单剂量米非司酮(RU486)对人类分泌期子宫内膜影响的免疫组织化学研究

米非司酮 (RU486 )作为孕酮拮抗剂 ,可延迟排卵 ,影响子宫内膜的发育及成熟 ,因此推测 RU486可能影响分泌期子宫内膜整合素及 L IF等的表达 ,以干扰植入过程。受试者随机分为两组 :L H- 2组 (n=5 )和 L H 2组 (n=6 ) ,在对照周期及实验周期中于服药日 (L H- 2或 L H 2 )分别口服安慰剂和单剂量 RU486 10 m g,然后于 L H 7内膜活检 ,利用免疫组织化学方法探查用药前后植入期子宫内膜整合素 (α1 β1 、α4β1 、αvβ3)、L IF、PR、DBA等着色的变化。结果发现 :1整合素α1 β1 、α4β1 在腺上皮的表达于服药后显著增加 (L H- 2…     

人精子质膜孕激素受体研究

目的 :观察人精子表面孕激素受体 (PR)的定位及阳性表达率。　方法 :精子体外获能后 ,应用异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白 孕酮复合物 (P BSA FITC)染色 ,荧光显微镜观察及流式细胞术 (FCM )定量分析法 ,分别观察与孕酮 (P)结合精子形态及标记精子所占比例。　结果 :P BSA FITC染色精子的形态主要表现为 2种类型 :整个顶体区域或仅赤道区呈绿色荧光 ,顶体后区及尾部不着色。与P结合精子的百分率为 (30 2± 2 4 ) %。　结论 :人精子顶体表面有PR表达 ,且这种表达呈选择性     

脑梗死患者进行治疗前后血浆Hcy、ET和NPY联检的临床意义

目的：探讨了脑梗死患者治疗前后血浆同型半胱氨酸（Hcy）、内皮素（ET）和神经肽Y（NPY）水平的变化。方法：应用ELISA测定39例脑梗死患者血浆Hcy和放免法测定ET和NPY水平，并与35名正常健康人作比较。结果：脑梗死患者在治疗前血浆Hcy、ET、NPY水平非常显著地高于正常人组（P〈0．01），治疗后3个月仍高于正常人组水平（P〈0．05）。结论：测定脑梗死患者血浆Hcy、ET、NPY水平对观察病情和预后判定具有重要的临床价值。     

围排卵期应用左炔诺孕酮对着床期子宫内膜整合素表达的影响

目的:研究合成孕激素左炔诺孕酮对子宫内膜着床期整合素亚单位表达的影响。方法:20名妇女,随机分为两组,在LH-2日(LH-2组)或LH+2日(LH+2组)服用左炔诺孕酮0.75 mg/次,bid。每组妇女在服药周期前一个周期于LH-2日或LH+2日服用安慰剂,作为对照周期。两组均以超声波和尿LH峰检测确定服药日。每一周期均于LH+7日取子宫内膜标本。用整合素亚单位a1、a4、avb3抗体,以免疫组化和计算机图象分析方法检测和评价这些亚单位的表达。结果:两组在服用左炔诺酮后亚单位a1染色强度降低,但avb3无变化。亚单位a4在LH-2组明显降低,在LH+2组则差别不明显,而两组集合也是明显降低的。结论:妇女紧急避孕应用左炔诺酮后,其子宫内膜整合素亚单位a1和a4的表达与甾体激素的调控密切相关,有关机理尚需进一步研究。     

痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠HSP70表达的影响

目的观察痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠滑膜组织热休克蛋白(HSP)70表达的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为5组,每组12只。除空白组外,均采用尿酸钠注射大鼠右踝关节诱发急性痛风性关节炎,药物组分别给予痛风宁高、低剂量,秋水仙碱治疗。给药5 d后,采用HE染色法观察大鼠右踝关节炎症改变,免疫组化LSAB法检测HSP70表达情况。结果与模型组相比,痛风宁治疗组大鼠右踝关节病理切片炎症浸润度、关节肿胀度均明显改善;且大鼠右踝关节滑膜组织HSP70的表达量明显升高。结论痛风宁治疗急性痛风性关节炎明确有效,诱导体内HSP70的高表达是其治疗急性痛风性关节炎的重要作用途径之一。     

