大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及其mRNA表达的影响

目的 研究大枣中性多糖（JDP-N）对小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）分泌肿瘤坏死因子（TNF）及其mRNA表达水平的影响。方法 MTT法测定细胞增殖,半定量RT-PCR测定TNF-α mRNA的表达。结果 JDP-N能诱导Mφ分泌TNF,诱生TNF达峰时间约为6 h,与脂多糖相比,时效关系相仿;蛋白激酶C激活在JDP-N诱导Mφ分泌TNF过程中具有关键性作用;JDP-N能促进MφTNF-α mRNA的表达。结论 JDP-N增强小鼠免疫功能的机制之一是促进Mφ分泌TNF。     

大枣中性多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的 研究大枣中性多糖（JDP－N）对小鼠脾细胞增殖作用及其对刀豆素A（ConA)活化脾细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)的影响。方法 采用MTT法测定增殖程度,用激光扫描共聚焦显微镜技术测定细胞内[Ca^2 ]i。结果 JDP－N能促进小鼠脾细胞自发增殖反应和混合淋巴细胞培养反应,但对经ConA活化、IL－2诱导的脾细胞无促进增殖作用,且对ConA活化的脾细胞内[Ca^2 ]i无影响。结论 JDP－N仅对未活化的小鼠脾细胞有促进增殖作用。     

小檗碱对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响

目的观察小檗碱对脂多糖（LPS）、白细胞介素－4（IL－4）诱导的小鼠RAW264．7细胞极化的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264．7,模型组和给药组分别加入LPS （终浓度100 ng／mL）或IL－4（终浓度10 ng／mL）,给药组用终浓度20μmol／L的小檗碱分别进行干预,同时空白对照组给予等体积磷酸盐缓冲液（PBS）。采用荧光定量聚合酶链反应检测精氨酸酶－1（ Arg－1）、一氧化氮合酶（ iNOS）、细胞因子信号传导抑制蛋白2（ SOCS2）、细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）的mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及IL－10的分泌量。结果小檗碱对LPS刺激的巨噬细胞TNF－α分泌量的增加以及iNOS、 SOCS3 mRNA表达水平的上升均有显著的下调作用（P＜0．05或P＜0．01）;对IL－4刺激的巨噬细胞IL－10分泌量的增加和Arg－1 mRNA表达水平的上升均有显著下调作用（P＜0．05）,而对SOCS2 mRNA的表达无显著影响（P＞0．05）。结论小檗碱能抑制巨噬细胞向M1型极化,亦能抑制巨噬细胞向M2型极化,提示其可能在维持M1／M2动态平衡中发挥调节作用。     

胸腺素α原的生物学活性及基因表达谱芯片分析

目的：对一个新的胸腺素α原（human prothymosina,ProTα）进行生物学活性研究及基因表达谱分析，方法：用体外刺激小鼠脾细胞增殖进行实验及ELISA法检测ProTα对IL－2和TNF－α的诱导分泌作用，并用基因芯片技术对其表达谱进行分析，结果：ProTα对小鼠脾细胞有明显的促进增殖作用，对IL－2和TNF－α有明显的诱导分泌作用（P＜0．01），基因芯片研究发现ProTa对蛋白酷氨酸磷酸酶基因，淋巴细胞抗原6复合体，增殖相关基因A等的表达有上调作用。结论：该新型ProTα在体外实验中有免疫调节活性，并诱导一些基因的表达。     

