脂质体转染survivin siRNA对A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨脂质体转染survivin siRNA 对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响.方法:人工合成抑制survivin基因的siRNA片段,通过脂质体转染到A549细胞内,倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;用四氮唑盐(M1Tr)法观察转染后24h,48h,72h对细胞增生的影响;流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数;RT-PCR检测survivin mRNA的表达.结果:转染siRNA后的A549细胞,细胞增殖受到显著抑制,细胞明显出现凋亡,survivin基因mRNA表达显著下降.结论:应用RNA干扰靶向抑制survivin基因可以显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡.survivin可能成为肺癌基因治疗的一个新靶点.     

白花蛇舌草注射液诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制研究

目的：研究白花蛇舌草注射液（HDI）对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法不同浓度HDI作用于A549细胞72h,CCK-8法检测细胞增殖,AnnexinV/PI双染与流式细胞术检测细胞凋亡,Westernblot检测Bcl-2和survivin蛋白的表达。结果随着HDI浓度的增加,A549细胞增殖明显被抑制,细胞凋亡显著增加,凋亡相关蛋白Bcl-2和survivin的表达水平降低。结论HDI可促进A549细胞凋亡,其机制可能与减少凋亡相关基因Bcl-2和survivin的表达有关。     

益肺箍消方对肺癌细胞株A549细胞体外生长的抑制作用

目的 观察中药益肺箍消方对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及survivin基因表达的影响.方法 用不同浓度(50、100、150、200mL/L)益肺箍消方处理A549细胞,以未经药物处理细胞作对照(对照组),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察细胞增殖活性的差异,流式细胞仪观察细胞凋亡水平的差异,逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察凋亡相关蛋白Survivin mRNA表达水平的变化,Western-blot技术检测survivin分子蛋白表达水平.结果 益肺箍消方对人肺腺癌细胞株A549增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性.随着益肺箍消方浓度的增加,细胞的凋亡水平增大,survivin mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05).结论 益肺箍消方可抑制人肺腺癌A549细胞株的增殖,诱导细胞凋亡,抑制survivin mRNA和蛋白的表达,可能是其临床治疗肺癌的重要药效机制之一.     

siRNA联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达的影响。方法 在肺癌A549细胞中转染survivin基因的siRNA,分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blotting方法检测survivin基因mRNA和蛋白的表达。将肺癌A549细胞分为单纯放射组、单纯转染组、转染+放射组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖情况,采用CCK8测细胞生长曲线。结果 siRNA能抑制肺癌细胞survivin基因mRNA和蛋白的表达。siRNA联合预照射较单纯转染和单纯放射能显著增加细胞凋亡率,降低细胞的集落形成,抑制细胞生长。结论 预照射可以增强siRNA对肺癌细胞survivin基因的抑制作用。     

姜黄素对肺腺癌A549细胞P13K/Akt/Bcl-2信号通路的作用

目的：研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡和P13K/Akt/Bcl-2信号通路的影响。方法：采用细胞计数法绘制肺腺癌A549细胞生长曲线,MTF法测定姜黄素对肺腺癌A549细胞抑制率。将不同浓度姜黄素作用于肺腺癌A549细胞24h后,显微镜下观察细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡率;免疫组化法检测P13K/Akt/Bcl-2蛋白表达。结果：姜黄素能够抑制肺腺癌A549细胞增殖,且呈一定剂量和时间依赖性;随着药物浓度上升细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;P13K、Akt和Bcl-2蛋白表达明显下降（P〈0．05）。结论：姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖具有抑制作用,其作用可能是诱导细胞凋亡及抑制P13K/Akt/Bcl-2信号通路来实现的。     

磁性纳米四氧化三铁协同顺铂作用于肺癌A549细胞的初步研究

目的: 检测磁性纳米四氧化三铁(Nano-Fe3O4)联合顺铂(DDP)作用于人源肺腺癌细胞A549后相关凋亡抑制基因、耐药蛋白的表达,研究其增强化疗敏感度的机制.方法: 用MTT法检测Nano-Fe3O4聚合DDP对A549细胞增殖凋亡的影响;流式细胞术分析凋亡细胞比例;RT-PCR检测抗凋亡基因bcl-2、survivin、ERCC1表达水平变化;蛋白印迹法分析耐药蛋白MRP及其表达率.结果: 25 μg·ml-1 Nano-Fe3O4能有效增强DDP的细胞毒作用,提高A549的凋亡率;与单独用药组相比,Nano-Fe3O4联合DDP组的抗凋亡基因bcl-2、ERCC1和耐药蛋白MRP表达下调,差异具有统计学意义(P＜0.05);survivin基因表达未见明显改变.结论: Nano-Fe3O4联合DDP可通过下调抗凋亡基因bcl-2、ERCC1及耐药蛋白MRP的表达,增强化疗药物敏感度.     

