甲状旁腺素和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响

目的:研究甲状旁腺素(PTH)和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响?方法:使用正常?高钙低磷或低钙低磷饮食喂养2月龄野生型(WT)和PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)小鼠4周,测定血清钙?磷?PTH和1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]水平,并利用RT-PCR方法检测肾1α-羟化酶[1α(OH)ase]基因表达水平?结果:正常饮食PTH-/-小鼠表现为低钙血症?高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达上调,而血清1,25(OH)2D3水平则降低?与正常饮食相同基因型小鼠相比,高钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平降低,肾1α(OH)ase基因表达下调?高钙低磷饮食矫正了PTH-/-小鼠的低钙和高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达仍高于WT小鼠,而血清1,25(OH)2D3水平与WT小鼠无差异?与正常饮食相同基因型小鼠相比,低钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平明显升高,肾1α(OH)ase基因表达明显上调?低钙低磷饮食PTH-/-小鼠血清钙严重降低,血清磷仍然较高,肾1α(OH)ase基因表达和血清1,25(OH)2D3水平均较WT小鼠为低?结论:钙磷饮食能够通过PTH依赖性和PTH非依赖性的方式调节活性维生素D的合成?     

1-α羟化酶基因敲除导致小鼠牙本质形成和前期牙本质矿化障碍

目的:探讨1,25二羟维生索D在小鼠牙本质形成和前期牙本质矿化的作用.方法:利用组织学.免疫组织化学和RT-PCR比较分析了6周龄野生型和1-α羟化酶基因敲除小鼠牙本质形成和矿化的差异.结果:与野生型小鼠相比.1-α羟化酶基因敲除小鼠的牙量、I型胶原和骨钙素在牙本质的沉积和骨钙素在成牙本质细胞表达均明显降低.而前期牙本质则明显增加.结论:1,25二羟维生素D在小鼠牙本质形成和前期牙本质的矿化过程中起重要作用.     

甲状旁腺素在胸腺的表达及血钙对其表达的调节

目的:为了证实PTH基因在胸腺的表达,明确PTH蛋白在胸腺组织的定位以及胸腺来源的PTH是否受到血钙水平改变的调节.方法:使用RT-PCR、real-time PCR和免疫组织化学的方法比较分析同窝2周龄PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)和野生型(WT)小鼠以及1-α羟化酶基因敲除纯合子[1α(OH)ase-/-]和野生型(WT)小鼠的甲状旁腺和胸腺的PTH表达差异.结果:PTH-/-小鼠的甲状旁腺和胸腺无PTH表达:同窝WT小鼠甲状旁腺和胸腺均有PTH表达,但胸腺表达水平较甲状旁腺低.PTH在胸腺上皮细胞表达,而不在胸腺淋巴细胞表达.1α(OH)ase-/-小鼠表现为低钙血症.与正常血钙的WT小鼠相比,PTH基因和蛋白的表达水平在1α(OH)ase-/-小鼠胸腺组织中均明显升高.结论:胸腺组织不仅是产生PTH的辅助器官,而且其PTH表达也受到血钙水平的调节.     

女贞子对去卵巢大鼠钙代谢及维生素D依赖型基因表达的影响

目的研究补肾中药女贞子对去卵巢大鼠钙代谢及维生素D依赖型基因表达的影响。方法大鼠去卵巢手术处理4周后,ig给药治疗14周。血清、尿液及粪便中钙水平采用比色法测定。RT-PCR技术分析小肠及肾脏基因表达。结果大鼠去卵巢后体内钙流失显著增加,表现在血钙下降,尿钙及粪钙排泄增加。女贞子可以有效防止尿钙及粪钙排泄增加,并恢复血钙水平。RT-PCR分析表明雌二醇和女贞子都可以抑制去卵巢引起的小肠维生素D受体(VDR)mRNA表达下降。女贞子对肾脏25-羟基维生素D 1-羟化酶(1-OH ase)及25-羟基维生素D 24-羟化酶(24-OH ase)mRNA无明显作用,但却可以提高肾脏钙结合蛋白-9k(C aBP-9k)及钙结合蛋白-28 k(C aBP-28k)的基因表达。结论女贞子能够改善雌激素缺乏所引起的钙失衡状态,主要是通过提高小肠对活性维生素D的敏感性及加强肾脏对钙的重吸收而发挥作用的。     

