自发性破裂肝癌组织 CD16突变结构基因检测

目的：检测肝癌自发性破裂中 CD16结构基因突变,从分子水平更深入地探讨肝癌自发性破裂的机制。方法收集肝癌自发性破裂及非破裂患者各22例资料。患者肝癌组织中 CD16结构基因 S1、EC1和 EC2 DNA 突变情况应用PCR 法及基因测序技术进行检测。结果 EC1内第1483位、1533位及1605位出现 G/ A、G/ A 及 A/ G 等错义突变, EC2内在第5223位及5277位出现 T/ C 及 T/ G 等错义突变。Y5223H 及 Y5277F 两个错义位点突变率（54.54% vs 0）在两组之间差异有统计学意义（P <0.05）,非破裂组 EC1及 EC2总的突变发生频率显著低于破裂组（ P <0.05）。结论FcγRⅢA 结构基因突变表面与肝癌巨噬细胞受体 CD16合成下降有关,是肝癌自发性破裂的可能机制。     

Oncogene Mdm2 takes part in hepatocarcinogenesis

1　ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＭｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｐ53ｇｅｎｅａｒｅｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎａｌｔｅｒａｔｉｏｎｆｏｕｎｄｉｎｈｕｍａｎｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｓ[1,2 ] .ＢｕｔｔｈｅｒｅｈａｖｅｂｅｅｎｆｅｗｒｅｐｏｒｔｓａｂｏｕｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＭｄｍ 2-ｉｎｄｕｃｅｄＰ53ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎＨＣＣ .Ｗｅａｎａ ｌｙｚｅｄｔｈｅｐ53ｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｅｘｏｎｓ 5～ 8ｂｙｐｏｌｙ ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ -ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆ…     

HBV相关肝细胞癌患者HBV前S/S基因变异的分析

目的:研究肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者体内乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)前S/S基因变异特点.方法:分别对9例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性肝癌患者及其家族中11例HBsAg阳性者血清乙肝病毒前S/S基因PCR扩增克隆.测序并进行结构分析.找出基因变异活跃位点,再对两组资料作统计学分析.结果:除对照组中1例未能扩增出前S/S基因,仅能扩增出S基因,其它样本均扩增出前S/S基因片段.所有HBV株均为B或C基因型和adrq 或adw2血清型.肝癌患者来源的HBV在包膜蛋白抗体结合区点突变发生率较高,但与对照组相比,没有统计学差异(P＞0.05).肝癌组4例发生HBV前S区删除变异,具有特异性.与对照组(0/10)相比,有统计学差异(P＜0.05).结论:HBV前S/S区点突变可能与肝癌发生没有相关性,而前S区删除变异可能与肝癌发生有密切联系,应当对HBV感染者进行前S区基因变异监测.     

Molecular and immunohistochemical study of the inactivati on of the p16 gene in primary hepatocellular carcinoma

Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｏｆｐ16ｇｅｎｅａｒｅｋｎｏｗｎｔｏｏｃｃｕｒｉｎｍａｎｙｐｒｉｍａｒｙｔｕｍｏｒｓ ,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｍｅｌａｎｏｍａ ,ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｓ ,ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｓａｎｄｔｈｅｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ 1 5　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐ16ｇｅｎｅｏｃｃｕｒｓｖｉａｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｄｅｌｅｔｉｏｎ,ｐｏｉｎｔ…     

原发性肝细胞癌中p16和cyclinD1蛋白表达及p16突变研究

目的：研究p16和cyclinD1蛋白表达及p16基因第2外显子突变与原发性肝细胞癌（HCC）发生的关系。方法：利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）分析技术分别检测44例HCC及癌旁肝组织p16和cyclinD1蛋白表达和12例新鲜手术肝癌组织的p16基因突变。结果：HCC中p16蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织（P＜0．01）,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织,12例新鲜HCC标本中p16基因第2 子突变率为16．7％（2／12）,癌旁组织未发现p16基因第2外显子突变;有p16基因突变的HCCp16蛋白表达呈阴性。结论：P16蛋白失活或／和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一;HCC存在P16基因第2外显子突变,但不是频发事件;在HCC形成过程中,P16基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用。     

原发性肝细胞癌中p16和cyclin D1蛋白表达及p16突变研究

目的 :研究p1 6和cyclinD1蛋白表达及p1 6基因第 2外显子突变与原发性肝细胞癌 (HCC)发生的关系。方法 :利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应———单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术分别检测 44例HCC及癌旁肝组织p1 6和cyclinD1蛋白表达和 1 2例新鲜手术肝癌组织的p1 6基因突变。结果 :HCC中p1 6蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织 (P <0 .0 1 ) ,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织。 1 2例新鲜HCC标本中p1 6基因第 2外显子突变率为 1 6 .7% (2 /1 2 ) ,癌旁组织未发现p1 6基因第 2外显子突变 ;有p1 6基因突变的HCCp1 6蛋白表达呈阴性。结论 :p1 6蛋白失活或 /和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一 ;HCC存在p1 6基因第 2外显子突变 ,但不是频发事件 ;在HCC形成过程中 ,p1 6基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用     

