下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。     

siRNA干扰wnt5a表达对Jurkat细胞生长的影响及机制研究

目的:干扰wnt5a在Jurkat细胞中的表达,探讨wnt5a对Jurkat细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用及其机制。方法:采用大肠杆菌BJ5183内同源重组的方法构建特异性干扰wnt5a的腺病毒Ad5-wnt5asi,感染Jurkat细胞。实验分为实验组(感染重组腺病毒的Jurkat细胞)、空载体组(感染腺病毒的Jurkat细胞)及空白对照组(Jurkat细胞)。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测各组细胞wnt5a、β-catenin、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Calmodulin dependent proteinkinaseⅡ,CaMKⅡ)、cyclinD1、c-myc、survivin mRNA表达,Western blot检测干扰前后β-catenin、CaMKⅡ、cyclinD1蛋白表达。结果:(1)实验组细胞增殖与空载体组及空白对照组相比显著增高(P<0.05)。(2)实验组与其他两组相比,G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增多(P<0.05),G2期细胞比例无明显差异(P>0.05)。实验组与其他两组相比,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。(3)实验组细...     

丙型肝炎病毒核心蛋白对肝癌细胞stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D1的调控作用

[目的]探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)是否调控肝癌细胞中stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D 1的表达,参与肝癌细胞的恶性生物学行为.[方法]将含HCVc基因的真核表达质粒pEGFP-N3-HCVc瞬时转染人肝癌细胞HepG2使HCVc过表达,用siRNA-HCVc敲除HepG2细胞中HCVc的表达,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测HCVc、总stat3(stat3)、磷酸化stat3(p-stat3)及cyclinD1蛋白的表达;流式细胞术及MTT法检测细胞周期变化及细胞增殖情况.[结果]Western blot结果显示,通过瞬时转染而过表达HCVc的HepG2细胞中,HCVc、p-stat3及cyclinD1的蛋白水平高于空白质粒转染组和未转染组;siRNA-HCVc敲除HCVc表达后,HCVc、p-stat3和cyclin D1蛋白的表达下调;酪氨酸磷酸化抑制剂AG490(JAK2特异性拮抗剂)处理可下调过表达HCVc的HepG2细胞中p-stat3和cyclin D1蛋白的表达.流式细胞术显示过表达HCVc可促进细胞向G2/M期进展.MTT法结果显示过表达HCVc使HepG2细胞增殖能力增加.[结论]HCVc可活化HepG2细胞中stat3通路,调控细胞周期蛋白cyclinD1的表达,促进细胞周期进展及细胞增殖,可能与肝癌的发展有关.     

GDNF 通过 AKT/β-catenin 调节人胶质瘤细胞增殖的研究

目的：研究胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)促进人胶质瘤细胞增殖的机制。方法将胶质瘤样本分为低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组,脑挫裂伤患者样本作为正常对照组,每组各12例;将胶质瘤细胞系 C6细胞分为细胞对照组、牛血清蛋白(BSA)组和 GDNF 组。CCK-8实验检测细胞增殖率,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组 AKT、p-AKT、β-catenin 和p-β-catenin 的表达。结果与正常对照组相比,胶质瘤组 AKT、p-AKT、β-catenin 和 p-β-catenin 的蛋白水平显著增加(P <0.05),且高级别胶质瘤组的蛋白水平明显高于低级别胶质瘤组(P <0.05)。CCK-8检测 C6胶质瘤细胞实验中,与细胞对照组相比, GDNF 组细胞增殖率明显增高(P <0.05),Akt 表达水平没有明显变化,而 p-Akt、β-catenin 和 p-β-catenin 的蛋白表达均显著增加(P <0.05)。结论GDNF 可能通过上调胶质瘤细胞 p-AKT、β-catenin 和 p-β-catenin 来促进胶质瘤细胞的增殖。     

