肿瘤坏死因子-α对骨髓源性肥大细胞表达MMP-3、MMP-9、IL-17的影响

目的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对骨髓源性肥大细胞（BMMCs）分泌MMP-3、MMP-9、IL-17的影响。方法原代培养小鼠
BMMCs,将培养8 周的BMMCs种植于12 孔板中。细胞分为4 个组：BMMCs+PBS组（对照组）、BMMCs+2 ng/mL TNF-α组
（2 ng/mL组）、BMMCs+10 ng/mL TNF-α组（10 ng/mL组）、BMMCs+50 ng/mL TNF-α组（50 ng/mL组）,不同浓度TNF-α与BMMCs
作用后,在12、24 h收集细胞,用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction, real-time PCR）,在
mRNA水平检测MMP-3、MMP-9、IL-17 的表达。结果培养12 h 后,2 ng/mL 组、10 ng/mL 组、50 ng/mL 组MMP-3、MMP-9、
IL-17 mRNA的表达均高于对照组（P<0.05）,并且随着TNF-α浓度的上升mRNA的表达显著升高（P<0.05）。24 h结果与12 h结
果一致,24 h 与12 h 之间比较,除50 ng/mL 组MMP-3 mRNA的表达无差异（P>0.05）,其余各组之间MMP-3、MMP-9、IL-17
mRNA的表达显著升高（P<0.05）。结论TNF-α可以上调BMMCS表达MMP-3、MMP-9、IL-17,且具有浓度依赖性和时间依赖性。
     

TNF-α对足细胞损伤的影响

目的:构建肿瘤坏死因子(TN F-α)诱导的足细胞损伤模型,观察不同浓度、相同浓度和不同诱导时间对足细胞Synaptopodin、14-3-3β、RhoA相关蛋白的影响.方法:将0 ng/mL,5 ng/mL,10 ng/mL,20 ng/mL,30 ng/mL,40 ng/mL浓度的TNF-α加入已分化培养6.5 d的足细胞中,诱导培养24 h;给予相同浓度的TNF-α10 ng/ml作用时间分别为6、12、24、36、48 h;给予相同浓度的TNF-α20 ng/ml,作用时间分别为6、12、24、36、48 h.通过Western Blot检测足细胞相关蛋白Synaptopodin、14-3-3β、RhoA的表达,鉴定足细胞的损伤.结果:足细胞在加入10 ng/mL TNF-α时,足细胞开始发生损伤,给予TNF-α浓度为10 ng/mL和20 ng/mL,作用6 h时足细胞均已经发生损伤,且随着作用时间越长,损伤越严重.在损伤足细胞中Synaptopodin、14-3-3β、RhoA蛋白表达下调.结论:随着TNF-α作用浓度及作用时间的增加,足细胞受损严重,相关蛋白表达量明显降低.     

红霉素抑制人支气管上皮细胞白介素-8基因的表达

目的 从分子水平上探讨红霉素(EM)的抗炎作用机制,为临床长期应用小剂量红霉素治疗慢性气道感染性疾病提供理论依据.方法 体外培养人支气管上皮细胞(16HBE),将细胞随机分为8组,先加入红霉素干预,后加入肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激.分组如下:(1)空白对照组;(2)TNF-α(20ng/mL,16h);(3)EM(0.3μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(4)EM(3μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(5)EM(30μg/mL,24h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(6)EM(0.3μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(7)EM(3μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h);(8)EM(30μg/mL,48h)+TNF-α(20ng/mL,16h).然后收集各组细胞分别提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测白介素-8(IL-8)mRNA.结果 用前炎因子TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE)后,RT-PCR结果显示细胞IL-8mRNA表达增高.先加入不同浓度及作用时间的红霉素,后加入前炎因子TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE),RT-PCR结果显示各组细胞IL-8mRNA表达均降低,但其降低的水平与红霉素作用浓度及时间无明显关系.结论 前炎因子TNF-α能激活人支气管上皮细胞IL-8基因的表达,使其表达增高,促进炎症的发生发展,在炎症进程中发挥着重要作用.红霉素能抑制人支气管上皮细胞白介素-8基因表达,这可能是红霉素的抗炎作用机制之一.     

