CCl_4诱导大鼠肝纤维化过程中α1（Ⅰ）、α1（Ⅲ）及α1（Ⅳ）前胶原基因表达的动态观察

利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术对ＣＣｌ４诱导大鼠肝纤维化过程中α１（Ⅰ）、α１（Ⅲ）及α１（Ⅳ）３种前胶原ｍＲＮＡ的表达状况进行观察。结果证实α１（Ⅰ）、α１（Ⅲ）及α１（Ⅳ）３种前胶原ｍＲＮＡ的表达均有增加，但三者的变化并不同步。纤维化早期首先是α１（Ⅳ）前胶原ｍＲＮＡ表达增加。随后是α１（Ⅲ）前胶原ｍＲＮＡ，后者在整个肝纤维化过程中呈优势性表达。α１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ的增加又滞后于α１（Ⅲ）且上升缓慢，至第２０周时才逐渐与α１（Ⅲ）前胶原ｍＲＮＡ含量相近。可能是由于存在反馈性抑制的缘故，使得前胶原基因表达的上调并非呈直线递增而是曲线上升。     

转化生长因子—β1及其受体的表达与大鼠肝纤维化关系 …

探讨肝纤维化形成过程转化生长因子－β及其受体的表达对胶原合成的影响。方法：采用免疫组化和斑点杂交技术,观察实验性大鼠肝纤维化过程肝内ＴＧＦ－β１,ＴＧＦ－βＲⅡ和Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ及其蛋白表达的动态变化。结果随着肝纤维化程度的加重,肝内ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－βＲⅡ和Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ及其蛋白表达均明显增加,组间比较均有显著差异（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）。ＴＧＦ－β１与Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲ     

干扰素α对肝纤维化鼠星状细胞I和Ⅲ型前胶原mRNA表达及胶原？…

目的 观察干扰素α对大鼠纤维化时星状细胞增殖,Ｉ,Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和肝脏胶原沉积的影响。方法 以ＣＣｌ４制造肝纤维化模型,培养肝星状细胞,抽提ＲＮＡ,用地高辛标记Ｉ,Ⅲ型前胶原和胶原酶ｃＤｎＡ探针,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析Ｉ,Ⅲ型前胶原和胶原酶ｍＲＮＡ表达,Ｄｏｔｂｌｏｔ测定大鼠肝Ｉ,Ⅲ型胶原沉积,分别用＾３Ｈ－ＴｄＲ和＾３Ｈ－脯氨酸掺入观察干扰素α对星状细胞增殖和胶原合成的影响。结果 干扰     

川芎嗪和764—3对成纤维细胞Ⅰ,Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响

川芎嗪和７６４－３均有抑制纤维化的作用。本工作观察了川芎嗪和７６４－３对体外培养的成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达的影响结果表明，加入川芎嗪２４ｈ对Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达均有明显抑制作用；加入７６４－３２４ｈ对Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达均有明显抑制作用；加入７６４－３（终浓度为１５μｇ／ｍｌ）２４ｈ对Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达无明显作用，对Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ表达非但不抑制反而有明显促进作用。作     

干扰素α2b抑制大鼠肝纤维化形成的实验研究

以４０％四氯化碳花生油诱导大鼠肝纤维化模型，同时用重组干扰素α２ｂ（ＩＦＮ－α２ｂ）及秋水仙碱（ＣＯＬ）做预防性治疗，观察ＩＦＮ－α２ｂ对大鼠肝每人经形成的影响。结果发现ＩＦＮ－α２ｂ及ＣＯＬ治疗组血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原及透明质酸水平，以及肝组织纤维化程度均低于模型组，ＩＦＮ－α２ｂ组肝组织痰症活动度及Ⅰ、Ⅲ型胶原，ＴＮＦ－α显色指数均显著小于模型组。作者认为，ＩＮＦ－α２ｂ可通     