胃泌素对大鼠小肠上皮1,25（OH）2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白的影响

目的探讨胃泌素对大鼠小肠上皮1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白(1,25D3-MARRS结合蛋白)表达的影响。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和免疫印迹法,检测胃泌素、奥美拉唑处理后的SD大鼠小肠中1,25D3-MARRS结合蛋白的表达情况与对照组的差异,并测大鼠血清中钙、磷离子的浓度变化。结果大鼠小肠上皮细胞中1,25D3-MARRS结合蛋白分布于胞核、胞浆和胞膜。胃泌素、奥美拉唑均引起大鼠小肠组织1,25D3-MARRS结合蛋白的mRNA和蛋白两个水平表达增高(P<0.05),但其作为一个促小肠钙磷吸收的蛋白,无明显增高血清钙磷浓度的作用(P>0.05)。结论 1,25D3-MARRS结合蛋白作为一个广泛分布的多功能蛋白,受胃泌素的调节,在消化道相关疾病具有很高的研究价值及临床应用前景。     

胆钙化醇在治疗3期和4期慢性肾脏疾病患者维生素D不足的临床研究

<正>维生素D是维持血清钙稳态和骨骼健康的重要元素,维生素D的主要循环形式是25-羟基维生素D,其需要通过肾脏的1α-羟化酶活化成具有代谢活性的1,25-二羟维生素D。甲状旁腺激素(PTH)在人体处于低钙水平时可增加肾1α-羟化酶的活性[1]。当慢性肾脏疾病(CKD)导致肾1α-羟化酶降低时,PTH代偿性升高,从而导致肾性骨营养不良,增加心血管疾病的风险[2]。研究显示,高达86%的CKD患者维生素D不     

活性维生素D缺乏导致脑内加压素表达上调和脑血管功能损伤

目的:本研究探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]缺乏在小鼠高血压发病的病理进程中对脑内加压素(VP)表达和脑血管功能的影响?方法:运用尾动脉压体积描记法?免疫组织化学?离体微血管压力肌动描记法分析和比较2月龄25羟化维生素D 1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase-/-]小鼠和同窝野生型小鼠的平均动脉血压?脑内VP的表达和脑微血管反应性的变化?结果:1α(OH)ase-/-小鼠出现高血压表型,下丘脑室旁核和视上核VP表达都高于同窝野生型小鼠,大脑后动脉对乙酰胆碱的舒血管反应和对一氧化氮合酶抑制剂L-硝基-精氨酸的缩血管反应较对照组显著降低?结论:1,25(OH)2D3在高血压发病过程中对脑内神经内分泌和脑血管功能起重要调控作用?     

维生素D在临床治疗中的新认识

维生素D为类固醇类衍生物,具有抗佝偻病的作用,其与健康有关的主要成员有维生素D2和维生素D3.人皮下含有7-脱氢胆固醇,是维生素D3原,经紫外线照射后转化为维生素D3,维生素D进入人体后在肝脏形成25-（OH）D3,至肾脏经1α羟化酶作用,转化为1,25-（OH）2D3,是活性最强的维生素D代谢衍生物.近年来,维生素D被越来越多地证实具有广泛的生物学作用,除对钙、磷和骨的作用外,还参与调节肌力、调节平衡功能、介导免疫反应、抑制细胞增殖与分化以及调节多种内分泌腺激素.本文就相关研究报道汇总分析,为临床治疗提供参考.     

维生素D与肥胖的研究进展

近年的研究显示,血清维生素D水平与肥胖、糖尿病、代谢综合征以及心血管疾病有密切关系[1-4].本文就维生素D与肥胖的研究进展综述如下.1 维生素D的代谢与生物学功能维生素D是一种脂溶性维生素,其来源主要分为内源性及外源性两种.人体皮肤含有7-脱氢胆固醇,经紫外线照射转化成维生素D原,然后再进一步转化为维生素D[5].一些食物如动物肝脏、蛋黄、海鱼等是维生素D的重要来源.维生素D无生物活性,必须首先在肝脏经25-羟化酶作用转化成25-羟维生素D[25(OH)D],然后在近端肾小管1α-羟化酶的催化下进一步转化为1,25-二羟维生素D[1,25(OH)2D][6].1,25(OH)2D是活性最强的维生素D代谢衍生物,通过作用于小肠、骨骼和肾脏,调节钙、磷代谢,维持体内钙、磷平衡,调节骨重建.维生素D通过与细胞质内维生素D受体(VDR)结合形成激素-受体复合物,然后与细胞核的维生素D反应元件相结合,激活或抑制含有维生素D反应元件的基因,从而发挥其生物学作用[7].     