人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR的建立及小白菊内酯逆转耐药机制研究

目的建立人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR,研究其耐药机制,探讨小白菊内酯(PAR)逆转A549/GR耐药的机制。方法以吉非替尼为诱导剂,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,采用大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR。采用细胞毒实验(MTT)法测定细胞耐药指数,免疫印迹法(Western blotting)检测细胞耐药相关蛋白表达水平,进一步通过MTT法检测PAR对A549/GR的逆转倍数,Annexin V-FITC双标法检测PAR的促凋亡作用,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果所建立的人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR耐药指数为18.7。A549/GR细胞中MDR和ABCG2耐药相关蛋白表达水平较A549升高。MTT结果显示PAR对耐药细胞A549/GR的逆转倍数为8.66。Annexin V-FITC凋亡检测结果显示PAR能有效促进A549/GR细胞凋亡,Western blotting检测显示PAR能有效降低survivin、Bcl-2两种抑制凋亡相关蛋白的表达。结论成功建立了人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR;PAR通过促进A549/GR细胞凋亡有效逆转其耐药。     

β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用不同浓度的β-榄香烯干预A549和H460细胞后,台盼蓝拒染试验和MTT试验检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测A549细胞凋亡率,Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:不同浓度β-榄香烯能抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖,且呈剂量与时间依赖性,β-榄香烯干预后的A549细胞凋亡率明显升高,其相关抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达下调。结论:β-榄香烯可抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖及诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2和Bcl-xl有关。     

EGCG抑制肺癌细胞增殖及其机制的研究

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG) 对人肺癌细胞增殖的影响及机制. 方法:培养肺癌细胞A549,加入EGCG制作细胞抑制曲线; EGCG作用于人肺癌A549细胞株前后通过Hoechst染色检测细胞凋亡. RT-PCR 及Western Blot印迹法研究survivin的mRNA 及蛋白表达的变化. 结果:EGCG可明显抑制A549细胞的增殖, 60 mg/L EGCG作用后,细胞出现明显的凋亡. 同时肺癌细胞中survivin mRNA 和蛋白表达减少. 结论:EGCG可抑制肺癌细胞的增殖,这可能与survivin表达降低有关.     

NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:研究NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制。方法:通过实验细胞培养、MTT试验、细胞形态变化、A549细胞survivin的mRNA表达、A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达来对NS398诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制进行分析研究。结果:NS398对A549细胞增殖的影响受到浓度的影响,NS398浓度越大,A549细胞增殖抑制率越大;A549细胞在不同浓度的NS398试剂中表现出不同的细胞形态;survivin的mRNA表达随着NS398浓度的增加而减弱,A549细胞p-AKT与survivin的蛋白表达随着NS398浓度的增加而增强。结论:NS398对A549细胞的凋亡具有诱导作用,使肿瘤生长受到抑制,其抗肿瘤机制与AKT磷酸化的抑制、survivin蛋白表达的下调有关。     

厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549的作用.方法:survivin siRNA转染、厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察对A549细胞的增殖抑制作用,免疫组化染色法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况.结果:survivin ...     

靶向IGF-1R的siRNA增强肺癌细胞对Trail诱导凋亡敏感性的研究

目的 研究IGF-1R特异RNA干扰后肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的改变以及其对Trail的敏感性。 方法 化学合成IGF-1R特异siRNA转录模板,与表达载体连接,转染大肠杆菌扩增后提取质粒,酶切鉴定和DNA测序分析。转染A549细胞后筛选稳定表达IGF-1R-siRNA细胞株,FQ RT-PCR、Western blot和免疫组织化学检测IGF-1R基因表达。MTT法和流式细胞仪测定Trail作用前后转染和非转染A549细胞增殖活性和凋亡率。 结果 成功构建IGF-1R-siRNA表达载体并筛选出稳定表达IGF-1R-siRNA单克隆细胞。和空白对照相比IGF-1R蛋白和IGF-1RmRNA表达分别下降79.01%(0.17±0.06 vs.0.81±0.15)(P＜0.01)和76.05%(1.36±0.26 vs.5.68±0.45)(P＜0.01)。免疫组织化学显示IGF-1R表达降低。Trail作用于IGF-1R-siRNA的A549,细胞增殖速度降低(P＜0.05);凋亡率明显增加(P＜0.01)。 结论 IGF-1R-siRNA表达载体具有RNA干扰作用。IGF-1R表达下降后A549细胞增殖速度减慢,对Trail诱导的细胞凋亡敏感性增加。      