G-CSF及胸腺肽α1增加THP-1细胞对内毒素刺激的反应

目的观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）及胸腺肽α刺激后，人单核细胞株（THP-1）对内毒素刺激的反应及对Toll样受体4mRNA表达的影响。方法实验采用人THP-1细胞，以10、100及1000ng／mL的GCSF及胸腺肽α1分别刺激4h或24h。继而以10ng／mL内毒素刺激45min。以RT-PCR法扩增Toll样受体4（TLR4）mRNA。ELISA法测定肿瘤坏死因子-α（TNF-α）以表示细胞对内毒素的反应。结果细胞经G-CSF及胸腺肽α1刺激后TLR4表达增加，细胞分泌TNF-α上升。随着G-CSF及胸腺肽α1刺激浓度的增加，TNF-α表达随之增加；刺激24h与4h比较，TNF-α表达也有增加。结论G-CSF及胸腺肽α1可刺激THP-1细胞TLR4mRNA表达，增加细胞对内毒素的反应，增加程度与G-CSF及胸腺肽α1刺激浓度及刺激时间呈正性相关。     

内脏脂肪素对巨噬细胞MMP-9的作用及其机制探讨

目的 研究内脏脂肪素（visfatin）对巨噬细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的作用及其机制。方法体外诱导THP-1单核细胞转化为巨噬细胞。为明确visfatin对MMP-9的作用,细胞分为两组：①巨噬细胞+visfatin 12 h组;②巨噬细胞+visfatin24 h组,两组的visfatin的质量浓度均为：0（对照组）、50、100、200、400 ng/mL。采用RT-PCR和Western blotting测定MMP-9基因和蛋白表达,明胶酶谱法检测MMP-9的活性。为明确visfatin对MMP-9的作用机制,细胞分为五组：①巨噬细胞未加刺激组（对照组）;②巨噬细胞+ MAPK p38、ERK1/2、JNK信号通路抑制剂预处理1 h后加visfatin（200 ng/mL）24 h组;③巨噬细胞+过氧化物酶体增殖剂活化受体（PPARγ）天然及人工配体/ RXR配体预处理1 h后加visfatin（200 ng/mL）24 h组;④巨噬细胞+visfatin（200 ng/mL）24 h组（Vis200组）;⑤巨噬细胞+visfatin（200 ng/mL）刺激不同时间组（5、10、15、30、60 min）。Western blotting检测MMP-9蛋白和PPARγ蛋白表达及visfatin刺激下巨噬细胞p38、ERK1/2、JNK MAPK磷酸化水平。结果 Visfatin能促进MMP-9基因及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,同时增强了MMP-9的活性（P<0.01）。p38 MAPK、ERK1/2 MAPK通路抑制剂及RXR配体抑制visfatin对MMP-9表达具有上调作用;visfatin能促进p38 MAPK和ERK1/2 MAPK的磷酸化,但不影响PPARγ蛋白的表达。结论 Visfatin增加了巨噬细胞炎症因子的表达,该作用与p38 MAPK和ERK1/2MAPK信号通路有关;RXR可能参与了该过程。     

内脏脂肪素对巨噬细胞MMP-9的作用及其机制探讨

目的 研究内脏脂肪素(visfatin)对巨噬细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的作用及其机制.方法 体外诱导THP-1单核细胞转化为巨噬细胞.为明确visfatin对MMP-9的作用,细胞分为两组:①巨噬细胞+visfatin 12 h组;②巨噬细胞+visfatin 24 h组,两组的visfatin的质量浓度均为:0(对照组)、50、100、200、400 ng/mL.采用RT-PCR和Western blotting测定MMP-9基因和蛋白表达,明胶酶谱法检测MMP-9的活性.为明确visfatin对MMP-9的作用机制,细胞分为五组:①巨噬细胞未加刺激组(对照组);②巨噬细胞+ MAPK p38、ERK1/2、JNK信号通路抑制剂预处理1 h后加visfatin(200 ng/mL)24 h组;③巨噬细胞+过氧化物酶体增殖剂活化受体(PPARγ)天然及人工配体/ RXR配体预处理1 h后加visfatin(200 ng/mL)24 h组;④巨噬细胞+visfatin(200 ng/mL)24 h组(Vis200组);⑤巨噬细胞+visfatin(200 ng/mL)刺激不同时间组(5、10、15、30、60 min).Western blotting检测MMP-9蛋白和PPARγ蛋白表达及visfatin刺激下巨噬细胞p38、ERK1/2、JNK MAPK磷酸化水平.结果 Visfatin能促进MMP-9基因及蛋白表达(P<0.05,P<0.01),同时增强了MMP-9的活性(P<0.01).p38 MAPK、ERK1/2 MAPK通路抑制剂及RXR配体抑制visfatin对MMP-9表达具有上调作用;visfatin能促进p38 MAPK和ERK1/2 MAPK的磷酸化,但不影响PPARγ蛋白的表达.结论 Visfatin增加了巨噬细胞炎症因子的表达,该作用与p38 MAPK和ERK1/2 MAPK信号通路有关;RXR可能参与了该过程.     