环孢素A联合雷公藤单体T_4对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成及Ⅳ型胶原α1、转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的探讨环孢素Ａ（ＣsＡ）、雷公藤单体Ｔ４单独或联合使用对肾小球系膜基质合成的影响及可能机制。方法用ＥＬＩＳＡ法测定人系膜细胞培养上清Ⅳ型胶原含量,用ＲＴ－ＰＣＲ法测定人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原α１ｍＲαＮＡ（Ｃｏｌｌα１（Ⅳ）ｍＲＮＡ）、转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）ｍＲＮＡ的表达。结果ＣｓＡ可双向调节人系膜细胞Ⅳ型胶原的合成,ＣｓＡ１．０ｕｇ／ｍｌ为促进作用,ＣｓＡ０．０１～０．１ｕｇ／ｍｌ为抑制效应。Ｔ４剂量依赖性促进Ⅳ型胶原产生。两药联合应用具有协同效应,小剂量ＣｓＡ和Ｔ４联合在获得较强免疫抑制作用的同时促胶原生成作用较弱。ＣｓＡ１．０ｕｇ／ｍｌ和Ｔ４１０ｎｇ／ｍｌ均可上调人系膜细胞Ｃｏｌｌβ１（Ⅳ）、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达,两者变化趋势基本一致。结论ＣｓＡ和Ｔ４均参与调节基质合成,两药小剂量联合促胶原生成作用减轻,这一作用可能由ＴＧＦβ１介导发生于转录水平。     

大鼠肝纤维化过程中Ⅳ型胶原合成与降解的变化

探讨肝纤维化发生时Ⅳ型胶原的合成，分解规律及其细胞来源。利用免疫组织化学，核酸分子杂交以及血清放射免疫技术，对ＣＣＬ４诱导大鼠肝纤维化不同阶段Ⅳ型胶原基因，蛋白及其降解产物的变化进行了观察。结果肝纤维化早期α１前胶原ｍＲＮＡ转录与血清７Ｓ多肽均明显增加，但此后二者含量的变化并不同步。     

Ⅲ型胶原在人和大鼠肝纤维化中的意义

为了深入研究Ⅲ型胶原在纤维化中的意义，本工作应用核酸分子杂交和免疫组化技术，对人体慢性肝病和大鼠肝纤维化模型（早期）肝组织中Ⅲ型胶原蛋白不同阶段的表达产物（前胶原ｍＲＮＡ、前胶原端肽和胶原蛋白）作定性、定量和定位检测，同时对Ⅰ型胶原作相应观察，兼以结蛋白和α－平滑肌肌动蛋白分别作为贮脂细胞和肌成纤维细胞的标记。结果显示肝纤维化早期和活动期主要是Ⅲ型胶原合成增多，并证明间质细胞特别是炎症活动区窦旁贮脂细胞及其相关细胞是肝纤维化时主要的胶原生成细胞。     

TNF—α拮抗胰岛素样生长因子—1对人α1（Ⅰ）胶原启动子？…

目的：探讨ＴＮＦ－α对胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）激活人α１（Ⅰ）胶原启动子的作用。方法：构建含不同长短α１（Ⅰ）胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因的重组体ｐＣＯＬＨ１ ０．２７,ｐＣＯＬＨ１ ２．５用脂质体法瞬时转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的人皮肤成纤维细胞中,加入ＩＧＦ－１或（和）ＴＮＦ－α,测定ＣＡＴ活性。结果;１００ｎｇ／ｍｌ ＩＧＦ－１可使转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的ｐＣＯ     

川芎嗪和764－3对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响

川芎嗪和７６４－３均有抑制纤维化的作用。本工作观察了川芎嗪和７６４－３对体外培养的成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达的影响结果表明，加入川芎嗪（终浓度３０μｇ／ｍｌ）２４ｈ对Ｉ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达均有明显抑制作用；加入７６４－３（终浓度为１５μｇ／ｍｌ）２４ｈ对Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达无明显作用，对Ｉ型前胶原ｍＲ－ＮＡ表达非但不抑制反而有明显促进作用。作者对７６４－３这种作用的可能原因做了初步讨论。     

Ⅰ,Ⅲ型前胶原mRNA在风心病心肌中表达及其与c—myc基因表达相关？…

目的：了解风湿性心脏病心肌中Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃ基因的表达定位情况及意义。方法；用人Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｃＤＮＡ探针和ｃ－ｍｙｃ基因探针，对３２例风湿性二尖瓣乳头肌进行分子原位杂交并进行图像分析，结果：（１）病变心肌间质中Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ阳性表达明显增强，Ⅰ型较正常成年心肌中增高１．６７倍，Ⅲ型增高４．３６倍；（２）病变心肌细胞核内出现Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃ基因阳性表达，     