外源性BMP9对骨肉瘤细胞MG63的影响与Wnt/β-catenin信号通路的关系

目的 研究外源性骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)过表达对骨肉瘤细胞的影响与Wnt/β-catenin信号通路的关系.方法 用携带人BMP9基因的重组腺病毒AdBMP9转染人骨肉瘤细胞MG63,上调MG63中BMP9的表达水平;MTT法检测细胞增殖能力的变化,Hochest染色法检测细胞凋亡的变化,Transwell实验检测细胞迁移能力的变化;实时定量PCR和Western blot分别检测Wnt/β-catenin信号通路中相关分子β-catenin、c-myc、cyclinD1和E-cadherin在mRNA和蛋白水平表达的变化.统计分析实验结果.结果 获得了过表达BMP9的MG63细胞;BMP9能促进MG63细胞的增殖、迁移和凋亡;MG63细胞中BMP9的过表达增强了Wnt/β-catenin信号通路中相关分子β-catenin、c-myc、cyclinD1的表达,减弱了E-cadherin的表达.结论 BMP9对于骨肉瘤细胞MG63具有正性调节作用,该调控作用可能与Wnt/β-catenin信号通路相关.     

microRNA-24通过下调Cdk4和CyclinD3抑制胰岛β细胞增殖

目的:通过共同过表达Cdk4?CyclinD3与microRNA-24,观察miR-24所引起的胰岛β细胞增殖抑制是否得到逆转,从而判定Cdk4?CyclinD3是否介导了这种抑制作用?方法:在胰岛β细胞系MIN6细胞中过表达miR-24,运用WST-1法检测细胞活力,借助于流式细胞术检测细胞周期,Hoechst33342染色和BrdU标记检测细胞增殖凋亡情况?Western blot检测Cdk4?CyclinD3蛋白水平?构建cyclinD3-pCMV5-myc,cdk4-pCMV5-myc重组质粒,与pre-miR-24?pre-Neg miRNA precursors共转染MIN6细胞,BrdU标记检测细胞增殖?结果:过表达miR-24引起MIN6细胞活力降低,细胞周期G2期阻滞,细胞增殖受到抑制而并没有显著的凋亡;过表达miR-24降低了Cdk4?CyclinD3蛋白水平;而Cdk4?CyclinD3的过表达逆转了miR-24引起的胰岛β细胞增殖抑制?结论:miR-24通过降低Cdk4?CyclinD3蛋白水平抑制胰岛β细胞增殖,该作用可被Cdk4?CyclinD3蛋白的过表达逆转?     

外源性Wnt-3a促进急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与细胞周期进展

目的 应用重组腺病毒介导的Wnt-3a激活急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat中的经典Wnt/β-catenin信号途径,观察该途径激活后对Jurkat细胞增殖及细胞周期的影响,初步探讨其在急性T淋巴细胞白血病分子发病机制中的作用.方法 将携带Wnt-3a基因的重组腺病毒(Ad5-Wnt-3a)感染Jurkat细胞,实验分为3组:实验组(Jurkat/Ad5-Wnt-3a)、空载体组(Jurkat/Ad5-GFP)和空白对照组(Jurkat).转染后,采用RT-PCR方法检测Jurkat细胞内Wnt-3a mRNA的表达;Western blot检测细胞内β-catenin蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖,FCM法检测细胞周期,RT-PCR检测Wnt信号通路下游靶基因c-myc和cyclin D1 mRNA表达.结果 重组腺病毒Ad5-Wnt-3a转染Jurkat细胞后48 h,实验组有效表达Wnt-3a的基因.Western blot结果显示,与对照组比较,实验组细胞内β-catenin蛋白表达明显增加(P<0.05).MTT结果显示,Wnt-3a转染后48 h和72 h可明显促进Jurkat细胞的增殖,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).FCM检测发现,Wnt-3a转染后可引起细胞G0/G1期下降,S期升高(P<0.05).RT-PCR检测结果显示细胞内c-myc和cyclin D1 mRNA表达升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 腺病毒介导的Wnt-3a可以激活Jurkat细胞中的经典Wnt/β-catenin信号途径,使Jurkat细胞增殖,促进细胞周期进展,其可能的机制是通过调控其下游靶基因c-myc和cyclin D1的表达实现.     

