氯化钾对神经母细胞瘤细胞系谷氨酸释放的影响

利用高效液相方法观察了氯化钾对培养人神经母细胞瘤细胞系（ＳＨ ＳＹ５Ｙ）细胞谷氨酸释放的影响。发现：当培养液中存在钙离子时，一定浓度的氯化钾（１０～３０ｍｍｏｌ／Ｌ）可使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放增加，但氯化钾浓度超过４０ｍｍｏｌ／Ｌ时，谷氨酸释放增加不明显；当培养液中没有钙离子时，氯化钾不能使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放明显增加。结果表明氯化钾对ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞释放谷氨酸的作用与钙离子相关     

RT—PCR方法检测非神经元,类神经元,神经元细胞系中淀粉样前 …

目的与方法 根据人淀粉样前体蛋白（ａｍｙｏｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ,ＡＰＰ）基因ｃＤＮＡ序列设计的引物,提取总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测非神经,类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达。结果 利用专门设计的引物不能检测野生型ＣＯＳ－７细胞中,ＡＰＰ基因的表达,但可以检测转染人ＡＰＰ基因的非神经元类ＣＯＳ－７细胞类神经元的野生型ＰＣ１２及人神经母细胞瘤细胞,ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中ＡＰＰ     

二苯乙烯类化合物对肺癌细胞株生长的抑制作用

研究二苯乙类类化合物（含３种结构类的成分：（１）（＋）－α－ｖｉｎｉｆｅｒｉｎ，（２）ｍｉｙａｂｅｎｏｌＣ，（３）ｋｏｂｏｐｈｅｎｏｌＡ，一种蛋白激酶对人肺癌细胞株Ａ５４９，９５－Ｄ，ＳＰＣ－Ａ－１，ＮＣＩ－Ｈ４６０及ＮＣＩ－Ｈ４４６细胞体外生长的抑制作用。方法锥虫蓝排除法ＭＴＴ法，Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ＡＰＯ ＩＱ ＩＶＳ ＱＣ ＥＹ 凝胶电泳 。结果药物处理时间越长及浓度越高，细胞生长抑制作     

EVALUATION OF THE ANTITUMOR ACTIVITY OF HUMAN IL－4 BY IN VITRO AND IN VIVO ASSAYS

ＥＶＡＬＵＡＴＩＯＮＯＦＴＨＥＡＮＴＩＴＵＭＯＲＡＣＴＩＶＩＴＹＯＦＨＵＭＡＮＩＬ－４ＢＹＩＮＶＩＴＲＯＡＮＤＩＮＶＩＶＯＡＳＳＡＹＳ￥ＷａｎｇＴｏｎｇｇａｎｇ（王彤钢）ａｎｄＣｈｅｎＷｅｉｆｅｎｇ（陈慰峰）（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏ...     

羊红膻根中羊红膻素H等的分离与鉴定

从草药羊红膻Ｐｉｍｐｉｎｅｌｌａ ｔｈｅｌｌｕｎｇｉａｎａ Ｗｏｌｆｆ。根降压有效部位中首次分得５个化合物,经光谱（ＵＶ,ＩＲ,ＭＳ,＾１ＨＮＭＲ,＾１３ＣＮＭＲ,＾１Ｈ－＾１ＨＣＯＳＹ,＾１Ｈ－＾１３ＣＣＯＳＹ,ＤＥＰＴ）解析,鉴定为５－甲氧基－２－甲基苯骈呋喃（Ｉ）,甘油二乙酸酯（Ⅱ）,异香草醛（Ⅲ）,棕榈酸（Ⅳ）,油酸（Ⅴ）,其中化合物Ｉ为具有降压活性的新化合物,命名为羊红膻素Ｈ;化合物Ⅱ～     

天麻注射液对主动脉平滑肌细胞增殖的影响

在家兔主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）离体培养基础上，应用细胞计数、３Ｈ－ＴｄＲ掺入及测定培养液中前列环素（ＰＧＩ２）产物含量的方法，探讨天麻注射液及其有效成分天麻素对ＶＳＭＣ增殖的影响及作用机理。结果表明：天麻注射液能明显抑制ＶＳＭＣ数目的增长和细胞对３Ｈ－ＴｄＲ的摄取，并可增加ＰＧＩ２水解产物６－Ｋ－ＰＧＦ１α的释放，但天麻素却未发现上述抑制ＶＳＭＣ增殖作用，提示天麻注射液的抗ＶＳＭＣ增殖作用与天麻素无关，而ＰＧＩ２产物含量增加可能是其机理之一。     