肺间质病病人肺泡巨噬细胞的条件培养基对肺成纤维细胞胶原基因表达的作用

作者研究了肺间质病病人肺泡巨噬细胞的条件培养基对成纤维细胞的作用。用人胚肺组织分离培养了肺成纤维细胞，并做了初步鉴定。与正常对照组相比，肺间质纤维化病人的肺泡巨噬细胞的条件培养基对肺成纤维细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率平均增加了７１．４％，这说明成纤维细胞有明显的刺激增生作用（Ｐ＜０．０５），而肺癌组病人的肺泡巨噬细胞的条件培养基仅使成纤维细胞的３Ｈ－ＴｄＲ掺入率增加１４．３％，与对照比较差异无显著意义。使用胶原αｌ（Ⅰ）和αｌ（Ⅲ）－ｃＤＮＡ探针，检测了胶原的ｍＲＮＡ。与对照组相比，肺间质病病人的αｌ（Ⅰ）原胶原ｍＲＮＡ含量平均增加了２１．３％，αｌ（Ⅲ）原胶原ｍＲＮＡ水平增加了３７．２％。肺癌病人组原胶原ｍＲＮ人含量平均为４．６％。结果表明肺间质纤维化病人肺泡巨噬细胞的条件培养基对肺成纤维细胞胶原基因表达有促进作用，且Ⅲ型胶原比Ⅰ型胶原增加得多。     

肝硬变患者TGF—β1基因在外周血中表达及与PⅢP血清水平？…

目的：为验证肝纤维化动物模型和慢性肝病患者肝组织中,转化生长因子（ＴＧＦ－β１）的ｍＲＮＡ表达增强。作者分析肝硬变患者外周血ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ和血清中有活性的ＴＧＦ－β１蛋白及其结果与Ⅲ型前胶原Ｎ端肽血清水平间的关系。方法：肝硬变患者５０自愿者８人,取其外周血,分离单核细胞（ＰＢＭＣ）,提取ＲＮＡ,用巢式ＲＴＰＣＲ扩增ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ并测定血清中ＴＧＦ－β１和ＰⅢＰ的水平。结果：分析表明患者     

大鼠肝Ito细胞的体外培养及肝素对其抑制作用的观察

用胶原酶，ＰｒｏｎａｓｅＥ灌流消化肝脏及Ｎｙｃｏｄｅｎｚ等密度离心成功地分离正常大鼠肝Ｉｔｏ细胞（ＮＩｔｏ）及肝纤维化大鼠Ｉｔｏ细胞（ＣＩｔｏ），并培养传代。刚分离的细胞在紫外线照射下可见很快消退的自发荧光；胞质内有大量脂滴，随培养时间延长，胞质内脂滴减少，微丝增加，内质网扩张、增多；结蛋白（Ｄｍ）免疫组化染色阳性。上述结果证实，分离细胞为Ｉｔｏ细胞。经观察，ＣＩｔｏ比ＮＩｔｏ生长快，体积大，表达α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ），Ⅰ及Ⅳ型前胶原能力强。肝素在体外不但抑制Ｉｔｏ细胞的生长，而且抑制其表达α－ＳＭＡ，Ⅰ及Ⅳ型前胶原。     

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中Ⅰ、Ⅲ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的表达

目的：探讨增生性瘢痕（Ｈ）和瘢痕疙瘩（Ｋ）组织中Ⅰ、Ⅲ型前胶原及ＴＧＦ－β１基因表达改变的相互关系及临床意义。方法：总ＲＮＡ抽提试剂盒抽提总ＲＮＡ,斑点杂交检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原及ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ稳态水平的改变。结果：Ｈ和Ｋ组织中ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ（１．１９７±０．２３７,１．２０４±０．２４３）表达均高于正常瘢痕和正常皮肤（０．３２７±０．０８１,０．３３１±０．０７８）,Ｐ＜０．０１;Ｋ选择性地Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ表达增强,而Ｈ组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原ｍＲＮＡ表达均增强,导致ＫⅠ、Ⅲ前胶原ｍＲＮＡ比值明显高于Ｈ（８．１６４±０．３００,１．６６６±０．２０１,Ｐ＜０．０１）。结论：Ｋ和Ｈ组织中胶原蛋白基因表达类型及强度不同,提示在Ｋ和Ｈ发生发展中具有不同的分子机理：ＴＧＦ－β１在增生性瘢痕疙瘩的发病机理中具有不同的分子机理;ＴＧＦ－β１在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的发病机理中具有一定作用。     