PIN1 Gene Overexpression and β-catenin Gene Mutation/Expression in Hepatocellular Carcinoma and Their Significance

The evolution of hepatocellular carcinoma (HCC) is a compound process which involves many kinds of genes and transductional pathways. The expression of the peptidyl-proplyl- isomerase PIN1 gene, the mutation in exon 3 of β-catenin and its correspondent abnormal expression and their roles in the hepatocellular carcinogeneisis were investigated. Among 29 pair cases of HCC and non-carcinoma tissues, the expression of PIN1 gene was detected by immunochemical staining. Mu-tations in exon 3 of β-catenin gene and differential expression of β-catenin gene were investigated by the methods of PCR-SSCP, direct sequencing and immunohistochemical technique as well. The re-sults indicated: (1) 44.8% (13/29) cases of HCC presented higher level of PIN1 gene expression than non-cancerous tissues (χ2 =32.63, P<0.05), especially in cytoplasm and nucleus, while there was lower level of PIN1 expression in non-cancerous tissues; (2) 58.6% (17/29) HCC tissues showed β-catenin protein accumulation in cytoplasm and nucleus. 46.2% (6/13) HCC tissues indicated β-catenin protein accumulation with higher level of PIN1 expression, while 53.8% (7/13) HCC tis-sues indicated β-catenin protein accumulation with lower level or trace of PIN1 expression (χ2 =0.00, P>0.05); (3) 24.1% (7/29) of primary tumor lesions carried gene mutations in exon 3 of β-catenin, and accompanied by β-catenin protein accumulation. There was no mutation in non-cancerous tissues. All the mutation presented in tissues with low level of PIN1 expression. There was no mutation of β-catenin gene in tissues with high PIN1 expression level (χ2=58.12, P<0.05). So it was postulated that the increase of PIN1 gene expression could promote hepatocellular carcinogenesis via a way dif-ferent from β- catenin gene mutation.     

p53基因在涎腺多形性腺瘤发生中的基因序列突变

目的 检测腺多形性腺瘤ｐ５３基因第７、８外显子的碱基突变,探讨该瘤的发生及生物学特征。方法 从手术标本中选择涎腺多形性腺瘤１４例。采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析技术及ＤＮＡ核酸序列测定方法对涎腺多形性腺瘤７例第７外显子异常者。３例第８外显子阳性者。５例第７外显子ＳＳＣＰ（其中３例第８外显子ＳＳＣＰ也呈阳性）的肿瘤进行核酸序列测定。结果 发现ＳＳＣＰ阳性的肿瘤相应的外显子碱基序列已发生变化。第     

乙型肝炎病毒S区基因突变对乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌患者预后的影响研究

背景　我国肝癌发病率逐年上升,这主要与乙型肝炎病毒（HBV）感染流行有关,多项研究表明HBV基因突变与乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌（HBV-HCC）患者发病密切相关,HBV S区基因突变与HBV-HCC患者术后预后的关系鲜有报道。目的　通过对HBV S区基因进行测序分析,分析一般资料及HBV S区基因突变位点与HBV-HCC患者预后的关系。方法　本研究于2007—2009年采集在河北医科大学第四医院行外科手术治疗的46例HBV-HCC患者的肝癌组织标本进行分析,提取DNA,针对HBV S区基因进行扩增和测序,鉴定出HBV S区基因的突变位点。记录患者的一般资料（年龄、性别、CHILD分级、基因型、肿瘤数目、门脉瘤栓、TNM分期、肿瘤大小）。分析一般资料及HBV S区基因突变位点与HBV-HCC患者术后预后的关系。结果　46例HBV-HCC患者的基因分型为25例B型、21例C型。不同门脉瘤栓、TNM分期、肿瘤大小的HBV-HCC患者3年生存率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。共发现13个位点的突变频率>5％,其中529位点、735位点不同碱基HBV-HCC患者3年生存率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。Cox比例风险模型分析结果显示,门脉瘤栓、529位点是HBV-HCC患者术后生存的独立影响因素（P<0.05）。结论　门脉瘤栓和HBV S区529位点被确定为是与HBV-HCC患者术后预后相关的独立危险因素,这一结果有助于鉴别预后不良的HBV-HCC患者,对于提高其生存期、改善其预后具有重要意义。     