THE EFFECTS OF BREVISCAPIN ON AT－Ⅲ ACTIVITY， tPA AND PAI IN DOGS DURING ACUTE MYOCARDIAL ISCHEMIA

ＴＨＥＥＦＦＥＣＴＳＯＦＢＲＥＶＩＳＣＡＰＩＮＯＮＡＴ－ⅢＡＣＴＩＶＩＴＹ，ｔＰＡＡＮＤＰＡＩＩＮＤＯＧＳＤＵＲＩＮＧＡＣＵＴＥＭＹＯＣＡＲＤＩＡＬＩＳＣＨＥＭＩＡＳｈｅｎｇＪｉｎｇ（盛净），ＸｕＪｉｍｉｎ（徐济民），ＹａｎｇＪｕｘｉａｎ（杨菊贤），...     

丝裂素活化蛋白激酶介导同型半胱氨酸诱导的血管平滑 …

目的；研究同型半胱氨酸（ＨＣＹ）促进血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖及其机制。方法：采用同位素技术测量＾３Ｈ－ＴｄＲ参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＨＣＹ促进ＶＳＭＣ增殖，同时ＨＣＹ增加ＭＡＰＫ活性，二者均具有剂量效应关系，而且二者之间呈显著正相关。结论：ＨＣＹ促进ＶＳＭＣ增殖，可能是通过增加ＭＡＰＫ活性的途径实现的。     

宫颈癌癌前病变及宫颈癌与HPV感染的关系

目的： 评价宫颈癌前病变及宫颈癌与宫颈人乳头状瘤病毒 （ Ｈ Ｐ Ｖ） 感染的关系。方法： 对１５８ 例宫颈涂片异常患者进行阴道镜下宫颈多点活检同时行宫颈 Ｐ Ｃ Ｒ Ｈ Ｐ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 检测。结果： 慢性宫颈炎、低度鳞状上皮内病变 （ Ｌ Ｓ Ｉ Ｌ） 、高度鳞状上皮内病变 （ Ｈ Ｓ Ｉ Ｌ） 和宫颈癌的 Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ 感染率分别为８６６ ％ 、３４６９ ％ 、６８８９ ％ 和８３３３ ％ , Ｈ Ｓ Ｉ Ｌ 的 Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ 感染率明显高于 Ｌ Ｓ Ｉ Ｌ （ Ｐ＜ ００１） 。 Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ （ ＋ ） 的 Ａ Ｓ Ｃ Ｕ Ｓ 中 Ｈ Ｓ Ｉ Ｌ 检出率明显高于 Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ （ － ） , Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ （ ＋ ） 的 Ｌ Ｓ Ｉ Ｌ 中 Ｈ Ｓ Ｉ Ｌ 检出率明显高于 Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ （ － ） 。结论： 宫颈癌前病变、宫颈癌与 Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ 感染密切相关, 随着病变程度的加重, Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８检出率升高, 提示 Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ 为宫颈癌的高危因素。宫颈 Ｐ Ｃ Ｒ Ｈ Ｐ Ｖ １６／１８ Ｄ Ｎ Ａ 的检测可用于 Ａ Ｓ Ｃ Ｕ Ｓ、 Ｌ Ｓ Ｉ Ｌ 患者活检前的筛查。     