肿瘤坏死因子-α对人脐静脉内皮细胞中组织蛋白酶K表达的影响

目的：观察不同浓度肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）和不同TNF-α作用时间对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）中组织蛋白酶K（Cat K）表达的影响。方法取对数生长期HUVEC进行实验。将HUVEC分为正常对照组、0．1 ng／ml TNF-α组、1 ng／ml TNF-α组、10 ng／ml TNF-α组、100 ng／ml TNF-α组,分别采用DMEM培养基、0．1 ng／ml TNF-α、1 ng／ml TNF-α、10 ng／ml TNF-α、100 ng／ml TNF-α作用24 h。另取HUVEC分为对照组、TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组、TNF-α48 h组,对照组DMEM培养基作用24 h,其他组采用10 ng／ml TNF-α作用相应时间。检测各组HUVEC 中的Cat K mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,不同TNF-α浓度组的Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平均升高（P＜0．05）。0．1 ng／ml TNF-α组、1 ng／ml TNF-α组、10 ng／ml TNF-α组 Cat K mRNA 和 Cat K 蛋白的表达水平依次增高（P＜0．05）,100 ng／ml TNF-α组Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平较10 ng／ml TNF-α组下降（P＜0．05）。与对照组比较,TNF-α各作用时间组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平增高（P＜0．05）;TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平依次增高（P＜0．05）;TNF-α48 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平较TNF-α24 h组明显下降（P＜0．05）。结论在一定作用浓度及作用时间内,TNF-α可以呈剂量和时间依赖性刺激HUVEC中Cat K表达。 TNF-α可能通过促进Cat K的表达促进动脉硬化的发生。     

肾小管上皮细胞fractalkine的表达介导对巨噬细胞的趋化作用

[目的]探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E上调表达趋化因子fractalkine的时间和剂量效应,并观察肾小管上皮细胞fractalkine表达是否介导了对巨噬细胞的趋化作用.[方法]应用免疫荧光细胞化学技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹法检测TNF-α诱导的NRK-52E fractalkine表达,应用Transwell装置观察NRK-52E对大鼠巨噬细胞株RAW 264.7的趋化效应,以及fractalkine中和抗体对趋化效应的影响.[结果]正常培养的NRK-52E可表达少量的fractalkine,TNF-α(40 ng/mL)刺激后1 h,fractalkine的mRNA和蛋白表达增加尚不明显,在刺激后6 h表达即明显增加,持续至24～48 h.10 ng/mL TNF-α即可诱导fractalkine mRNA和蛋白表达增加,20 ng/mL及40 ng/mL TNF-α诱导fractalkine表达增加的效应更加明显.NRK-52E fractalkine表达上调可明显增强其趋化巨噬细胞的效应,而fractalkine中和抗体可明显抑制此种趋化效应.[结论]TNF-α能够以时间和剂量依赖方式上调肾小管上皮细胞fractalkine的mRNA和蛋白表达,且fractalkine在介导肾小管上皮细胞对巨噬细胞的趋化作用中起重要作用.     

肿瘤坏死因子-α对体外培养的兔角膜上皮细胞基质金属蛋白酶表达活性的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的兔角膜上皮细胞基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)表达活性的影响,探讨MMP-2、MMP-9的调节机制及TNF-α和MMP-2、MMP-9在角膜炎症性病变中的作用。方法:组织块法培养兔角膜上皮细胞,经不同浓度(1,10,100μg/L)TNF-α诱导24 h后,收集条件培养基应用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性,利用计算机图像分析系统进行统计分析。结果:在体外培养的角膜上皮细胞中,TNF-α能增强MMP-2、MMP-9的活性,并具有一定的浓度依赖性,TNF-α可激活MMP-2酶原,使其表现出活化形式。结论:炎性因子TNF-α可以上调角膜上皮细胞分泌的MMP-2、MMP-9的活性,针对这一过程进行干预对防治角膜炎性疾病具有重要意义。     