Inhibition of survivin expression and mechanisms of reversing drug-resistance of human lung adenocarcinoma cells by siRNA

Background Survivin, a member of the inhibitor of apoptosis protein （IAP） family, overexpresses in tumor cells and not expresses in terminally differentiated adult tissues. This study aimed to investigate the effects of survivin-specific siRNA on cell proliferation, apoptosis and chemosensitivity to cisplatin in vitro and in vivo and explore the mechanisms about decreasing expression of survivin in reversing cancer cells resistance to chemotherapeutic drug.Methods Survivin-specific siRNA was transfected into A549/DDP cells. The expression of survivin and lung resistance-related protein （LRP） mRNA levels were determined by RT-PCR, chemosensitivity of A549/DDP （cisplatin）cells to cisplatin was determined by MTT assay, and apoptosis and cell cycle were determined by flow cytometry （FCM）.The protein expression levels of survivin, LRP, cyclin-D1, caspase-3 and bcl-2 were determined by Western blotting analyses. The effect of survivin siRNA inhibition on tumor growth was studied in athymic nude mice in vivo.Results Survivin-specific siRNA efficiently down-regulated survivin expression. The cell cycle was arrested at G2/M phase, and apoptosis was obviously found. Inhibition of survivin expression could make the IC50 and drug-resistant index of cisplatin decrease, and enhance the cancer cells sensitivity to cisplatin. After transfection by survivin-specific siRNA, expression of LRP and cyclin-D1 were downregulated, caspase-3 expression was upregulated, bcl-2 expression had no obvious change. The animal experiment confirmed knockdown of survivin could inhibit the tumor growth.Conclusions Survivin-specific siRNA can efficiently suppress the expression of survivin, increase apoptosis, inhibit cells proliferation and enhance the chemosensitivity to cisplatin in vitro and in vivo. Suppression of survivin expression helping to reverse drug-resistance may have relationship with downregulation of LRP and upregulation of caspase-3.Anti-tumor strategies based on the inhibition of survivin may be useful in targeting lung adenocarcinomas.     

siRNA干扰Pokemon基因影响A549细胞增殖的实验研究

目的 研究siRNA干扰Pokemon基因对肺腺癌A549细胞增殖抑制效应的变化.方法 专业设计合成3条针对Pokemon的siRNA,分别转染A549细胞后,RT-PCR检测转录水平Pokemon mRNA表达的变化,筛选出其中最高效的1条siRNA;用MTT法检测该siRNA干扰Pokemon对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞技术检测该siRNA干扰Pokemon对A549细胞凋亡的影响.结果 3条siRNA均成功转染A549细胞,倒置荧光显微镜下观察细胞呈圆绿色.RT-PCR结果显示有2条siRNA使细胞中Pokemon的mRNA表达降低(P＜0.05).MTT法结果显示siRNA干扰Pokemon后对A549细胞增殖有抑制作用(P＜0.05),其中48 h抑制效率达(24.14±1.39)％.流式细胞技术检测结果显示该siRNA干扰Pokemon可增加A549细胞的凋亡,凋亡率为14.05％.结论 应用RNA干扰Pokemon基因能够抑制A549细胞的增殖,促进A549细胞的凋亡.Pokemon基因有可能成为肺癌治疗中的一个新靶点.     

长链非编码RNA PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用

目的: 研究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用,并初步探讨其可能的调控机制。方法: 采用RNA测序（RNA-seq）技术检测人肺腺癌细胞A549及其铂类耐药细胞中lncRNA和mRNA的差异表达谱;qRT-PCR检测lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平;利用siRNA技术下调铂类耐药人肺癌细胞中PAPPA-AS1的表达,CCK-8实验检测肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性;克隆形成实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡分布;蛋白质印迹法检测Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平。 结果： 与亲代敏感细胞A549相比,lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中呈高表达;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性增强,细胞增殖活力下降,细胞凋亡率增加（P均<0.05）;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达明显升高,磷酸化PI3K、Akt和mTOR蛋白表达明显降低。结论： 下调PAPPA-AS1可以通过抑制PI3K/Akt信号通路逆转肺腺癌细胞对铂类药物的抵抗性。     