Two novel STK11 mutations in three Chinese families with Peutz-Jeghers syndrome

Background Peutz-Jeghers syndrome (PJS) is an autosomal dominantly inherited disease. STK11/LKB1 gene germline mutations have been identified as responsible for PJS. In our study, we investigated the molecular basis of PJS and evaluated correlation between the STK11 mutations and the Chinese population.Methods We collected three pedigrees of PJS and screened the 9 exons and their flanking intronic sequences of STK11/LKB1 gene in the probands and normal individuals in the families using polymerase chain reaction (PCR) and direct sequencing.Results Sequencing of the STK11 gene in the probands of 3 families revealed two novel mutations (c180C→G and c998-1002delGCAGC) in exon 1 and exon 8, respectively. The mutation of c180C→G resulted in a premature termination codon. The other mutation, a deletion of five nucleotides (998-1002delGCAGC) in exon 8, predicted to generate a translational frameshift and a termination at codon 1070.Conclusions The growing number of mutations in PJS pedigrees suggests the molecular basis of PJS. STK11 gene mutation can be detected in most patients with PJS.     

颅内海绵状血管畸形CCM1基因突变的分析

目的探讨颅内海绵状血管畸形（ICM）患者CCM1基因突变的情况。方法收集经手术病理证实的ICM患者25例,均为汉族,其中家族性ICM7例。以30例正常健康人作为对照组。抽取两组对象的静脉血,提取基因组DNA、PCR,扩增CCM1基因8、9、11、12、13、15、16、17、18号外显子及部分两侧相邻的内含子、DNA测序,结果与GenBank比较。结果ICM患者中有11例被检测出7个新的CCM1基因突变,突变率为44％（11／25）。其中错义突变3个：12号外显子,1160A→C（Q387P）、1172C→T（S391F）;13号外显子,1405A→C（N469H）,插入突变2个：8号外显子,704insT（K246stop）;18号外显子,2138insG（T733stop）,内含子突变1个：IVS12-4C→T,同义突变1个：17号外显子,1875C→T（F625F）。除了1875C→T的同义突变可能为基因多态性以外,其他被发现的CCM1基因突变均导致编码KRIT蛋白的变化。对照组的CCM基因未检测出异常。家族性ICM的CCM1基因突变率高于散发性ICM,两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论国人ICM患者同样存在CCM1基因的突变,导致编码的KRIT1蛋白功能改变或缺失,这与ICM发病相关,是ICM发病的遗传学基础。     

伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病四个家系的NOTCH3基因突变研究

目的 报告4个伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(CADASIL)家系的NOTCH3基因突变特点。方法 对4个经临床和病理检查证实的CADASIL家系中的先证者作NOTCH3基因编码区外显子1～12的聚合酶链反应(PCR)和DNA测序,对家系2和4中的部分亲属也作了同样的检查。结果 4个家系中的先证者均发现有NOTCH3基因的杂合性错义突变,先证者1为外显子3的268C→T突变,先证者2为外显子3的322C→T突变,先证者3为外显子3的328C→T突变,先证者4为外显子11的1819C→T突变,分别造成Notch3蛋白质R90C、C108R、R110C和R607C4个位点氨基酸的替换。其中先证者2的C108R突变尚未见文献报道。在家系2和家系4中,部分成员也携带与先证者同样的突变。结论 这4个家系的CADASIL病均由NOTCH3基因的突变引起,不同位点的基因突变导致相似的临床表现。     

原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

为探讨ｐ１６基因与原发性肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）的关系,作者分别采用多重ＰＣＲ、ＳＳＣＰ以及以ＰＣＲ为基础的甲基化分析法,对２５例原发性ＨＣＣ标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中ｐ１６基因的缺失,点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化ＳＬＡＢ法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性ＨＣＣ肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中Ｐ１６蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性ＨＣＣ肿瘤标本中,３例     

Infrequent microsatellite instability mutator phenotype in Chinese hepatocellular carcinomas

Objective: In order to elucidate the molecular mechanisms that might be responsible for hepatocarcinogenesis, we examined microsatellite instability (MSI), mismatch repair gene hMLH1 mutation and methylation in hepatocellular carcinoma. Methods: Fifty-two cases of surgically resected sporadic hepatocellular carcinoma (HCC) were studied, hMLH1 mutation was examined by two-dimensional electrophoresis and DNA sequencing; hMLH1 methylation was determined by methylation-specific PCR (MSP); and MSI at BAT26 was analyzed by PCR-based methods. Results: MSI at BAT26 was found in 3 of 52 cases (5.8%) of the tumors analyzed. No hMLH1 mutation or hypermethylation was found in these 52 cancerous tissues. No correlation existed between MSI and clinico-pathological characteristics of the patients. Conclusion: Our results suggest that MSI at BAT26 is rarely associated with carcinogenesis of chinese HCC. The genesis of sporadic HCC may occur in an alternative pathway that is probably different from MSI pathway.     