人参皂甙对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的作用及机制探讨

目的：研究人参皂甙Rg1和Rb1对脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（AM）过度分泌肿瘤坏死因子（TNF－α）的影响,并探讨人参皂甙的作用机制。方法;体外培养小鼠AM,分为对照组、LPS组、RG1 LPS组、Rg1组和Rb1 LPS组,Rb1组。分别收集培养细胞及上清液,测定上清TNF－α水平、上清LPS水平以及细胞中1－κB表达情况。结果：LPS可使AM分泌大量TNF－α（P＜0．01）,并使I－κB表达明显减少（P＜0．01）。Rg1 LPS组与LPS组相比,上清TNF－α水平显著下降（P＜0．01）,细胞内I－κB表达明显增加（P＜0．01）。Rgl LPS组上清游离LPS水平明显高于LPS组（P＜0．05）。Rb1的作用结果与Rg1相似。结论：人参皂甙Rg1和Rb1在体外能抑制AM过量分泌TNF－α,其可能作用机制为通过阻断LPS与AM膜的结合,抑制LPS诱导的细胞内I－κB的低表达,从而使TNF－α的分泌水平下降。     

人肾脏近曲小管上皮细胞补体C3基因表达及意义

目的 研究体外培养的人肾近曲小管上皮细胞（PTEC）自身及在肿瘤坏死因子α（TNFα）诱导C3mRNA的表达。方法 体外培养来源于人正常肾组织的PTEC,并以不同浓度和不同时间TNFα进行诱导,采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法对其C3mRNA表达进行半定量分析。结果 未经任何刺激的PTEC可表达C3mRNA,并在TNFα诱导后显著增强,呈剂量和时间依赖。结论 致炎细胞因子TNFα能明显上调人肾脏PTEC补体C3mRNA的表达。     

地塞米松抑制小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素—18的表达

目的：研究糖皮质激素（GC）对小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）IL-18表达的调控作用。方法：以半定量RT-PCR法检测经不同浓度地塞米松（Dex）处理的Mφ脂多糖（LPS）诱导的IL-18mRNA的表达,以ELISA法检测Mφ培养上清IL-18的含量。结果：Dex剂量依赖性地抑制MφLPS诱导的IL-18mRNA及等抑制作用可被糖皮质激素受体拮抗剂-RU486阻断。结论：GC能抑制MφLPS诱导的IL-18的表达。     

紫外线辐射对小鼠分泌肿瘤坏死因子α的影响

目的：研究紫外线辐射对小鼠血清肿瘤坏死因子α（TNFα）水平和脾细胞TNFα mRNA表达的影响,从而探讨紫外线辐射所致免疫抑制的作用机制。方法：用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中TNFα含量。一步法提取脾细胞RNA,逆转录聚合酶链反应检测其TNFα mRNA表达。结果：一定剂量的紫外线辐射不能使小鼠血清中出现可检测的TNFα（P＞0．05）,但可使诱生的TNFα水平下降（P＜0．01）,辐射剂量与TNFα的浓度呈直线负相关（P＜0．01）。脾细胞TNFαmRNA表达被抑制（Ｐ＜０．００１）２。结论：紫外线辐射可能是通过抑制具有分泌TNFα功能的淋巴细胞和（或）单核巨噬细胞的TNFα mRNA转录,进而抑制TNFα的分泌,调节机体的免疫反应。     

DMN所致小鼠肝损伤模型中血清IL-18和肝脏TNF-α mRNA的表达

目的 观察二甲基亚硝胺（DMN）诱导实验性肝损伤模型过程中，小鼠血清IL－18及脏脏TNF－αmRNA表达的动态变化。方法 0．1％DMN腹腔注射，制备小鼠实验性肝损伤模型。用ELASA法测定血清IL－18水平，半定量逆转录聚酶链反应（RT－PCR）检测肝组织TNF－αmRNA的表达。结果 随着肝脏炎症坏死程度的加重，血清IL－18水平及肝脏TNF－αmRNA的表达逐渐增加，均于第5次注射DMN后达到最高峰（P＜0．01），损伤后自行恢复期内明显回落。两者呈正相关趋势。结论 IL－18，TNF－α均参与了DMN诱导的肝脏毒性反应，具有协同的促炎性，两者在肝损伤的自行恢复中发挥了一定作用。     

