离子脂质体介导法短暂转染核因子-κB (NF-κB) P65正反义寡核苷酸 (ODN) 至CD_(40) L干预的内皮细胞,流式细胞仪检测转染正反义寡核苷酸对CD_(40) L介导的E-selectin、VCAM-1表达的影响;免疫印迹分析 (Western-Blot) 及TransAMTM系统检测CD_(40) L及辛伐他汀干预前后NF-κB (P65) 的量及活性.结果 P65反义ODN可以显著抑制rhsCD_(40) L介导的E-Selectin和VCAM-1的表达,P65正义ODN则不能抑制rhsCD_(40) L介导的上述因子的表达.辛伐他汀可显著降低CD_(40) L介导的内皮细胞NF-κB (P65) 的表达量及NF-κB的活性.结论 CD_(40) /CD_(40) L信号传导途径中至少部分有NF-κB的参与,辛伐他汀抑制CD_(40) /CD_(40) L信号系统可能与抑制NF-κB活性有关.     

NF-κB靶向性哑铃形"圈套"ODNs抑制大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后TNF-α的表达

目的 设计合成靶向哑铃形寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)圈套,检测其对大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后TNF-α表达的抑制效应.方法 原代大脑皮质神经元体外培养,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD4 h/R6 h组、NF-κB decoy ODNs组、无关decoy ODNs组、脂质体组为实验组,采用Western blot检测NF-κB p65蛋白表达,分别采用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反廊法(RT-PCR)检测FNF-α蛋白和mRNA表达.结果 Westernblot检测显示NF-κB decoy ODNs组NF-κB P65蛋白表达明显低于OGD4 h/R6 h组、脂质体组、无关decoy ODNs组(P<0.05),与OGD4 h/R6 h组、脂质体组、无关decoy组相比NF-κB decoy ODNs组TNF-α蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05);而脂质体组、无火decoy ODNs组对NF-κB P65蛋白、TNF-α蛋白和mRNA表达未见抑制(P>0.05).结论 靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs可有效抑制大脑皮质神经元OGD/R后炎症因子TNF-α mRNA及蛋白的表达.     

核因子-κB decoy ODN改善肺挫伤兔血清抗炎性因子IL-10、IL-13的表达

目的 研究NF-κB双链寡脱氧核苷酸圈套(NF-κB decoy ODN)对严重胸外伤肺挫伤血清NF-κB、IL-10、IL-13及肺组织NF-κB蛋白表达的影响.方法 40只新西兰白兔随机分为(1)严重胸外伤肺挫伤组(n=12);(2)严重胸外伤肺挫伤NF-κB杂链decoy ODN干预组(n=12);(3)严重胸外伤肺挫伤NF-κB正链decoy ODN治疗组(n=12);(4)对照组:正常无损伤组(n=4).建立严重胸外伤肺损伤模型,按实验分组分别将合成的正链、杂链NF-κB decoy ODN经颈内静脉注入,每只实验兔分别注射20μg.于肺挫伤前、挫伤后1、2、3、4h检测血清NF-κB、IL-10、IL-13及肺组织NF-κB蛋白的表达.结果 肺挫伤后1h,血清中NF-κB含量升高,4 h达高峰.经NF-κB正链decoy ODN治疗2 h后,升高的NF-κB开始下降,3 h达最低值.IL-10、IL-13的表达在肺挫伤后1 h下降,并分别于挫伤后2h、4h降至最低值,经杂链decoy ODN治疗后,IL-10、IL-13表达无明显改变,而经NF-κB正链decoy ODN治疗后2 h,IL-10的表达明显增高,而IL-13的表达维持于较高水平,与挫伤组、杂链decoy ODN治疗组相比,差异具显著性,P＜0.01,经正链decoy ODN治疗后挫伤肺组织NF-κB蛋白表达明显降低,差异具有显著性,P＜0.01.结论 在严重胸外伤肺挫伤早期给予NF-κB正链decoy ODN治疗,可使血清NF-κB表达减少、抗炎性细胞因子IL-10、IL-13表达升高,NF-κB蛋白表达减少.     

