六味地黄丸增效小鼠黑色素瘤HSV-tk/GCV 自杀基因疗法的免疫机制

目的明确六味地黄丸是否增强单纯疱疹病毒核苷激酶/更昔洛韦（HSV-tk/GCV）自杀基因疗法对小鼠黑 色素瘤的免疫杀伤效果,并对其相关机制进行探索。方法采用Western Blot 实验、免疫荧光实验检测六味地 黄丸对缝隙连接蛋白43（Cx43）表达水平及膜定位的影响;通过荧光黄染料、钙黄绿素荧光传输实验检测六味 地黄丸对小鼠黑色素瘤细胞B16（B16 细胞）缝隙连接通讯（GJIC）功能的影响;PI/Hoechst 染色实验检测CD8+ T 细胞对B16 细胞的免疫杀伤效果;CD8+ T 细胞激活实验观察GJIC 在六味地黄丸增强对小鼠黑色素瘤免疫杀 伤中的作用。结果自杀基因疗法联合六味地黄丸治疗较单独应用自杀基因疗法能更显著地抑制肿瘤生长; Western Blot 及免疫荧光实验显示六味地黄丸组Cx43 表达明显上调,荧光传输实验显示六味地黄丸组B16 细 胞GJIC 功能显著增强;PI/Hoechst 染色实验显示,六味地黄丸组CD8+ T 细胞对B16 细胞的免疫杀伤效果更加 显著,阻断Cx43 后,对B16 细胞的免疫杀伤效果则被逆转,同时CD8+ T 细胞的激活也被减弱。结论六味 地黄丸可通过上调B16 细胞中Cx43 的表达,改善GJIC 功能,促进肿瘤抗原的交叉提呈,更强地激活CD8+ T 细 胞以增强其对肿瘤细胞的免疫杀伤效果。     

吴茱萸碱联合RO3306对人肝癌细胞HepG2的协同抑制

[目的]探讨吴茱萸碱(EVO)联合细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDKl)的特异抑制剂RO3306对人肝癌细胞HepG2的生长抑制、诱导凋亡是否具有协同增效作用.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测EVO诱导不可逆凋亡的时间转折点;采用MTT法、集落形成法、PI单染流式细胞术检测EVO...     

人参总皂苷对黑色素瘤自杀基因治疗的增效作用

[目的]观察人参总皂苷联合自杀基因HSV-tk/GCV治疗系统对小鼠黑色素瘤的生长抑制效应,探讨人参总皂苷对黑色素瘤自杀基因治疗的增效作用.[方法]选用85只C57BL/6J雄性小鼠,除正常组5只外其他均接种含20%B16tk+细胞的tk+和tk-混合细胞,造模成功后随机分为模型组、人参总皂苷组、tk/GCV组、人参总...     

六味地黄汤抗胸腺和脾脏萎缩作用的实验研究

六味地黄丸 (汤 )是经典的滋阴补肾的代表方 ,在临床上用于治疗肾阴虚证 ,而肾阴虚证患者常伴有肾上腺皮质分泌功能亢进和糖皮质激素水平升高 ,糖皮质激素水平的升高常诱导淋巴细胞的凋亡。我们通过实验来研究其作用机理。1　实验材料1 1　实验动物　NIH小鼠 ,雄性 ,1 8～ 2 2 g ,健康、清洁级 ,由广州中医药大学动物中心提供。1 2　受试药物的制备　六味地黄汤组方 :熟地黄2 4g ,淮山药 1 2 g,山茱萸 1 2 g ,泽泻 9g ,茯苓 9g ,牡丹皮 9g。上述药材由本校第一附属医院中药房提供 ,经本校中药鉴定教研室鉴定。实验用水煎剂 ,将熟地黄、…     

中医刮痧渗出物中免疫成分及含量的研究

【目的】观察大鼠刮痧后皮下渗出物中免疫因子成分和血液成分的变化,显微镜下比较刮痧前后皮肤组织病理学改变。【方法】将SD大鼠分成2大组,分别为刮痧组、未刮痧组。2大组再各分为3小组,分别进行血液及皮肤白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)含量检测,血常规检测以及皮肤病理学观察。【结果】刮痧组大鼠血液白细胞总数显著升高(P0.05),皮肤IL-1β、IFN-γ含量显著升高(P0.05),血液溶血率显著上升(P0.05),但血液中IL-1β、IL-6、IFN-γ水平未见显著改变;显微镜下可见刮痧后皮肤严重水肿、血管充血扩张以及炎症细胞浸润。【结论】刮痧可快速调动机体免疫反应,"痧"中所含免疫成分有助于疾病的治疗。     