TNF—α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI—1的细胞及其机制

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF－α）或弱氧化修饰低密度脂蛋白（mmLDL)对人脐静脉内皮细胞（HUVECs)PAI－1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法：用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI－1的活性,用Northern印迹分析法检测PAI－1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C（PKC）或促分裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK）抑制剂干预上述诱导实验。结果：TNF－α或mmLDL作用HUVEC后,PAI－1活性和mRNA基因表达均明显增加,促分裂原活化蛋白激酶－激酶（MAPKK）的抑制剂PD98059（60μmol/L)能明显阻断TNF－α（100U／ml)或mmLDL(50μg/ml)对PAI－1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmoo/L)和H7（15μmol/L)无显著阻断作用。结论：（1）TNFα或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI－1尖性与mRNA表达;（2）PAI－1活性提高与其mRNA表达增加有关。（3）MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI－1表达中起重要作用。     

黄芪总苷对血吸虫虫卵抗原活化的大鼠腹腔巨噬细胞TNFα mRNA表达及分泌的影响

目的:观察黄芪总苷(astragalosides,AST)对血吸虫虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)活化的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφs)TNFαmRNA表达及上清液中TNFα分泌的影响。方法:采用RT-PCR技术及放射免疫法检测在SEA(10 mg/L)的刺激下,AST与大鼠腹腔巨噬细胞共育6 h时,TNFαmRNA表达水平及上清液中TNFα分泌水平。结果:黄芪总苷(10,20 mg/L)能明显降低SEA(10 mg/L)刺激的大鼠PMφs中TNFα mRNA表达及上清液中TNFα分泌水平(P<0.05),且呈药物浓度依赖性趋势。结论:AST对SEA刺激引发的大鼠PMφs TNFα mRNA表达及分泌有明显的抑制作用。     

旁路活化补体对巨噬细胞分泌功能影响的实验研究

目的：为探讨旁路活化补体对小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)分泌一氧化氮(N0)、诱导型N0合成酶(iNOS)、TNF—α和O2—炎性介质的影响。方法：单层培养的小鼠腹腔巨噬细胞上加酵母多糖活化人血清(ZAHS)，分别测定胞外N0、iNOS、TNF—α和胞内02—4项指标，并用抗C3、C5a血清阻断实验。结果：①ZAHS作用6h以后，Mφ能分泌过量的N0，iNOS活性明显增强，N0与iNOS两的变化呈正相关。②0．35ml ZAHS作用2h胞内的O2—水平明显高于正常对照组的，2h之后逐渐下降。ZAHS作用6—12hTNF—α也明显升高。②抗C3、C5a血清能明显阻断Mφ释放炎性介质，其阻断保护效应分别为N0(64．01％)＞iNOS(62．67%)＞TNF—α(39．52％)＞02—(34．15％)。结论：旁路活化补体碎片C3b、C5a能诱导Mφ分泌大量的N0、C2—和TNF—α，这些过量的炎性介质引起组织损伤和诱发并发机会感染的发生。     

当归醇沉淀及其中性组份体外对巨噬细胞分泌TNF—α和IL—1的影响

目的 观察当归醇沉物（ESA）及其中性组分（ESA－1）体外对小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF－α、IL－1的影响。方法 L929细胞株细胞毒法制TNF－α、IL-1。结果 ESA、ESA－1与小鼠腹腔巨噬细胞（MΦ）共同培养可显著增强其TNF－α、IL-1的分泌。在50－20μg/mL浓度范围，ESA的这种作用呈剂量依赖性；ESA－1虽有明显的作用，但未表现出剂量依赖。结论 当归醇沉物及其中性组分体外可增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF－α、IL-1。     