鱼腥草素衍生物对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞Syndecan-4表达的影响

目的观察一种鱼腥草素衍生物（houttuyfonate derivative,HD）对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖及Syndecan-4表达的影响。方法以终浓度分别为TNF-α20ng/mL、HD 4μg/mL、HD 8μg/mL、TNF-α20 ng/mL＋HD 4μg/mL及TNF-α20 ng/mL＋HD 8μg/mL对体外培养的VSMCs作用24 h,并设立相关对照组,用MTS/PMS法检测VSMCs的增殖,用Western blot蛋白免疫印迹法测定Syndecan-4的表达情况。结果与对照组相比,HD各剂量组单独应用对VSMCs的增殖无明显作用（P〉0.05）;HD 4μg/mL和8μg/mL可分别抑制TNF-α对VSMCs的增殖作用（P〈0.05）。Western blot测定显示：与对照组相比,HD各剂量组单独应用对Syndecan-4的表达无明显影响（P〉0.05）,HD 4μg/mL和8μg/mL均可抑制TNF-α刺激后Syndecan-4的表达（P〈0.05）。结论HD对TNF-α刺激后的VSMCs的增殖及Syndecan-4表达均有抑制作用。     

白藜芦醇对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响

目的观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制。方法不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24 h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中sICAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10μmol/L)预处理24 h后,再用TNF-α(10 ng/ml)处理24 h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平。结果高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P<0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7%;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P<0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P<0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P<0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强。结论白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤。     

虫草素对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及syndecan-4蛋白表达的影响

目的观察虫草素对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激的离体大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和syndecan-4蛋白表达的影响。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分别应用终浓度为20 ng/mL TNF-α、20μmol/mL虫草素、40μmol/mL虫草素、20 ng/mL TNF-α＋20μmol/mL虫草素、20 ng/mL TNF-α＋40μmol/mL虫草素作用24 h,并设对照组进行比较。采用MTS/PMS法确定VSMCs的增殖状态,利用Western blot蛋白免疫印迹法测定VSMCs中syndecan-4蛋白的表达。结果（1）与对照组比较,TNF-α组能显著刺激大鼠VSMCs的增殖（P〈0.05）,而虫草素不同剂量组单独应用对大鼠VSMCs的增殖均无明显作用（P〉0.05）。TNF-α联合虫草素共同作用组与TNF-α组比较,VSMCs增殖均显著减少（P〈0.05）。（2）Western blot蛋白免疫印迹法测定显示：与对照组比较,TNF-α组能显著刺激VSMCs的syndecan-4蛋白表达（P〈0.05）,而虫草素不同剂量组单独应用对V...更多SMCs的syndecan-4蛋白表达均无明显影响（P〉0.05）。TNF-α联合虫草素共同作用组与TNF-α组比较,VSMCs的syndecan-4蛋白表达显著降低（P〈0.05）。结论虫草素可明显抑制TNF-α诱导的VSMCs增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。     

Effect of resveratrol on TNF-α-induced vascular endothelial inflammation in vitro

目的 观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制.方法 不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中slCAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10 μmol/L)预处理24h后,再用TNF-α( 10 ng/ml)处理24h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平.结果 高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P＜0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7％;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P＜0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P＜0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P＜0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强.结论 白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤.     

肿瘤坏死因子对HK-2细胞增殖及表达结缔组织生长因子的影响

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖及表达结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的影响。方法采用DMEM/F12培养基体外培养HK-2细胞,分别用不同浓度的TNF-α刺激HK-2细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测HK-2细胞的增殖,用流式细胞术(FCM)检测细胞周期,ELISA方法检测培养细胞的上清液中CTGF蛋白含量。结果与对照组(不加TNF-α)相比,0.1ng/mLTNF-α组、0.5ng/mL TNF-α组、1.0ng/mL TNF-α组、5ng/mL TNF-α及10ng/mL TNF-α组,MTT法测定的吸收光度A值、细胞增殖指数、ELISA方法检测培养细胞的上清液中CTGF蛋白含量,均有极显著性升高(P0.01),并随着TNF-α浓度的增加而递增(P0.05或P0.01)。但是,当培养液中TNF-α浓度到达1.0ng/mL后达到高峰,即在1.0ng/mL TNF-α、5ng/mL TNF-α及10ng/mL TNF-α组间,上述指标均无显著性差异(P0.05)。结论炎症因子TNF-α能促进肾小管上皮细胞的增殖、分泌致纤维化因子CTGF,从而在慢性肾脏疾病的发生发展中发挥重要作用。     