c-myc RNA干扰增强肺腺癌细胞对吉西他滨的敏感性

目的：探讨c-mycRNA干扰后肺腺癌细胞A549对吉西他滨敏感性的改变。方法：构建c-myc特异RNA小干扰（siRNA）的表达载体,转染A549细胞,G418筛选出稳定表达c-myc特异siRNA的细胞株,荧光实时定量RT-PCR和免疫印迹检测c-myc基因表达水平。吉西他滨作用于干扰有效A549细胞,分为GE＋siRNA组、GE组、siRNA组和空白对照组。每组12例,四甲基偶氮唑蓝法检测吸光度,流式细胞仪测凋亡率。结果：成功构建c-myc-siRNA表达载体。c-myc基因mRNA和蛋白表达下降71.9%和85.6%。吉西他滨作用于c-myc-siRNA细胞其吸光度在各时间点较单用吉西他滨组、单用c-myc-siRNA组以及对照组均下降（P＜0.01）,凋亡率增加（P＜0.01）。结论：c-mycRNA干扰后A549细胞的增殖减慢,对吉西他滨的敏感性增加。     

BIRC5基因沉默对人膀胱癌细胞系T24增殖抑制的研究

目的 探讨靶向抑制膀胱癌细胞系T24中BIRC5基因的表达后,该基因编码产物Survivin蛋白对膀胱癌增殖的影响.方法 将设计合成的靶向BIRC5序列的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染膀胱癌细胞系T24,应用RT-PCR技术和Western blot方法检测目的基因转录及表达水平.通过生长曲线来检测survivin基因沉默后细胞增殖的改变.结果 特异性siRNA转染后,survivin mRNA及蛋白水平均明显下降.与空白对照组相比较,转染组细胞增殖情况明显受到抑制,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 特异靶向survivin的siRNA能有效抑制survivin的表达,显著抑制细胞的增殖,为膀胱癌的临床治疗提供新方向.     

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的作用。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。用流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化。结果:榄香烯乳作用后人肺腺癌A549细胞株增殖明显受抑制,呈时间和剂量依赖性。作用24h后G2/M期比例明显升高,S期细胞比例显著下降,凋亡率增加。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞及诱导其凋亡。     

长链非编码RNA MUC5B-AS1在人肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究lncRNA MUC5B-AS1基因在肺腺癌中的表达情况及对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 利用RT-PCR、qRT-PCR检测肺腺癌细胞系中MUC5B-AS1基因的表达情况;构建MUC5B-AS1过表达载体,通过转染构建MUC5B-ASI过表达细胞系;采用CCK-8检测肺腺癌细胞的增殖情况;应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭的影响.结果 检测了MUC5B-AS1在4株肺腺癌细胞系(A549、SPCA1、H1975和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的表达情况,发现MUC5 B-AS1在H1299细胞系中表达最低,同时A549细胞系表达最高;通过转染构建MUC5B-AS1过表达H1299、A549细胞系,利用qRT-PCR检测细胞系中MUC5B-AS1基因的表达,与对照组比较,MUC5B-AS1基因在H1299、A549细胞系均升高,且有统计学差异(P ＜0.05);CCK-8检测细胞增殖,与对照组比较过表达MUC5B-AS1对H1299、A549细胞生长并无影响(P＞0.05);应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭,过表达MUC5B-AS1促进H1299、A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MUC5B-AS1可能在肺癌的迁移和侵袭发挥重要作用,但对肺腺癌细胞的增殖能力没有显著影响.     

FHL1对肺腺癌细胞株A549生物学特性的影响

 目的 研究FHL1的表达对人肺腺癌细胞株A549生物学特征的影响。方法 以FHL1 mRNA及shRNA慢病毒载体转染肺腺癌细胞株A549,并采用Western blot及RT-PCR法筛选检测稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株模型及低表达细胞株模型;运用CCK-8实验、Transwell实验、流式细胞仪、细胞集落形成实验等方法对其增殖、侵袭、凋亡及锚定非依赖性生长生物学特性进行检测评估。结果 FHL1稳定过表达及低表达组的Western blot及RT-PCR法检测显示病毒转染效果可靠稳定;CCK-8实验提示低表达组的细胞增殖情况明显高于过表达组及空白组(P=0.002 2);流式细胞仪检测提示过表达组的细胞总体凋亡率为50.48%,明显高于两个低表达组(16.41%、20.12%)及空白对照组(25.90%),差异有统计学意义(P<0.001);Transwell实验提示过表达组细胞表现出的侵袭性明显低于低表达组及空白组差异有统计学意义(P<0.001);成集落实验显示过表达组细胞株形成的集落数为28.7±6.0,明显少于两个低表达组(157.0±6.4、150.7±9.5),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株A549模型及低表达模型构建成功。FHL1的表达对于肺腺癌细胞株A549的增殖、侵袭及转移均有抑制作用,并能够诱导其加速凋亡。