地塞米松对肾小球系膜细胞肿瘤坏死因子α产生和基因表达的影响

为观察地塞米松对内毒素诱导的肾小球系膜细胞肿瘤坏死因子α（TNFα）的产生及其mRNA表达的影响，采用免疫学和分子生物学方法，对正常、内毒素诱导后及加入地塞米松的内毒素诱导后大鼠系膜细胞的TNFα水平及TNFαmRNA表达进行了检测。结果：（1）TNFα在正常系膜细胞中分泌量极微，TNFαmRNA的表达处于低水平；（2）内毒素诱导系膜细胞TNFα的产生及mRNA表达增加；（3）地塞米松对内毒素诱导的系膜细胞TNFα的产生及其mRNA表达有明显的抑制作用，呈剂量依赖关系。结论：地塞米松是系膜产生细胞团子TNFα的较强抑制剂。     

肿瘤坏死因子α对肾小管上皮细胞ICAM—1表达的调控

目的：研究肿瘤坏死α（TNFα）对大鼠肾小管上皮细胞表达细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的调控作用。方法：用不同浓度（1、10、50ng/ml)TNFα分别与大鼠肾小管上皮细胞（NRK－52E细胞）共同孵育1、4、12、24小时，用蛋白质印迹法（Western Blot)和逆转录聚合酶链反应技术（RT－PCR）分别观察ICAM－1的蛋白质和mRNA的表达水平。结果：正常对照组的肾小管上皮细胞低水平表达ICAM－1，在实验组中TNFα呈剂量依赖地诱导肾小管上皮细胞的ICAM－1的蛋白质和基因表达上调，蛋白质表达高峰在4小时，mRNA表达高峰在12小时。结论：肿瘤坏死因子α（TNFα）可能通过诱导肾小管上皮细胞表达ICAM－1增强而参与肾小管间质的免疫炎症反应。     

从诱导树突状细胞成熟角度探讨枸杞多糖联合CXC趋化因子配体10抗癌作用机制

【目的】检测外周血诱导树突状细胞（dendritic cells, DC）功能成熟的关键性细胞因子水平变化以及肿瘤组织S－100蛋白表达情况,探讨枸杞多糖（LBP）单用或联合CXC趋化因子配体10（CXCL10）对DC功能成熟潜在的影响,进一步揭示LBP抗实验性肝癌的作用机制。【方法】建立H22荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、 LBP （50 mg／kg灌胃）组、 LBP ＋CXCL10（50 mg／kg灌胃＋15μg／kg右胁皮下注射）组、 CXCL10（15μg／kg右胁皮下注射）组、5-氟尿嘧啶（5－FU,12 mg／kg腹腔注射）组,每组12只。每天给药1次,连续2周后眼球取血,分离小鼠肿瘤、脾脏、胸腺,计算肿瘤抑制率、脾脏指数及胸腺指数。采用荧光定量PCR技术检测外周血白细胞介素－12（IL-12）及肿瘤坏死因子－α（TNF－α） mRNA表达,免疫组织化学法检测S－100蛋白在肿瘤间质浸润DC的表达。【结果】与模型组比较, LBP组及LBP＋CXCL10组对肿瘤生长具有明显的抑制作用,肿瘤抑制率分别达到55．90％、50．91％,且能显著提高外周血IL-12、 TNF－αmRNA表达, IL－12表达分别上调了2．94、3．39倍, TNF－α分别上调1．55、4．74倍,差异均有统计学意义（P＜0．05或P＜0．01）;免疫组织化学检查结果显示LBP组及LBP＋CXCL10组S－100＋DC数量显著高于模型组（P＜0．05）。【结论】 LBP及LBP＋CXCL10具明显的抗实验性肝癌作用,其作用机制与诱导DC功能成熟的关键性细胞因子IL－12、 TNF－α分泌,增加肿瘤微环境的DC数量有关。     