病毒性心肌炎心肌线粒体结构功能变化及大剂量维生素C干预作用

目的：探讨病毒性心肌炎（ＶＭＣ）小鼠心肌线粒体结构和功能，并用大剂量维生素Ｃ进行干预。方法：雄性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠随机分为柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）感染组（ＩＧ）、ＣＶＢ３感染加大剂量维生素Ｃ治疗组（ＩＶＧ）和对照组（ＣＧ）。采用电镜和形态计量学方法观察心肌线粒体形态、数量和膜磷脂定位，用酶细胞化学法分析心肌线粒体细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）和琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性。结果：ＩＧ小鼠心肌线粒体大量破坏，ＣＣＯ和ＳＤＨ活性降低，膜磷脂严重缺失、定位改变（Ｐ　＜０．０５～　０．０１）。不同时相点ＩＶＧ上述各项指标均较ＩＧ显著改善（Ｐ　＜０．０５～０．０１）。结论：ＶＭＣ心肌线粒体结构严重破坏、功能明显下降，大剂量维生素Ｃ能有效保护心肌线粒体结构和功能。     

胰岛素增敏剂罗格列酮对链脲佐菌素损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的观察胰岛素增敏剂罗格列酮对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)所致胰岛素信号转导通路损伤的SH-SY5Y细胞的影响。方法将人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞分为对照组、STZ制备神经元损伤模型组(STZ 0.8 mmol/L)、罗格列酮干预组(STZ 0.8 mmol/L+罗格列酮20μmol/L),测定每组的细胞计数、噻唑蓝(MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,观察罗格列酮对SH-SY5Y细胞的作用。结果与对照组相比,STZ模型组的细胞计数和MTT代谢率降低(P<0.01),LDH漏出率升高(P<0.01);经罗格列酮保护后,上述细胞生存指标明显改善,细胞计数和MTT代谢率均高于STZ损伤组(P<0.01),LDH漏出率降低(P<0.01)。结论罗格列酮可以减轻STZ引起的神经细胞毒性,提高细胞生存率,其作用机制尚需进一步探讨。     

石菖蒲挥发油微乳减轻低氧诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5 Y细胞线粒体损伤的机制研究

目的 观察石菖蒲挥发油微乳对低氧诱导SH-SY5Y细胞线粒体损伤的影响,并探讨其作用机制.方法 低氧处理SH-SY5Y细胞24 h后分别加入不同浓度的石菖蒲挥发油微乳含药血清,采用MTT法检测细胞存活率,JC-1荧光探针测定法和共聚焦显微镜观察线粒体膜电位,通过实时逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)测定细胞中Bcl-2和Bax mRNA的表达.结果 石菖蒲挥发油微乳可以显著提高低氧环境下SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.01),逆转线粒体跨膜电位的下降,并显著降低细胞中Bax mRNA表达(P<0.01).结论 石菖蒲神经保护的机制可能与线粒体保护、减少细胞凋亡相关.     

人参益智片对神经细胞的保护和修复机制

目的 研究人参益智片(RYT)对神经细胞保护和修复的机理,开发人参益智片为辅助改善记忆的保健食品提供依据.方法 采用MTT法测定Aβ25-35、冈田酸、过氧化氢致细胞损伤的IC50,并观察人参益智片对SH-SY5Y细胞的保护修复.结果 人参益智片与SH-SY5Y细胞共同孵育24 h情况下,在11.72~187.5μg/mL浓度范围内具有促进增殖作用;细胞存活率与冈田酸浓度相关,冈田酸浓度增大,细胞存活率降低,并通过拟合曲线计算IC50为80 nmol/L;人参益智片在一定浓度范围内对SH-SY5Y有保护作用,浓度超过187.5μg/mL时则诱导细胞凋亡,出现细胞毒样作用.结论 人参益智片对SH-SY5Y的正常细胞有保护作用,对由OKA损伤的SH-SY5Y细胞有修复作用.     

不同能量的培养条件对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响

目的 建立热量限制的体外模型,观察不同能量培养条件下对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞生长代谢的影响.方法 将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞分别采用含有低浓度(2 g/L)、正常浓度(3.15g/L)或高浓度(4.5 g/L)葡萄糖的培养基进行常规传代培养,利用MTT代谢率、细胞生长曲线及LDH漏出率等指标观察各组细胞生长情况.结果 与正常葡萄糖浓度培养条件下培养的对照组相比,高糖组细胞突起缩短,细胞胞体皱缩,MTT代谢率稍低(0.573±0.001),LDH漏出率高,细胞生长状态差;与对照组相比,低糖组细胞突起伸展,MTT代谢率较低(0.428±0.003),LDH漏出率低,细胞生长速度缓慢,但是形态良好.结论 高糖培养对细胞有损伤作用,细胞代谢加速,更容易衰老死亡;而低糖培养起到保护作用,在热量限制允许范围内降低培养液的含糖量,不但不会对细胞造成损伤,反而对细胞的代谢及生长起到保护作用,延长细胞的总体寿命.     