siRNA沉默CEACAM1基因对人胶质瘤SHG44细胞生物学行为的作用

目的 探讨CEACAM1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胶质瘤SHG44细胞增殖、体外迁移和侵袭能力的影响. 方法 设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA,脂质体法瞬时转染SHG44细胞.Western blot检测转染后细胞中CEACAM1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平变化.CCK-8法检测转染后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化.通过Transwell小室迁移和侵袭实验,观察下调CEACAM1对SHG44细胞体外迁移和侵袭能力的影响.结果 三组特异性siRNA转染48 h后,Western blot的结果显示,3个siRNA转染组CEACAM1蛋白水平均低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.01),以CEACAM1-siRNA3干扰效果最为明显.后续实验表明,与两个对照组相比较,CEACAM1-siRNA组的细胞增殖减慢,β-catenin和Cyclin D1表达水平明显减少(P＜0.05).Transwell小室迁移和侵袭实验表明CEACAM1下调后的SHG44细胞迁移和侵袭能力较正常对照组及阴性对照组明显降低(P＜0.05). 结论 CEACAM 1-siRNA能有效抑制人胶质瘤SHG44细胞CEACAM1蛋白的表达,并抑制细胞增殖,降低细胞的体外迁移及侵袭能力.     

转录因子FOXC1促进胶质瘤细胞系U87的侵袭能力

目的：探讨转录因子FOXC1对人脑胶质瘤细胞系U87侵袭的促进作用。方法：qPCR、Western blot检测胶质瘤细胞系U87、U251及正常星型胶质细胞中FOXC1 mRNA和蛋白表达水平。将FOXC1-siRNA转染至U87细胞中,分别用qPCR、Western blot检测FOXC1-siRNA的转染效率。细胞划痕实验和Transwell实验检测U87细胞转染FOXC1-siRNA后对细胞侵袭能力的影响,利用 Western blot检测U87细胞上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）、标记蛋白（N-cadherin、Vimentin、E-cadherin）表达水平。结果：U87细胞下调FOXC1表达后侵袭能力明显减弱,上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）表达水平下降,上皮细胞标记蛋白表达水平E-cadherin表达水平升高、间质细胞标记蛋白N-cadherin、Vimentin表达水平降低。结论：转录因子FOXC1通过上皮间质化促进胶质瘤细胞的侵袭。     

人类乳头瘤病毒16 E7真核表达载体构建及对A431皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 构建HPV16 E7(E7)真核表达载体,观察E7过表达对A431细胞增殖和侵袭的影响.方法 从Casld细胞中抽提总RNA,针对E7序列设计特异引物,进行逆转录和聚合酶链式反应扩增得到E7 cDNA.应用基因工程方法将得到的PCR片段克隆至真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点.重组质粒经双酶切鉴定和测序后,使用LipofectamaineTM2000转染A431细胞.Western blot检测E7在细胞中的表达.WST-1和Transwell系统分别检测细胞增殖和侵袭能力.流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化.ELISA检测TGF-β分泌情况.结果 经酶切、测序鉴定,E7基因正确插入到pEGFP-N1多克隆位点,获得pEGFP-E7;Western blot检测结果显示:与未转染组相比,转染组E7蛋白高表达.过表达E7的A431细胞增殖和侵袭能力均显著增强,细胞周期中S期细胞数量增多,G1期细胞数量相对减少.TGF-β分泌增多.结论 E7过表达可改变细胞周期,提高皮肤鳞癌细胞的增殖和侵袭能力,而分泌增多的TGF-β并不能抑制肿瘤的增殖和侵袭.     