创伤后增生性疤痕中α1（Ⅰ）及（Ⅲ）型前胶原基因片段的克？…

目的 胶原蛋白是构成细胞外基质的主要组分之一,它的过量沉积是创伤后增殖性瘢痕形成的原因之一,本实验的目的就是要克隆出疤痕中α１（Ⅰ）型及（Ⅲ）型前胶原基因片段并进行鉴定。方法 本研究根据α１（Ⅰ）型及（Ⅲ）型前胶原基因的核苷酸序列分别设计３条引物,从瘢痕组织中经ＲＴ－ＰＣＲ分别扩增Ⅰ及Ⅲ型前胶原基因的第２外显子（Ｅｘｏｎ２）区域的基因片段（ⅠＦ２,ⅢＦ２）,克隆到Ｔ载体（ｐＧＥＭ－Ｔｖｅｃｔｏｒ）     

肝纤维化血清指标与慢性肝炎组织炎症及纤维化的相关性

目的 探讨血透明质酸（ＨＡ）、Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）、层粘蛋白（ＬＮ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ－Ｃ）等肝纤维化血清学指标与慢性肝炎肝组织炎症活动度及纤维化程度的相关性。方法 ２７８例慢性肝炎患者经肝脏活检行常规病理检查,肝活检前采血检测血清ＨＡ、ＰＣⅢ、ＬＮ、Ⅳ－Ｃ水平。结果 肝组织纤维化程度与炎症活动度呈正相关。ＨＡ可反映中度以上慢性肝炎炎症活动及肝纤维化,并与之呈正相关;肝脏存在纤维化时ＬＮ水平升高,与肝纤维化程度呈正相关;ＰＣⅢ、Ⅳ－Ｃ水平升高与炎症活动度有关。结论 血清ＨＡ、ＰＣⅢ、ＬＮ、Ⅳ－Ｃ水平均不同程度反映肝组织纤维程度,可作为血清肝纤维化检测指标;ＨＡ更能反映肝硬化发展趋势。     

Ⅰ型Ⅲ型前胶原mRNA在风心病心肌中表达的意义

目的 探讨风湿性心脏病心肌细胞Ⅰ，Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达和定位，以及胶原改建对心功能的影响。方法 用人Ⅰ，Ⅲ型前胶原ｃＤＮＡ探针，对３２例我湿性二尖瓣乳头肌进行分子原位杂交并进行图像分析。结果 病变心肌间质中Ⅰ，Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ阳性表达明显增多，１型较正常成年心肌中增高１．６７倍，Ⅲ型增高４．３６倍；病变心肌细胞核内出现Ⅰ，Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ阳性表达，胎儿心肌亦有类似表达，Ⅰ，Ⅲ型前胶原ｍＲＮ     

IL-6、TNF-α对小鼠早期肝纤维化的影响

目的 观察治疗、预防实验性肝纤维化细胞因子及前胶原的变化及其对早期肝纤维化的影响。方法 用血吸虫尾蚴感染小白鼠造成实验性肝纤维化模型，分成对照组、治疗组、预防组、分别灌胃给药，４５ｄ后断送不取血分离血清。用放免法测定以上三组鼠血清白细胞介素６（ＩＬ－６），肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、Ⅰ型前胶原（ＰＣ－１）、Ⅲ型前胶原（ＰＣ－Ⅲ）含量。结果 与对照组比较治疗组ＩＬ－６，ＴＮＦ－α，ＰＣ－Ⅲ含量均     

胶原Ⅳ型血清检测对肝纤维化的诊断价值

目的研究Ⅳ型胶原的血清检测对肝纤维化的诊断价值。方法采用酶标方法对各种肝病进行Ⅳ型胶原的检测。结果血清Ⅳ型胶原水平以慢性肝炎（ＣＨ）、肝硬化（ＬＣ）及肝细胞癌（ＨＣＣ）为最高，分别为（２５０±７８）、（２７８±９５）及（２６８±８９）ｎｇ／ｍｌ。急性肝炎（ＡＨ）及脂肪肝（ＦＬ）的Ⅳ型胶原无明显变化。肝组织纤维化程度与Ⅳ型胶原的血清水平也有一定关系，Ｓ２期有所提高，以Ｓ３～Ｓ４期为最高。Ⅳ型胶原水平与前白蛋白（ＰＡ）水平呈负相关（ｒ＝０．５３２１，Ｐ＜０．０１），但与ＡＬＴ及Ｓｂ无关。结论Ⅳ型胶原血清水平能较好地反映肝纤维化的程度，为早期诊断肝纤维化提供了一个敏感的指标。