松果菊苷对MPP＋诱发的线粒体碎片化、自噬及细胞凋亡的影响

目的：观察松果菊苷对1-甲基-4-苯基吡啶（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP＋）引起的SH-SY5Y细胞线粒体碎片化、自噬及细胞凋亡的影响。方法：通过MPP＋诱导SH-SYSY细胞线粒体损伤及细胞凋亡,并设对照组,松果菊苷低、中、高剂量组;比较SH-SY5Y细胞线粒体的形态;检测细胞线粒体膜电势的变化及线粒体自噬;观察细胞凋亡的改变。结果：MPP＋可引起SH-SY5Y细胞线粒体碎片化,线粒体膜电势显著下降,线粒体自噬及细胞凋亡增加。低、中、高剂量松果菊苷都能明显抑制MPP＋诱导的线粒体膜电势下降,使线粒体自噬及细胞凋亡增加（P〈0．05）,高、中剂量组的效应比低剂量组的更好。然而,松果菊苷三个剂量组对MPP＋诱导的线粒体碎片化都没有明显效应。结论：松果菊苷可以减轻MPP＋诱发的SHSY5Y细胞线粒体损伤和细胞凋亡,但对线粒体形态变化没有显著影响。     

甘氨双唑钠对人神经母细胞瘤细胞株SH—SY5Y放射敏感性的影响

目的探讨甘氨双唑钠（CMNa）在常氧和缺氧条件下对人神经母细胞瘤细胞株（SH—SY5Y）放射敏感性的影响。方法在常氧和缺氧条件下,以不同浓度的CMNa处理SH—SY5Y,CCK-8法检测细胞存活率为50％时的药物浓度（IC50）及其95％可信区间Ic,。（95％CI）。在常氧和缺氧条件下,分别给予0、1、2Gy单次吸收剂量照射经1mmol／LCMNa处理的SH—SY5Y（CMNa组）和未经CMNa处理的SH—SY5Y（对照组）,观察克隆形成情况,流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率,Westernblotting分析细胞周期和凋亡相关蛋白的表达变化。结果常氧和缺氧条件下,SH·SY5Y的IC50（95％CI）分别为3．62（3．07—4．26）和1．59（1．20—2．12）mmol／L。在常氧状态下,CMNa组克隆形成数量显著少于对照组;与常氧状态比较,缺氧状态下的克隆形成数量明显减少。在缺氧条件下,与对照组比较,CMNa组细胞凋亡率和细胞G,期比例升高,S期比例降低;促凋亡蛋白Caspase3／8／9和Bax表达增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少;细胞周期相关蛋白CyclinD1表达减少,p16表达增加。结论CMNa对缺氧状态下的SH—SY5Y有特异的放疗增敏作用。     

银杏内酯对过氧化氢损伤的皮层神经元和SH—SY5Y细胞亲环蛋白A（CypA）表达的影响

目的：研究银杏内酯（ginkgolides,Gin）对过氧化氢（H2O2）诱导的皮层神经元及SH-SY5Y细胞（神经母细胞瘤细胞）损伤的保护作用及其机制。方法：在培养1周的小鼠皮层神经元培养基中加入H2O2,建立神经元氧化损伤模型,用同样方法建立SH-SY5Y细胞氧化损伤模型。采用MTT比色法检测细胞活力,Western Blot技术分析亲环蛋白A的表达变化。结果：H2O2可诱导神经元和SH-SY5Y细胞损伤,使细胞活力降低,可下调亲环蛋白A的表达;Gin预处理12 h可提高细胞活力,可使亲环蛋白A表达增加。结论：Gin可抑制H2O2引起的神经元及SH-SY5Y细胞损伤,该保护作用与其上调亲环蛋白A的表达有关。     