1,25二羟基维生素D_3联合5-氟尿嘧啶对人食管癌Eca-109细胞移植瘤的影响

目的探讨1,25二羟基维生素D3、5-氟尿嘧啶单独或联合作用对人食管癌Eca-109细胞裸鼠移植瘤胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的影响。方法体外培养人食管癌Eca-109细胞,BALB/c裸小鼠皮下接种荷瘤后随机分为对照组(A)、1,25二羟基维生素D3组(B)、5-氟尿嘧啶组(C)、联合用药组(D),2.5μg/kg 1,25二羟基维生素D3、25 mg/kg 5-氟尿嘧啶单独或联合腹腔注射,对照组用等体积生理盐水腹腔注射,观察瘤体生长情况,运用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中IGFBP-3蛋白表达,全自动生化分析仪检测血清钙离子水平、Von kossa染色观察肾脏钙沉积情况。结果与A组比较,B、C、D组移植瘤生长缓慢,体积较小,IGFBP-3阳性蛋白染色较深,且表达量较多(P0.05);而D组较B、C组移植瘤IGFBP-3蛋白表达显著升高(P0.05)。B、C、D组血清钙离子水平较A组稍有升高,但肾脏组织切片Von kossa染色未见钙沉积。结论 1,25二羟基维生素D3、5-氟尿嘧啶均能抑制移植瘤生长,且联合用药效果更为显著,可能与上调移植瘤组织IGFBP-3蛋白表达有关。肾脏Von kossa染色未见钙沉积。     

PTD-Calbindin D28K融合蛋白的表达、纯化及其穿膜功能的鉴定

目的 构建融合蛋白PTD－Calbindin D28K(CaBP28)的表达质粒，并进行诱导表达、纯化，在体外初步鉴定其跨膜转运功能。方法提取大鼠脑组织总RNA，反转录后用聚合酶链反应(PCR)法扩增编码CaBP28的全长cDNA序列，重组入pET-32a及含有PTD的pTrans Vector表达载体中，测序鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3)，构建重组体的表达菌株。IPTG诱导表达后，以NTA-Ni亲和层析柱进行分离纯化，SDS-PAGE以及Western blot鉴定。纯化的CaBP28及PTD-CaBP28用FITC标记，分别以一定的浓度孵育体外培养的cos7细胞，最后荧光显微镜下观察两者在细胞中的分布情况，并用流式细胞仪(FCM)做定量分析。结果成功地构建了含有及不含有PTD的CaBP28表达载体，插入片断。783bp，表达产物相对分子质量分别约30000、50000，经Wetern blot鉴定，与抗CaBPD28K抗体均有特异性反应。孵育培养的cos7细胞后，CaBP28-FITC仅少量吸附于细胞膜表面，而PTD-CaBP28-FITC则分布于胞质内；FCM定量分析发现，细胞荧光强度随着目的蛋白的孵育浓度或孵育时间增加而增加，并且孵育时间为1h时荧光达到最强。结论重组PTD-CaBP28具有良好的细胞穿膜功能。     

谷氨酸毒性损伤致PC12细胞NMDAR与CB表达的变化

目的 探讨谷氨酸毒性损伤后PC12细胞NMDAR与CB表达的变化及意义。方法 建立谷免氨酸毒性损伤模型后，应用免疫组化及流式细胞仪的方法，定位、定量观测PC12细胞NMDAR与CB表达的变化。结果 NMDAR表达于胞膜上，谷氨酸致其表达增强，CB表达于胞浆中，谷氨酸致其表达减弱，在4h时相较1h略有恢复。结论 NMDAR与CB在神经细胞继发性损伤中可能起着重要作用。     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度、Calbindin-D28K和calpain基因的变化

目的:观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度、Ca2+调节蛋白(Calbindin-D28K,D28K)和Ca2+激活蛋白(calpain)基因变化,以探讨K562细胞凋亡机制.方法:常规培养细胞24h,20 μmol/L辛伐他汀处理K562细胞48 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率和Ca2+浓度,PCR技...     

