人参总皂苷对黑色素瘤自杀基因治疗的增效作用

[目的]观察人参总皂苷联合自杀基因HSV-tk/GCV治疗系统对小鼠黑色素瘤的生长抑制效应,探讨人参总皂苷对黑色素瘤自杀基因治疗的增效作用.[方法]选用85只C57BL/6J雄性小鼠,除正常组5只外其他均接种含20%B16tk+细胞的tk+和tk-混合细胞,造模成功后随机分为模型组、人参总皂苷组、tk/GCV组、人参总...     

吴茱萸碱联合RO3306对人肝癌细胞HepG2的协同抑制

[目的]探讨吴茱萸碱(EVO)联合细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDKl)的特异抑制剂RO3306对人肝癌细胞HepG2的生长抑制、诱导凋亡是否具有协同增效作用.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测EVO诱导不可逆凋亡的时间转折点;采用MTT法、集落形成法、PI单染流式细胞术检测EVO...     

生物化学设计性实验教学与创新思维能力的培养

生物化学实验课是理解和掌握其理论知识的重要环节,而自行设计、研究型实验是以学生为本,培养学生创新思维、分析和解决问题能力的高层次教学模式.根据中医药大学教学和学生特点,以设计性研究型实验为手段,从题目和内容选择、教学实施步骤及结果处理和分析,探讨对学生创新思维能力的培养.     

芹菜素对自杀基因治疗系统杀伤人黑色素瘤细胞株A375的增效作用

目的研究芹菜素对单纯疱疹病毒1型胸苷激酶/更昔洛韦(HSV1-tk/GCV)自杀基因杀伤人黑色素瘤细胞株A375的增效作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测芹菜素对A375(tk~-)细胞生长的影响,及自杀基因治疗系统联合芹菜素对含20%A375-tk/GFP(tk~+)细胞的tk~+和tk~-混合细胞的杀伤效应的影响,流式细胞仪荧光示踪法分析缝隙连接通讯(GJIC)功能、细胞凋亡变化。结果芹菜素作用A375细胞24,48,72 h的半数抑制量(IC_(50))分别为86.34,25.81,11.16μmol·L~(-1),选用2.5~20μmol·L~(-1)芹菜素进行后续试验;5,10,20μmol·L~(-1)芹菜素联合GCV组对肿瘤细胞的抑制率明显比芹菜素组和GCV组高(P0.01),协同性分析金正均Q值分别为2.03,1.43和1.36;2.5,5,10μmol·L~(-1)芹菜素处理A375细胞48 h后,各组绿色荧光细胞比值为:0.333±0.003,0.393±0.006,1.105±0.094,芹菜素各组比值均明显高于空白对照组(P0.01);芹菜素联合GCV各组,与空白对照组、GCV组、芹菜素各组比较,可以增加细胞晚期凋亡率,趋势与MTT结果一致。结论芹菜素可以提高tk~+和tk~-混合细胞对GCV的敏感性,具有协同增强自杀基因系统杀伤效应的作用,其机制可能与芹菜素能够促进A375细胞GJIC功能及诱导细胞凋亡有关。     

连黛胶囊抗胃癌的药理特性与临床应用

目的观察连黛胶囊防治胃癌的药理活性与临床疗效方法采用MNNG诱发胃癌大鼠进行药理实验,基因蛋白表达用免疫组化法检测,细胞分子药理采用甲基绿-派诺宁染色、吖啶橙染色、原位末端标记、琼脂凝胶电泳、免疫组化、MTT、流式细胞仪分析、615近交系小鼠皮下成瘤等方法进行,药理基因差异条带检测采用mRNA差异显示法,临床观察随机单盲设计结果试药灌胃使大鼠胃癌发生率明显降低,使p21ras和c-erbB2表达阴性(对照组阳性).试药血清可抑制MGC-803细胞生长和诱导细胞凋亡.盐酸小檗碱(试药的主要有效成分)可使SGC-7901和MGC-803细胞软琼脂集落形成率降低,增殖抑制及移植成瘤率降低;能抑制MGC-803细胞生长,诱导细胞凋亡,使bcl-2弱阳性表达;能抑制BGC-823细胞生长,并出现基因差异显示条带.临床观察31例胃肠癌患者,服药1mo能改善证候,提高生存质量,提高NK细胞和CD3水平.结论连黛胶囊具有防治胃癌的功效,作用机制与抑制癌基因蛋白过表达和诱导癌细胞凋亡有关,有药理作用靶基因存在.     