Effects of Retinoic Acid on the β-catenin/TCF Pathway in Cultured Porcine Tracheobronchial Epithelial Cells

The effects of retinoic acid on the β-catenin/TCF pathway in cultured porcine tracheobronchial epithelial cells (TBEC) were investigated. After TBEC were treated with retinoic acid at various concentrations, mRNA and protein changes of β-catenin in cytoplasm, nucleus and whole cell of the TBEC were observed by immunocytochemical stain, RT-PCR and Western blotting. And the changes of the target gene cyclinD1 of β-catenin/TCF pathway were also observed. It was found that there was no significant difference in β-cat mRNA level after retinoic acid treatment. However,the expression of β-catenin in the whole cell and cytoplasm was elevated with the increase of retinoic acid concentration (P＜0.01). The nuclear protein β-catenin and target gene cyclinD1 of β-catenin/TCF pathway was decreased (P＜0.05). It was indicated that retinoic acid could increase β-catenin level of the whole cell protein and decrease nuclear β-catenin, downregulating β-cat/TCF signaling activity and reducing target gene cyclinD1 protein level. As a result, retinoic acid can downregulate β-catenin/TCF pathway in porcine tracheobronchial epithelial cell, suggesting that retinoic acid can inhibit the proliferation and accelerate differentiation of tracheobronchial epithelial cells.     

APC不同功能区域对结肠癌细胞株HT-29中β-连环蛋白表达的影响

目的:探讨含有APC蛋白不同功能区域的pEGFP-N3-APC重组质粒对结肠癌细胞株HT-29中β-连环蛋白表达的影响.方法:脂质体介导重组质粒pEGFP-N3-APC1～5转染HT-29,采用绿色荧光及RT-PCR验证重组质粒在细胞中的表达.以Western免疫印迹检测转染后HT-29细胞中β-连环蛋白的表达,以SPSS 13.0软件分析电泳条带的灰度值.结果:重组质粒转染HT-29细胞后,绿色荧光及RT-PCR结果显示5个APC蛋白不同功能区域多肽可在细胞中表达.Western免疫印迹结果显示,重组质粒pEGFP-N3-APC1,pEGFP-N3-APC2和pEGFP-N3-APC3对β-连环蛋白表达无影响,而pEGFP-N3-APC4和pEGFP-N3-APC5均可降低结肠癌细胞株HT-29中β-连环蛋白的表达水平,其中以pEGFP-N3-APC5的抑制程度最强.结论:含有APC蛋白中15氨基重复序列+SAMP重复序列的APC5基因片段既可有效降低β-连环蛋白的表达,同时又是相对长度较短的可用于基因治疗的最优片段.     

wnt/β-catenin信号通路关键蛋白及Mucin1在喉鳞状细胞癌上表达与相关研究

目的研究喉鳞状细胞癌中wnt/β-catenin信号通路中的关键蛋白（β-catenin、cyclinD1）与Mucin1的表达,并分析三者是否有关联。方法通过SP免疫组织化学方法分析喉鳞癌中Mucin1、β-catenin与cyclinD1的阳性表达,χ2检验与Spearman秩相关分析三个指标的阳性率。结果喉鳞状细胞癌中Mucin1在胞浆染色为棕黄色,阳性率为52.38%;β-catenin异位表达于胞质,表达率为67.86%;cyclinD1在胞核为深棕色,阳性表达率为85.12%,三者与癌旁组织比较差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。随着喉癌组织Mucin1表达的增强,β-catenin与cyclinD1的阳性表达率也增高,相关分析结果显示：Mucin1与β-catenin、β-catenin与cyclinD1均成正相关。结论 Mucin1、β-catenin与cyclinD1可作为喉鳞状细胞癌治疗的新靶点。     

β-catenin与cyclinD1在胆道肿瘤中的表达及临床意义

目的通过观察胆道肿瘤组织中β-连环素（β-catenin）与细胞周期素D1（cyclinD1）的表达，探讨它们和胆道肿瘤发生、预后的关系。方法应用免疫组织化学法研究33例胆囊癌，35例胆管癌中β-catenin与cyclinD1的表达特点，并结合临床资料进行统计学分析。结果10例正常的胆囊和胆管标本中β-catenin与cyclinD1均呈正常表达。而在33例胆囊癌组织中有16例（48．5％）β-caterfin的异常表达和18例（54．5％）cyclinD1的过度表达；35例胆管癌组织中存在18例（51．4％）β-catenin的异常表达和16例（45，7％）cyclinD1的过度表达。在胆道恶性肿瘤中。β-catenin的表达异常和cyclinD1的过度表达与TNM分期和／或肿瘤的分化相关，而且β-catenin的异常表达与cyclinD1的过度表达相关（P〈0．05）。结论在胆道恶性肿瘤组织中存在β-catenin的异常表达与cyclinD1的过度表达。β-catenin的异常表达与cyclinD1的过度表达之间的相关性提示，β-catenin／Wnt信号转导途径参与了胆道肿瘤的发生和发展。     