K_（562）细胞及K_（562）／ADM耐药细胞内cAMP及cGMP含量的测定

测定正常人淋巴细胞内环磷腺苷（ｃＡＭＰ）、环磷鸟苷（ｃＧＭＰ）含量和人红白血病细胞株（Ｋ５６２）及其耐阿霉素细胞株（Ｋ５６２／ＡＤＭ）的增殖状况和细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量。结果Ｋ５６２与Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞内ｃＡＭＰ含量均低于正常人淋巴细胞内ｃＡＭＰ，但无显著差异，Ｋ５６２与Ｋ５６２／ＡＤＭ之间细胞内ｃＡＭＰ的含量有显著差异，ｃＧＭＰ含量均未见差异。Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞的增殖状况与ｃＡＭＰ含量呈负相关（ｒ＝－０．５８２３，Ｐ＜０．０５），加入逆转耐药的药物潘生丁、维拉帕米后，其增殖速度下降且差异显著（Ｐ＜０．０５），ｃＡＭＰ含量呈上升趋势；Ｋ５６２细胞也有此改变，但两种药物对两种细胞的影响程度不同。     

胶质细胞系源性神经营养因子保护帕金森模型大鼠黑质多巴胺能神经元机制的研究

目的 探讨胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line-derived neumtrophic factor，GDNF）在保护黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元过程中，钙结合蛋白D28K（calbindin 28K，CB）和星形胶质细胞的可能作用。方法 采用大鼠右侧纹状体内注射6-羟多巴胺（6-OHDA）制备帕金森病（Parkinson disease，PD）模型。注射后第7天，根据行为学分析筛选模型鼠，将模型鼠随机分为3组：空白对照组，PBS组（右侧黑质注射pm）和GDNF组（右侧黑质注射GDNF）。空白对照组动物分别于6-OHDA注射后第7天、14天、21天和28天时，PBS组和GDNF组动物分别于6-OHDA注射后第14天、21天和28天时，行黑质节段连续冠状石蜡切片，以酪氨酸羟化酶（tyrosine hydmxylase．TH）、CB和胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrous acid protein，GFAP）免疫组织化学染色，分别显示DA能神经元、含cB神经元和星形胶质细胞，光镜观察以及细胞计数，统计学处理。结果 ①TH免疫组织化学染色结果：6-OHDA注射后第28天，GDNF组大鼠右侧黑质rrH表达阳性神经元数量显著多于空白对照组和PBS组；②CB免疫组织化学染色结果：6-OHDA注射后第7天，空白对照组大鼠右侧黑质尚可观察到cB表达阳性神经元，之后的时间点空白对照组和PBS组均观察不到，而GDNF组大鼠右册黑质处在所检测的各时间点均可观察到cB表达阳性神经元；③GFAP免疫组织化学染色结果：空白对照组在6-OHDA注射后第7天时有少量的GFAP表达阳性细胞，于注射后第14天时GFAP表达阳性细胞数达高峰，之后逐渐减少，注射后第28天时已基本检测不到；PBS组GFAP表达阳性细胞数量与空白对照组的表现一致，而GDNF组大鼠黑质在所检测的各时间点均可观察到大量反应性增生的星形胶质细胞。结论 CB和（或）星形胶质细胞可能参与GDNF保护并促进PD模型大鼠黑质DA能神经元存活的过程。     