人肝癌组织中nm23-H1基因突变的检测及意义

目的观察肿瘤转移抑制基因nm23-H1在人原发性肝细胞癌中的突变情况，探讨nm23-H1基因突变与肝癌发生、发展及转移的关系。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性技术（PCR-SSCP），对16例肝癌组织、12例癌旁组织和4例正常肝组织的nm23-H1基因的第1、2、4外显子突变情况突变进行检测。结果肝癌组织中有1例nm23-H1基因第1外显子纯合缺失；肝癌组织中1例第1外显子、1例第2外显子，癌旁组织中2例第2外显子有单链DNA泳动变位。结论nm23-H1基因突变在肝癌组织中发生率低。     

内蒙古地区汉族散发性乳腺癌与BRCA1基因突变的相关性研究

目的 本实验旨在研究内蒙古地区汉族散发性乳腺癌患者BRCA 1基因第11外显子有无突变.方法 选择内蒙古地区69例汉族散发性乳腺癌患者作为研究对象,提取DNA,采用聚HTK合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）和基因测序技术方法检测BRCA 1基因第11外显子.统计分析BRCA 1基因突变情况.结果 69例散发性乳腺癌中BRCA 1基因第11外显子上共发现2例突变（2073delA移码突变和W372X无义突变）.结论 内蒙古地区汉族散发性乳腺癌中BRCA1基因第11外显子发现2例突变,均已收录于NCBI数据库中;尚未发现国内文献报道的在中国汉族群中可能具有部分始祖效应的突变位点.     

原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

作者分别采用多重PCR、SSCP以及以PCR为基础的甲基化分析法,对２５例原发性HCC标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中p16基因的缺失、点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化SLAB法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性HCC肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中P16蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性HCC肿瘤标本中,３例有p16基因缺失,无p16基因缺失的２２例肿瘤标本中均未发现有p16基因点突变存在。肿瘤标本中基因的甲基化发生率为24%（6/25）,而全部非肿瘤组织均未出现p16基因甲基化。在３５例HCC肿瘤标本中共发现P16蛋白表达缺失16例(45.7%),而全部非瘤组织P16蛋白均表达阳性。由此提示,p16基因的失活与P16蛋白表达的丧失与原发性肝细胞性肝癌的发生及发展有关。     

肺癌p53基因突变与蛋白表达关系的研究

目的 以测序结果为标准,探讨免疫组织化学和聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）两种方法用于检测肺癌ｐ５３基因突变的敏感性及优缺点。方法 用免疫组织化学,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ产物直接测序检查３０例肺癌标本的Ｐ５３蛋白和基因改变,结果 ３０例肺癌标本经测序共检出２２例突变,突变位于第５外显子８例（３６％）,位于第６外显子２例（９％）,位于第７外显子７例（３２％）,位于第８外显子５例（２     

P53基因测序在恶性肿瘤诊断中的应用价值研究

①目的研究P53基因测序在临床肿瘤诊断中的应用价值。②方法采用聚合酶链式反应一直接测序方法对肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、甲状腺癌、宫颈癌及支气管和胃粘膜非典型增生的活检标本,急、慢性白血病的外周血标本,肺癌胸水、肝癌腹水标本等临床肿瘤样本进行P53基因外显子5、6、7、8序列分析。⑧结果正常对照组未发现突变、所测的几种常见肿瘤样本的活检标本的突变率一般为30％～50％,胸、腹水标本突变率与相应肿瘤的活检标本相近,突变大多位于外显子7、8。存在突变的病例2年病死率明显升高。④结论P53基因测序在常见恶性肿瘤诊断和判断预后等有一定的参考价值。     

大鼠肝癌变中p53点突变及其蛋白表达的研究

目的 研究大鼠肝癌变中突变型P53蛋白（mP53）的表达及p53基因第6外显子点突变。方法 通过DEN诱发的启动模型和肝癌模型,应用免疫组化、MDT－PCR－SSCP和直接测序技术分别研究mP53表达和53基因第6外显子点突变。结果 mP53阳性细胞仅见于癌前个别肝细胞增生结节中,8／18例（44．44％）肝细胞癌呈mP53阳性;8例mP53阳性肝癌中仅有1例（12．50％）被检出p53基因第6外显子发生点突变,即第208位密码子第1碱基G→G填换。结论 在DEN诱发的启动模型和肝癌模型中p53基因突变可发生于大鼠肝癌变之癌前及肝癌形成阶段,且第6外显子突变率低。