地氟醚预处理对缺氧/复氧损伤ECV304细胞NF-κB活性的影响

目的探讨地氟醚预处理对缺氧/复氧(A/R)损伤ECV304细胞NF-κB活性的影响。方法选用ECV304细胞株.实验分为两部分:(1)将细胞分为空白对照组及TNF-α不同持续时间刺激组共6组,用West-ernblot法分析NF-κB的抑制因子IκB蛋白的降解和磷酸化。(2)将细胞分为5组,即空白对照组(Ⅰ组)、A/R组(Ⅱ组)、A/R TNF-α10ng/mL刺激组(Ⅲ组)、地氟醚1.0MAC预处理 A/R组(Ⅳ组)和地氟醚1.0MAC预处理 A/R TNF-α10ng/mL刺激组(Ⅴ组)。用间接免疫荧光法检测各组细胞NF-κB/p65亚基的定位。结果TNF-α刺激ECV304细胞后,IκB-α蛋白降解的时间高峰为30min,而IκB-α磷酸化的时间高峰为1h。A/R损伤可激活ECV304细胞中NF-κB的活性,而经1.0MAC地氟醚预处理后,由TNF-α激活的上述变化可受到抑制。免疫荧光分析显示,TNF-α刺激可使NF-κB/p65荧光标记由胞浆区转入胞核区,而经地氟醚预处理后,NF-κB/p65入核明显减少。结论抑制NF-κB的激活可能是地氟醚预处理减少ECV304细胞缺氧/复氧损伤的机制之一。     

IL-1预刺激对反义IRAK-2寡核苷酸抑制NF-κB活化的影响

目的 研究白介素-1（IL-1）预刺激对反义受体相关激酶-2寡核苷酸（IRAK-2 ODN）抑制IL-1激活核因子-kappa B（NF-κB）的影响。方法 实验分IL-1预处理组和非预处理组,以脂质体介导反义 IRAK-2 ODN转染293细胞,以夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测NF-κB的含量。结果 IL-1非预处理组反义IRAK-2 ODN不能抑制NF-(B活化,而预处理组NF-κB活化受到明显抑制（4 (g 反义 IRAK-2 ODN与细胞共孵育8 h时,NF-κB的光密度值从ODN转染前的0.835±0.013下降到转染后的 0.261±0.008）,且这种抑制作用具有时间（5~24 h）和剂量（1~8 (g）依赖性。结论 IL-1预刺激在反义IRAK-2 ODN抑制IL-1诱导的NF-κB活化中起决定性作用。     

发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究

目的采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,通过构建人NF-κB p65基因的特异性siRNA真核表达载体,体外观察对NF-κB基因的沉默作用,以及对内毒素(LPS)刺激后NF-κB活性的调控作用.方法采用基因克隆技术,将合成的发卡样特异性p65 RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体(pPUR/U6),构建p65 siRNA的表达载体,转染体外ECV-304细胞,48h后观测胞内NF-κB p65亚单位蛋白水平(Western blotting)、及对LPS(10 μg/ml)刺激后NF-gB活化的抑制作用.结果①成功构建发卡样p65 siRNA(small interfere RNA)真核表达载体(pPUR/U6-p65 siRNA);②pPURyU6-p65 siRNA转染(脂质体法)ECV-304细胞,48 h后明显下调胞内P65蛋白水平;③转染pPUR/U6-p65 siRNA的细胞,明显抑制LPS(10μg/ml)刺激后NF-κB的活化.结论该RNA干扰真核表达载体能明显干扰p65蛋白的表达、释放,进而抑制NF-κB的活化,可望进一步抑制细胞的过度炎症反应,减轻创伤组织的受损程度,促进创伤后组织的修复.     