PDTC对创伤性肺损伤大鼠肺组织TNFα、IL-8含量及其mRNA表达的影响

目的 观察PDTC对创伤后肺组织TNFα、IL－8含量及其mRNA表达的影响。方法 80中大鼠分为创伤组（T组）,PDTC预处理组（P组）及对照组（C组）,利用多功能小型生物撞击机致伤,观测伤后各组0．5、1、2、4、8h肺组织TNFα、IL－8及其mRNA变化。结果 致伤后TNFα、IL－8含量及其mRNA表达明显升高,TNFα在伤后1h达到峰值,IL－8在伤后4h达到峰值;PDTC组TNFα、IL－8含量及其mRNA表达显著低于创伤组（P＜0．01）。结论 PDTC可以通过抑制TNFα、IL－8mRNA表达,减少致炎细胞因子的释放,减轻创伤后全身及肺组织的炎症损害。     

白细胞介素-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植对小鼠免疫功能的影响

目的：观察表达mIL-18的重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞（AdmIL-18/BNL.CL2)经脾移植对正常小鼠免疫功能的影响。方法：实验组小鼠经脾移植AdmIL-18/BNL.CL2，同时设LacZ病毒对照组（Ad-LacZ/BNL.CL2),BNL.CL2细胞对照组及空白对照组。2周后处死，留取血清，制备腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞、肝组织匀浆液，提取肝组织总RNA。采用ELISA法检测各组小鼠血清、腹腔Mφ和脾细胞培养上清、肝匀浆中细胞因子的含量；采用半定量RT－PCR法，检测肝组织细胞因子mRNA相对表达量；以LDH释放法测定腹腔Mφ杀伤活性和脾NK细胞活性，用MTT还原比色法测定脾淋巴细胞的增殖活性。结果：实验组小鼠血清、细胞培养上清及肝匀浆中，IL－18、IL－2、IFN－γ、TNF-α稔均高于其它对照组，而IL－4、IL－10水平则低于对照组；半定量RT－PCR结果与ELISA检测结果一致；同时，实验组腹腔Mφ的杀伤活性和脾NK细胞活性，及脾淋巴细胞增殖活性也明显高于对照组。结论：AdmIL-18能有效转染至胎肝细胞并稳定表达mIL-18;AdmIL-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植后，可显著提高肝脏、脾脏免疫细胞活性，活化腹腔Mφ，促进Th1类细胞因子表达，抑制Th2类细胞因子的分泌。     

缺血再灌注损伤增加肾组织免疫原性的实验研究

目的：观察缺血再灌注损伤对肾组织免疫原性的影响。方法：在大鼠单肾热缺血再灌注损伤模型的基础上，利用逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）半定量技术检测不同损伤程度的肾组织中共刺激分子B7、炎性细胞因子IL－2、TNF－α的mRNA表达水平。结果：正常和缺血肾组织中B7、TNF－α、IL－2的mRNA表达处于极低水平，再灌注后肾组织中B7、TNF－α、IL－2的mRNA的表达开始逐渐升高，并于再灌注后72h达高峰，缺血60min再灌注组的B7、IL－2、TNF－α的mRNA的表达水平明显高于缺血30min再灌注组（P＜0.05）。结论：缺血再灌注损伤使共刺激分子B7、炎性细胞因子TNF－α、IL－2的mRNA表达升高，提示缺血再灌注损伤可使移植肾免疫原性升高，炎症反应加强，这些均能促进急性排斥反应的发生。     

Chu苓多糖抗小鼠HepA机制的研究

目的：研究Chu苓多糖抗小鼠HepA瘤细胞的可能机制。方法：采用免疫组化方法研究Chu苓多糖对小鼠HepA瘤细胞P16、Rb基因及TNF－α表达影响。结果：Chu苓多糖作用后，小鼠HepA瘤细胞P16基因表达蛋白（P16蛋白）表达显著增强（P＜0．01）；小鼠HepA瘤细胞Rb基因表达蛋白（P105－Rb）表达增强（P＜0．05），小鼠HepA瘤细胞TNF－α表达显著增强（P＜0．01）。结论：Chu苓多糖对小鼠HepA瘤细胞P16、Rb基因及TNF－α表达有激活作用。对抑癌基因P16、Rb基因及TNF－α表达的激活可能是Chu苓多糖抗肿瘤的普遍机制之一。