TNF-α诱导人肺微血管内皮细胞凋亡Caspase-3活性的研究

目的：探讨凋亡“核心蛋白酶”-半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)凋亡中的作用。方法体外培养HPMVECs,空白对照组置于CO2培养箱中常规培养, TNF-α组分别以10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL浓度刺激HPMVECs,使用MTT比色法检测各组细胞活性,AnnexinⅤ/PI双染色联合流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果空白对照组的细胞凋亡率及Caspase-3活性最低;空白对照组和TNF-α组(10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL)比较,100 ng/mL TNF-α组的相对细胞活性最低,而细胞凋亡率及Caspase-3活性最高,TNF-α诱导HPMVEC凋亡时呈现出浓度依赖性,随着时间的延长,Caspase-3活性逐渐升高(P<0.05)。结论 TNF-α诱导人肺微血管内皮细胞凋亡呈现浓度依赖性,Caspase-3可能参与了这一细胞凋亡过程的调控。     

miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h,ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h,Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞,用TNF-α（100ng／mL）刺激24h,ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF,50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度;50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h,VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍,而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后,TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01）,但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。     

TGF-β1对绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA表达的影响

目的:研究外源性TGF-β1作用不同时间对绒癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA表达的影响.方法:研究对象为永生化绒癌JEG-3细胞系,以100ng/ml浓度的TGF-β1分别作用JEG-3细胞0h、12h、24h、48h和72h,采用RT-PCR法检测各组细胞MMP-9 mRNA的表达.结果:随着TGF-β1作用时间的延长,MMP-9 mRNA的表达逐渐增加(P<0.01).结论:绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA的表达对外源性TGF-β1的刺激呈现一定的时间效应,可能与绒癌的侵袭转移相关.     

胸腺肽α1对THP-1细胞Toll样受体2和MyD88以及TNF-α表达的影响

目的:观察人THP-1细胞与胸腺肽α1(Tα1)孵育后,予细菌脂蛋白(BLP)刺激后,Toll样受体2(TLR2)、髓系分化因子88(MyD88)蛋白的表达及细胞因子TNF-α的变化。方法:实验采用人THP-1细胞系进行细胞培养,分为4组:对照组为THP-1细胞不加任何刺激;BLP组以1000ng/mlBLP刺激2h;Tα1组为THP-1细胞加1000ng/mlTα1孵育24h,不加BLP刺激;Tα1 BLP组为THP-1细胞加1000ng/mlTα1孵育24h后再加1000ng/mlBLP刺激2h。以Westernblot分析TLR2、MyD88蛋白含量。ELISA法测定TNF-α。结果:与对照组相比,BLP组和Tα1 BLP组的TNF-α均显著增加,而Tα1组无显著改变;在TLR2和MyD88的表达上,Tα1组和Tα1 BLP组均高于对照组和BLP组。结论:胸腺肽α1可增加THP-1细胞TLR2、MyD88蛋白的表达,其对免疫细胞的影响与BLP诱发炎症反应的途径不完全一致。     

TNF-α及sTNFRⅠ对子宫内膜异位症在位内膜基质细胞的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α) 和可溶性肿瘤坏死因子受体(soluble TNFR I,sTNFR I)对体外培养的子宫内膜异位症(Endometriosis)患者在位内膜基质细胞的影响,为子宫内膜异位症的生物学治疗提供新思路.方法:对EMS患者的在位子宫内膜基质细胞进行体外培养.分别用不同浓度的TNF-α(0、0.1、1.0、10.0和100.0 ng/ml)或者同一浓度TNF-α(1 ng/ml)培养不同时间(4、8、12、24、48和72 h)或者TNF-α(1 ng/ml)和 sTNFR I(2 μg/ml)对基质细胞进行刺激并收集细胞上清液,利用双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清液中IL-6、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinases,MMP-3)的水平.结果:TNF-α可促进体外培养的EMS子宫内膜基质细胞IL-6、MMP-3的分泌,而且IL-6、MMP-3浓度与TNF-α之间存在剂量、时间依赖关系(P<0.05),而sTNFR I具有抑制TNF-α的作用.结论:TNF-α在EMS的发病机制中发挥重要的作用,其对 EMS 患者子宫内膜基质细胞的促黏附、侵袭、增殖等作用可能是通过促进 IL-6、MMP-3 的分泌来完成的;sTNFR I有望用于EMS 生物学治疗.