乳腺癌中-βcatenin、cyclinD1、c-myc表达及意义

目的探讨-βcatenin、cyclinD1、c-myc在乳腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化法检测119例乳腺癌,72例乳腺增生症和40例正常乳腺组织中-βcatenin、cyclinD1、c-myc的表达,并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果 40例正常乳腺组织中-βcatenin在细胞膜中强表达,cyclinD1及c-myc阴性表达。乳腺癌-βcatenin异常表达率78.15%(93/119)明显高于乳腺增生症44.44%(32/72),组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌cyc linD1阳性表达率57.98%(69/119)高于乳腺增生症33.33%(24/72),组间比较差异有统计学意义(P=0.001<0.01)。乳腺癌c-myc阳性表达率56.30%(67/119)高于乳腺增生症27.78%(20/72),组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。-βcatenin异常表达、cyclinD1的过表达与淋巴结转移相关,c-myc的过表达与肿瘤大小和淋巴结转移相关。-βcatenin的异常表达与cyclinD1的表达相关,而与c-myc的表达无关。结论β-catenin异常表达是乳腺癌发生发展过程中的重要因子,这个过程可能是通过激活cyclinD1实现的。-βcatenin异常表达和cyclinD1、c-myc过表达可作为评估乳腺癌转移预后的指标。     

lncRNA GHET1通过Wnt/β-catenin信号通路对子痫前期滋养层细胞生物学行为的影响

目的 探讨子痫前期（PE）患者胎盘组织中长链非编码RNA胃癌高表达转录本1（lncRNA GHET1）的表达及其对滋养层细胞增殖、细胞周期进展和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。 方法 30名孕产妇分为正常孕产妇组（正常组）15例和PE孕产妇组（PE组）15例,HE染色观察2组研究对象胎盘组织病理形态表现。体外培养滋养层HTR-8细胞,转染过表达lncRNA GHET1及对照序列质粒,并将滋养层细胞分为对照组（常规培养）、GHET1组（转染过表达lncRNA GHET1质粒）和阴性对照组（转染阴性对照序列质粒）。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组研究对象胎盘组织和各组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组HTR-8细胞增殖率,流式细胞术检测各组不同细胞周期HTR-8细胞百分率,Transwell小室实验检测各组HTR-8细胞侵袭能力,Western blotting法检测各组HTR-8细胞中细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌基因（c-Myc）、细胞周期素D1（cyclinD1）、上皮细胞-间充质转化（EMT）相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）蛋白表达 水平及Wnt/β-catenin信号通路中磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK3β）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）比值和β-连环蛋白（β-catenin）蛋白表达水平。 结果 与正常组比较,PE组患者胎盘组织绒毛发育不良,数量减少,绒毛内及间质血管分布紊乱,血管壁出现纤维素样坏死,钙化区域及绒毛上合体结节增加。与正常组比较,PE组患者胎盘组织中lncRNA GHET1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较,GHET1组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,阴性对照组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,GHET1组HTR-8细胞增殖率、S期细胞百分率和侵袭细胞数明显升高（P<0.05）,阴性对照组上述指标差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,GHET1组HTR-8细胞中c-Myc、cyclinD1、Vimentin和β-catenin蛋白表达水平及p-GSK3β/GSK3β比值均明显升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,阴性对照组上述指标差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 过表达lncRNA GHET1可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进滋养层细胞增殖、细胞周期进展和细胞侵袭,发挥改善PE进展的作用。     