NF-κB 双链寡脱氧核苷酸圈套对严重胸外伤挫伤肺超微结构的影响

目的 研究NF-κB双链寡脱氧核苷酸圈套 （NF-κB decoy ODN） 对严重胸外伤肺挫伤血清NF-κB及肺组织超微病理的影响。方法 40只新西兰白兔随机分为⑴A组,严重胸外伤肺挫伤（n=12）;（2）B组,严重胸外伤肺挫伤NF-κB杂链decoy ODN治疗（n=12）;（3）C组,严重胸外伤肺挫伤NF-κB 正链decoy ODN治疗（n=12）;（4）D组,正常无损伤对照（n=4）。方法 建立严重胸外伤肺损伤模型,按实验分组分别将合成的正链、杂链NF-κB decoy ODN经颈内静脉注入,每只实验兔分别注射20μg。于挫伤后1、2、3、4h检测血清NF-κB及肺组织超微结构病理的改变。结果 肺挫伤后血清中NF-κB含量1h升高,4h达高峰。经NF-κB正链decoy ODN治疗后2h,升高的NF-κB开始下降,3h达最低值。超微结构病理结果显示,D组肺组织肺泡结构正常,Ⅰ、Ⅱ型细胞清晰,或毛细血管轻微充血（图1）;A组挫伤后1h时肺泡及毛细血管充血（ 图2）,2h时可见肺泡腔内白细胞,毛细血管充血严重,有轻微出血 ;3h后肺泡腔破损中等出血,毛细血管充血严重（ 图3）;而B组于挫伤后1h肺泡腔少量出血,肺泡壁毛细血管充血（ 图4）,2h时肺泡腔毛细血管出血,有红、白细胞释放至肺泡腔 ,3h后肺泡腔出血严重,可见板层小体空化,染色质凝集（ 图5）;C组在肺挫伤后1h肺泡腔无出血,肺泡壁毛细血管仅少量充血（ 图6）,2、3h时毛细血管充血,肺泡腔可见出血 ,4h后可见充血明显的肺泡壁毛细血管,肺泡腔内仅见少量红细胞（ 图7）。各组组间比较,肺挫伤后均有不同程度充血出血,但经正链decoy ODN治疗后,肺泡腔出血明显减少,说明正链NF-κB decoy ODN可使急性肺挫伤组织病变减轻。结论　在严重胸外伤肺挫伤早期给予NF-κB正链decoy ODN治疗,可使血清NF-κB表达减少,并减轻挫伤肺组织超微病变,对急性肺挫伤发展具有一定阻断作用。     

脂质体介导的p65反义寡核苷酸减轻急性出血坏死性胰腺炎大鼠的炎症损伤

目的 观察脂质体介导的p65反义寡核苷酸(ASODN)预处理对大鼠急性出血坏死性胰腺炎(ANP)的抗炎作用.方法 通过胰胆管的注射法诱导大鼠出血坏死性胰腺炎.其中72只大鼠分成假手术组,胰腺炎组、脂质体组、ASODN组(20 OD/mL)、ASODN＋脂质体组、随机ODN组,观察各组大鼠术后6 h及12 h胰腺病理、血清淀粉酶、胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)及NF-κB活性的变化.结果 同假手术组相比,各处理组的血清淀粉酶活性、MDA、MPO水平、胰腺组织NF-κB活性明显升高(P＜0.01).各处理组间的血清淀粉酶的差别无统计学意义.同胰腺炎组相比,脂质体组和随机ODN组的胰腺病理评分、MDA、MPO、胰腺组织NF-κB活性的差别无统计学意义(P＞0.05),而ASODN组、ASODN＋脂质体组的胰腺病理评分,MPO、MDA、胰腺组织NF-κB活性下降(P＜0.05),其中ASODN＋脂质体组下降更为明显.结论 脂质体介导的p65反义寡核苷酸能减轻ANP大鼠的炎症发展,NF-κB参与了AP的发病机制,其p65 ASODN对AP可能具有治疗效应.     

低浓度二甲亚砜和第二信使调节剂混合物低温保存血小板的初步研究

目的:研究NF-κB"诱骗(decoy)"寡核苷酸(ODNs)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774.1细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:体外培养巨噬细胞,LPS刺激后脂质体转染NF-κB"decoy"ODNs,用硝酸还原酶法测定培养液中NO水平以及iNOS含量,RT-PCR观察细胞iNOS的mRNA表达变化.结果:NF-κB"decoy"ODNs可降低巨噬细胞培养体系LPS诱导的NO合成,阻断iNOS mRNA的表达;对照序列的ODNs和转染剂对NO、iNOS无明显影响.结论:NF-κB"decoy"ODNs可以抑制iNOS的活性,减少NO生成,可能与其特异性竞争抑制活化NF-κB结合位点有关.