华法令抗凝治疗初期依赖维生素K凝血因子活性的变化

目的:为探讨口服华法令抗凝治疗初期依赖维生素K凝血因子活性的变化规律及与凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)的相应关系。方法:选择20例机械瓣膜置换术的患者,在术后1 d开始服用华法令抗凝,分别于术前及术后1、2、3、5、9、13 d测定其血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的活性及PT、APTT值。动态观察FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ活性及PT、APTT在其中的变化。结果:FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ活性术后第1 d显示低于术前组(P<0.05或P<0.01),而FⅨ:C活性明显高于服药前组(P<0.01);口服华法令后第1 d FⅦ:C明显低于服药前(P<0.05);FⅩ:C活性明显高于服药前(P<0.01);FⅡ:C、FⅨ:C从数值上看高于服药前但无统计学意义(P>0.05)。口服华法令后第2-4 d各凝血因子活性逐渐下降,与前一时间段比较差异均呈显著性(P<0.05或P<0.01))。服药后第8 d由于药物剂量的调整FⅦ:C、FⅨ:C有所回升。到服药后第12 d各凝血因子活性基本保持稳定。PT值随FⅦ:C的波动而随之相应改变。而APTT值服药后第1 d与术前比较无差异外(P>0.05),其余时间段均明显高于术前组(P<0.01)。结论:在口服华法令抗凝治疗初期,PT、APTT不能准确反映各凝血因子活性变化的水平,同时检测FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ活性,可及时了解患者的凝血状态是防止出血和栓塞发生的有效     

早期慢性肾衰大鼠残余肾维生素D受体和28ku钙结合蛋白的表达

目的：１,２５（ＯＨ）２Ｄ３、钙代谢紊乱是慢性肾衰继发性甲状旁腺功能亢进症（ＳＨＰＴ）的主要原因,它们分别与维生素Ｄ爱体（ＶＤＲ）、２８ｋｕ钙结合蛋白（ＣａＢＰ－Ｄ２８ｋ）结合而发挥作用,通过观察５／６肾切除大鼠残余肾ＶＤＲ、ＣａＢＰ－Ｄ２８ｋ表达,探讨其在早期ＳＨＰＴ中的作用。方法采用免疫组化ＡＢＣ法观察５／６肾切除大鼠残余肾ＶＤＲ、ＣａＢＰ－Ｄ２８ｋ蛋白阳性表达。结果慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）大     

1,25-(OH)2D3对白血病细胞株K562和SHI-1 ppGalNAcTs表达的影响

目的：探讨在维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs表达的变化。方法：应用RT-PCR法研究在不同浓度维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs表达的变化。结果1,25-(OH)2D3(10^-6～10^-8mol／L)可分别上调K562细胞株ppGalNAcT2、T4、T5的表达。但在SHI-I细胞株,随着1,25-(OH)2D3浓度的增加ppGalNAcT1表达增加、1、3表达没有变化、T4表达减少。结论：白血病细胞株K562与SHI-1 pp-GalNAcTs的表达不同。在不同浓度维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1ppGalNAcTs表达的变化也不同,说明不同ppGalNAcTs对1,25-(OH)2D3的反应不同。     

血液灌流联合活性维生素D冲击治疗继发性甲状旁腺功能亢进的临床观察

[目的]观察血液灌流(HP)联合活性维生素D冲击疗法对维持性血液透析患者继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)的疗效。[方法]对17例SHPT在常规血液透析基础上采用HA型树脂血液灌流联合活性维生素D冲击疗法,前后自身对照,观察治疗前后血清全段反应性甲状旁腺激素(iPTH)、血钙、血磷、血红蛋白及临床症状等变化情况。[结果]治疗后患者iPTH显著下降(P0.01),血钙上升,血磷下降,血色素上升,临床症状好转。[结论]血液灌流(HP)联合活性维生素D冲击疗法对治疗继发性甲状旁腺功能亢进疗效满意。     

表没食子儿茶素没食子酸酯增强阿霉素抗白血病作用的体外研究

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对阿霉素抗白血病的增效作用。方法：用M，ITr法测定单用阿霉素及与EGCG联合应用时对人白血病K562细胞的增殖抑制作用；以流式细胞术分析联合用药前后细胞内阿霉素浓度的变化；以免疫细胞化学方法检测联合用药前后细胞bax／bcl-2比值的变化。结果：联合应用EGCG能够降低阿霉素对K562细胞的IC50、增加细胞内阿霉素浓度及细胞bax／bcl-2的比值，并具有剂量依赖性。结论：EGCG能够增强阿霉素对K562细胞的抗肿瘤活性，其作用机制可能是通过增加细胞内阿霉素浓度及增加细胞bax／bcl-2比值。