Smad4基因对胰腺癌细胞E-cadherin、β-catenin表达及增殖的影响

目的探讨Smad4基因对人胰腺癌细胞BxPC3 E-cadherin、β-catenin表达及细胞增殖的影响,为试图运用Smad4对胰腺癌进行基因治疗提供实验依据。方法经脂质体介导将含有Smad4重组表达质粒转染人胰腺癌细胞Bx-PC3,用G418筛选及RT-PCR、Western blot鉴定;分别采用RT-PCR和Western blot检测转染阳性细胞克隆E-cadherin、β-catenin表达改变;又分别采用噻唑盐（MTT）比色法及5-溴-2-脱氧尿苷（BrdU）掺入法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果成功建立表达Smad4的阳性BxPC3克隆（S4-8,S4-23）,并证实其E-cadherin、β-catenin mRNA及蛋白表达均明显升高。MTT法和BrdU掺入法显示,S4-8与S4-23细胞克隆增殖显著降低。结论 Smad4可增加胰腺癌细胞E-cadherin及β-catenin的表达并抑制其增殖,Smad4可能对胰腺癌具有基因治疗的效果。     

Dishevelled-1，3影响肺癌细胞侵袭机制的研究

 目的　散乱蛋白（Dvl）亚家族成员在非小细胞肺癌中均存在过表达,但不同亚型对肺癌细胞侵袭能力的影响和可能的机制尚不清楚。方法　检测转染Dvl-1和Dvl-3后肺癌细胞系T细胞转录因子（T-cell factor,Tcf）转录活性的改变,β-连环蛋白（β-catenin）和p120连环蛋白（p120ctn）的表达,以及对细胞侵袭能力的影响。结果　Dvl-1和Dvl-3过表达后,肺癌细胞中p120ctn蛋白水平均上调,但Dvl-3可明显上调p120ctn mRNA水平。同时,Dvl-1过表达后Tcf 转录活性明显上调,而Dvl-3未明显影响其Tcf 转录活性。应用β-catenin和p120ctn抗体抑制β-catenin和p120ctn蛋白作用后,可分别显著抑制由Dvl-1和Dvl-3增强的细胞侵袭能力。结论　Dvl-1可能主要通过经典Wnt通路中的β-catenin,而Dvl-3则可能主要通过与非经典Wnt通路相关的p120ctn影响肺癌细胞的生物学行为。     

人肾脏系膜细胞内mRNA稳定因子HuR蛋白对细胞周期蛋白cyclinD1转录后表达的调节

目的观察人肾脏系膜细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下mRNA稳定因子人类抗原R(HuR)蛋白对细胞周期蛋白D1(cyclinD1)蛋白的作用。方法体外培养人肾脏系膜细胞,根据AngⅡ对其的刺激时间即0、3、6、9、24 h分别记为0A、3A、6A、9A、24A组。应用流式细胞仪检测0A组与24A组细胞周期;免疫细胞化学方法观察各组HuR蛋白的亚细胞定位变化;Western blot方法检测各组全细胞与胞质内HuR蛋白及全细胞cyclinD1表达水平;RT-PCR方法检测各组cyclinD1的RNA水平。干扰RNA方法观察抑制HuR蛋白表达后AngⅡ刺激下对全细胞cyclinD1表达的保护效应。结果与0A组比较,24A组细胞增殖趋势明显;HuR蛋白亚细胞定位从胞核转移到胞质,其中3A组变化最显著;全细胞HuR蛋白表达水平不变,胞质内HuR蛋白表达增强,其中3A组最显著(P<0.05);cyclinD1蛋白表达增强,其中24A组最显著(P<0.05),而RNA水平保持不变(P>0.05)。与转染前相比,干扰RNA转染后3A组胞质HuR蛋白表达明显减弱(P<0.05);24A组cyclinD1蛋白表达明显减弱(P<0.05),而RNA水平不变(P>0.05)。结论①AngⅡ可刺激人肾小球系膜细胞增殖;②AngⅡ刺激下人肾脏系膜细胞核内HuR蛋白向胞质内转移;③HuR蛋白参与AngⅡ刺激下cyclinD1蛋白表达过程。