钙稳态失衡在1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的研究钙稳态失衡在1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导SH-SY5Y细胞凋亡中的作用。方法MTT法检测细胞存活
率;Hoechst 33342 和Annexin V+PI 染色检测MPP+诱导人神经神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡作用;Western blot 检测
PARP蛋白表达的变化;罗丹明123 染色检测MPP+对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响;激光共聚焦显微镜检测MPP+对
SH-SY5Y细胞胞质钙、线粒体钙和内质网钙浓度的影响以及线粒体钙通道抑制剂钌红与MPP+联合应用对线粒体游离钙浓度、
胞质游离钙浓度的影响。结果MPP+导致SH-SY5Y细胞存活率下降且具有剂量-反应关系、MPP+能导致SH-SY5Y细胞凋亡、
MPP+导致SH-SY5Y细胞线粒体膜电位下降、MPP+使SH-SY5Y细胞胞质和内质网游离钙离子浓度下降而使线粒体游离钙离子
浓度上升。钌红可对抗MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡、阻止线粒体膜电位下降,减少PARP的切割片段以及阻断线粒体游离
钙浓度的上升。结论线粒体钙超载在MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡中起重要作用。MPP+诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细
胞的凋亡可能与细胞质、线粒体及内质网的钙稳态失衡有关。
     

Bcl-2蛋白在蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸诱导的体外神经细胞退化中的作用

目的:在体外水平条件下,探讨抗凋亡蛋白Bcl-2在蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸所诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)样神经细胞退化中是否具有细胞保护的作用.方法:以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y作为体外神经细胞研究材料,采用脂质体介导重组质粒pEGFP-N1-Bcl-2瞬时转染细胞的方法,造成神经细胞外源性过表达Bcl-2蛋白与绿色荧光蛋白的融合蛋白,以荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白显示转染阳性细胞,再用冈田酸处理转染细胞,通过DNA荧光染料染色法显示细胞凋亡核形,显微镜下计数细胞测定凋亡率.结果:①冈田酸剂量依赖性地引起SH-SY5Y细胞凋亡,DNA荧光染料染色显示,80nmol冈田酸作用24h引起该种细胞出现多量核浓聚、核碎裂的凋亡核形;②脂质体介导pEGFP-N1-Bcl-2和空质粒pEGFP-N1瞬时转染SH-SY5Y细胞,细胞分别过表达Bcl-2-绿色荧光蛋白的融合蛋白和绿色荧光蛋白,前者主要分布于近核的胞质,而后者则在胞质和胞核中均有分布;200nmol经典促凋亡剂星形孢菌素处理细胞24h,Bcl-2重组质粒转染组的细胞凋亡率显著低于空质粒转染组的细胞凋亡率(P＜0.01);③80nmol冈田酸处理细胞24h,Bcl-2重组质粒转染组的细胞凋亡率显著低于空质粒转染组的细胞凋亡率(P<0.05).结论:冈田酸能引起体外培养神经细胞SH-SY5Y发生凋亡性退化,Bcl-2重组质粒瞬时转染引起该种细胞过表达具有抗凋亡活性的融合蛋白Bcl-2-绿色荧光蛋白,Bcl-2过表达能部分抑制冈田酸所致SH-SY5Y细胞退化,这提示Bcl-2在冈田酸所致阿尔茨海默病样神经细胞退化过程中可能具有细胞保护作用.     

藁本内酯预处理对Aβ25-35诱导人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用

目的探讨藁本内酯(Z-ligustilide,LIG)对β淀粉样蛋白(Aβ)25-35引起的人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用。方法 0.1、1.0、2.5、5.0μg/mL LIG作用于SH-SY5Y细胞,24h后以50μmol/LAβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立阿尔茨海默病体外模型,MTT法检测细胞活性,Western blot法检测细胞中凋亡蛋白含量。结果经Aβ25-35处理后,细胞存活率下降,细胞内凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8表达上调,但Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.05)。细胞经过LIG一定浓度预处理,细胞存活率提高,凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8蛋白表达下降,Bcl-2表达上升(P均<0.05)。结论 LIG具有对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞毒性的保护作用,其机制可能是抑制Aβ诱导的细胞凋亡。