APC蛋白功能区域重组质粒的构建及其在结肠癌细胞株HCT-116中的表达

 目的　构建并鉴定含有APC蛋白不同功能区域的真核细胞表达载体pEGFP-N3-APC1～5,转染人类结直肠癌细胞HCT-116,观察重组质粒在细胞内的表达。方法　根据APC基因的功能结构以及APC突变簇集区的特点,设计特异性引物扩增APC基因特异性的功能区域片段。将扩增出的5个APC片段克隆到pEGFP-N3载体的N端,经测序分析对重组质粒pEGFP-N3-APC1～5进行鉴定。使用脂质体转染法将重组质粒转染人类结直肠癌细胞HCT-116,通过观察细胞中绿色荧光蛋白的表达情况来检测APC功能区域在细胞内的表达。以RT-PCR法进一步验证重组质粒在细胞中的表达。结果　构建5个pEGFP-N3-APC结构区域的重组真核表达载体,重组真核表达载体转染HCT-116细胞后,细胞中均可见绿色荧光蛋白的表达。RT-PCR结果显示,5个重组质粒在HCT-116细胞中均可表达。结论　真核细胞表达载体pEGFP-N3-APC1～5的成功构建,为进一步研究其在细胞内的功能,筛选结直肠癌基因治疗的有效且易于基因操作的靶标片段提供了基础。础。     

APC不同功能区域对结肠癌细胞株HT-29中β-连环蛋白表达的影响

目的:探讨含有APC蛋白不同功能区域的pEGFP-N3-APC重组质粒对结肠癌细胞株HT-29中β-连环蛋白表达的影响.方法:脂质体介导重组质粒pEGFP-N3-APC1～5转染HT-29,采用绿色荧光及RT-PCR验证重组质粒在细胞中的表达.以Western免疫印迹检测转染后HT-29细胞中β-连环蛋白的表达,以SPSS 13.0软件分析电泳条带的灰度值.结果:重组质粒转染HT-29细胞后,绿色荧光及RT-PCR结果显示5个APC蛋白不同功能区域多肽可在细胞中表达.Western免疫印迹结果显示,重组质粒pEGFP-N3-APC1,pEGFP-N3-APC2和pEGFP-N3-APC3对β-连环蛋白表达无影响,而pEGFP-N3-APC4和pEGFP-N3-APC5均可降低结肠癌细胞株HT-29中β-连环蛋白的表达水平,其中以pEGFP-N3-APC5的抑制程度最强.结论:含有APC蛋白中15氨基重复序列+SAMP重复序列的APC5基因片段既可有效降低β-连环蛋白的表达,同时又是相对长度较短的可用于基因治疗的最优片段.     

小剂量米非司酮对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响

通过口服米非司酮 ( RU486)改变子宫内膜的发育进程 ,观察内膜 H OXA11基因表达量的变化 ,以及与孕酮受体 ( PR)和白血病抑制因子 ( L IF)表达的相互关系。 13例月经周期正常志愿者观察两个周期。于对照周期的分泌中期取内膜。实验周期排卵前或后一次性口服 RU48610 mg,分泌中期取内膜 ,用原位杂交和免疫组织化学方法检测H OXA11、PR及 LIF的表达。结果 :对照周期内膜腺上皮 H OXA11和 PR呈阴性或弱阳性表达。服药后 ,腺上皮 H OXA11和 PR表达强度大多增加 ,而 LIF的表达强度大多下降 ;基质细胞的表达量变化无明显规律。提示 H OXA11基因的表达与孕激素及其受体密切相关 ;分泌中期腺上皮 H OX A11和 PR表达下降或消失是内膜分化成熟的重要标志 ;也是 L IF分泌达高峰的前提。     

围排卵期单次小剂量米非司酮对人类植入期子宫内膜的影响

目的:探讨小剂量米非司酮用于紧急避孕的理论基础。方法:11名具正常生育能力的健康妇女随机分为两组:LH—2组(n=5)和LH+2组(n=6),于对照周期和实验周期分别在LH—2或LH+2一次性口服安慰剂和米非司酮10mg,在两个周期的LH+7各取一次子宫内膜,利用形态学、免疫组化、凝集素组化等手段,研究用药前后子宫内膜发育、孕酮受体(PR)着色及双花扁豆凝集素(DBA)结合的改变。结果:服用米非司酮未扰乱正常的月经节律,但明显抑制了子宫内膜的发育。腺上皮PR的着色于服药后显著加强,而DBA的结合则明显减弱。结论:单次小剂量来非司酮可影响子宫内膜的发育及分泌活性,这可能正是其有紧急避孕效果的基础。     

重组质粒pEGFP-N3-APC在结肠癌细胞株HT-29中的表达

【目的】构建含有APC蛋白功能区域的pEGFP-N3-APC重组质粒,转染结肠癌细胞HT-29,观察重组质粒的表达。【方法】设计引物分别扩增5条APC基因功能区域片段。将扩增片段与pEGFP-N3载体连接后挑取阳性克隆,行菌落PCR和测序鉴定。使用Lipofectamine 2000将重组质粒转染结肠癌细胞株HT-29,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达。【结果】构建5条带有APC不同结构域重组真核表达载体pEGFP-N3-APC,重组真核表达载体转染HT-29细胞后,可观察到绿色荧光蛋白的表达。【结论】真核细胞表达载体pEGFP-N3-APC的成功构建,为进一步研究其在细胞内的功能提供了基础。