自杀基因联合中医药疗法治疗肿瘤的设想

自杀基因疗法是一种具有良好应用前景的肿瘤治疗新措施。但如何有效提高疗效是目前仍须解决的关键性问题。由于免疫机制在自杀基因疗法旁杀伤效应中的重要作用，激活荷瘤机体的免疫功能，改善自杀基因抗肿瘤作用的炎症免疫微环境，是提高肿瘤自杀基因疗法疗效的主要策略。中医中药在调节机体免疫状态方面具有肯定的作用，与其他方法比较具有明显优势。因而，将自杀基因疗法与中医中药联合应用，有可能起到提高肿瘤自杀基因疗法疗效，防止肿瘤复发的作用。提出了自杀基因联合中医药疗法治疗肿瘤的新设想，为肿瘤基因治疗提供了一种新的思路和模式。     

纯中药复方消癌根治疗小鼠移植性肝癌的实验研究

纯中药复方消癌根由化州市丽岗董草原中医诊所民间中医师董草原先生提供。据有关报道,该方对肝癌有较好的临床疗效。本项研究对复方消癌根治疗小鼠移植性肝癌进行了初步的实验探讨,主要研究其对小鼠移植性肝癌的生长抑制作用和生存期的影响。1.材料与方法1.1材料1.11细胞株和细胞培养器材小鼠肝癌细胞株H22购自中山大学实验动物中心,细胞培养基RPMI1640为GIBCO公司产品,新生牛血清为杭州四季青公司产品。BNA-3210型CO2培养箱(日本ESPEC)。1.12受试药物纯中药复方消癌根药粉及其配药液均由化州市中医师董草原提供。其药分为两部分,(1…     

丹参注射液对自杀基因tk/GCV系统的协同增效作用

目的探讨丹参注射液联合自杀基因系统对大鼠肝癌细胞和小鼠移植瘤的作用。方法①丹参注射液以不同浓度与GCV分别或共同作用于大鼠肝癌CBRH7919的tk-细胞,以及含5%tk+的tk+、tk-混合细胞,MTT法检测各组存活率,用Q值(实测药效与理论药效的比值)分析中药与自杀基因系统联合的相互作用是否有协同性,0.85≤Q<1.15为相加;Q≥1.15为协同。②把小鼠肝癌细胞H22/tk(tk+)与H22(tk-)细胞按1∶4混合,再按2×106细胞/只接种到Balb/c纯系小鼠腋下皮下组织内,随机分为模型组、丹参(注射液)组、tk/GCV组、tk/GCV联合丹参注射液治疗的联合组,n=9~11;中药治疗从d 2起共15 d,自杀基因系统治疗从长出肿瘤后开始共10 d,进行疗效观察。结果①各组存活率tk/GCV组为63.10%±2.17%,GCV组为67.03%±2.81%,5 ml.L-1丹参联合tk/GCV组为26.67%±4.23%(Q=1.22),5 ml.L-1丹参+GCV组为42.17%±5.36%(Q=1.04);10 ml.L-1丹参联合tk/GCV组为18.10%±5.56%(Q=1.26),10 ml.L-1丹参+GCV组为33.84%±9.84%(Q=1.06)。②接种后各组均在d 7触摸到肿瘤,成瘤率100%。联合组在治疗后肿瘤生长呈现明显抑制,最终肿瘤体积(1.53±0.88)cm3,比模型组(3.19±1.76)cm3减少52.01%(P<0.05);肿瘤质量(1.32±0.80)g,比模型组(2.28±1.20)g减少42.11%(P<0.05),差异有统计学意义。丹参组、tk/GCV组肿瘤体积、瘤块质量与模型组比较差异均无统计学意义。结论丹参注射液能提高自杀基因系统对大鼠肝癌细胞的杀伤力和对小鼠肝癌细胞移植瘤的抑制作用,两者联合作用的协同性提示丹参注射液能增强自杀基因旁观者效应。     

RFDD-PCR技术用于构建证的相关基因表达谱初探

目的　运用限制性酶切片段差异显示 (RFDD -PCR)技术初步筛选支气管哮喘肾虚证的相关基因 ,以冀探讨构建中医证的相关基因表达谱的一种研究方法。方法　应用RFDD -PCR技术 ,收集支气管哮喘肾虚证患者治疗前后外周血 ,分离其总RNA ,进行DNaseI处理、合成双链cDNA、TaqI限切酶酶切、在其两端连上接头、特异配对于接头的引物来降落PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、AgNO3 染色、回收差异条带并重新PCR扩增、反向斑点杂交、测序、生物信息学分析。结果　共找到 36条差异条带 ,其中 2 5条能用斑点杂交验证 ,选取 3条测序 ,结果与基因库比较未发现同源序列。结论　 3条基因片段可能是与支气管哮喘肾虚证相关的新基因 ;RFDD -PCR技术不失为构建中医证的相关基因表达谱的一种好方法。