芹菜素对自杀基因治疗系统杀伤人黑色素瘤细胞株A375的增效作用

目的研究芹菜素对单纯疱疹病毒1型胸苷激酶/更昔洛韦(HSV1-tk/GCV)自杀基因杀伤人黑色素瘤细胞株A375的增效作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测芹菜素对A375(tk~-)细胞生长的影响,及自杀基因治疗系统联合芹菜素对含20%A375-tk/GFP(tk~+)细胞的tk~+和tk~-混合细胞的杀伤效应的影响,流式细胞仪荧光示踪法分析缝隙连接通讯(GJIC)功能、细胞凋亡变化。结果芹菜素作用A375细胞24,48,72 h的半数抑制量(IC_(50))分别为86.34,25.81,11.16μmol·L~(-1),选用2.5~20μmol·L~(-1)芹菜素进行后续试验;5,10,20μmol·L~(-1)芹菜素联合GCV组对肿瘤细胞的抑制率明显比芹菜素组和GCV组高(P0.01),协同性分析金正均Q值分别为2.03,1.43和1.36;2.5,5,10μmol·L~(-1)芹菜素处理A375细胞48 h后,各组绿色荧光细胞比值为:0.333±0.003,0.393±0.006,1.105±0.094,芹菜素各组比值均明显高于空白对照组(P0.01);芹菜素联合GCV各组,与空白对照组、GCV组、芹菜素各组比较,可以增加细胞晚期凋亡率,趋势与MTT结果一致。结论芹菜素可以提高tk~+和tk~-混合细胞对GCV的敏感性,具有协同增强自杀基因系统杀伤效应的作用,其机制可能与芹菜素能够促进A375细胞GJIC功能及诱导细胞凋亡有关。     

自杀基因联合中医药疗法治疗肿瘤的设想

自杀基因疗法是一种具有良好应用前景的肿瘤治疗新措施。但如何有效提高疗效是目前仍须解决的关键性问题。由于免疫机制在自杀基因疗法旁杀伤效应中的重要作用，激活荷瘤机体的免疫功能，改善自杀基因抗肿瘤作用的炎症免疫微环境，是提高肿瘤自杀基因疗法疗效的主要策略。中医中药在调节机体免疫状态方面具有肯定的作用，与其他方法比较具有明显优势。因而，将自杀基因疗法与中医中药联合应用，有可能起到提高肿瘤自杀基因疗法疗效，防止肿瘤复发的作用。提出了自杀基因联合中医药疗法治疗肿瘤的新设想，为肿瘤基因治疗提供了一种新的思路和模式。     

肾阴虚造型及补肾中药对小鼠免疫功能的影响

应用醋酸氢化可的松在小鼠体内复制肾阴虚证模型及在造型时给予补肾中药，以观察造型及补肾中药对免疫标胸腺、脾脏重量及脾细胞ＩＬ－２活性的影响。结果表明：造型使上述免疫指标民正常对照比较差别有非常显著性意义（Ｐ〈０．０１）；补肾阴中药对造型所致的免疫指标改变具有拮抗作用，与造型组比较每项指标差别都有非常显著性意义（Ｐ〈０．０１）。补肾阳中药则未见明显拮抗作用，反而使胸腺重量减轻更加明显，与造型组比较差别     

七厘散促小鼠触须部创面修复及部分机制探讨

目的:探讨七厘散在小鼠触须部皮肤修复中的作用。方法:无菌条件下去除小鼠双侧触须部皮肤,分为实验对照组,阳性药物对照组,七厘散内服组、外用组、内服+外用组。术后1d,3d,5d,7d取材,常规病理标本制作。制备七厘散含药血清,检测其对皮肤成纤维细胞的作用。结果:术后1～3d,,各组创面呈炎性反应,七厘散内服+外用组炎性反应较轻,七厘散内服+外用组、阳性药物对照组创面开始修复。术后5d,七厘散内服+外用组较其余各组成胶原纤维合成和分泌增加,真皮层较致密,新生表皮较厚,细胞分层明显。术后7d,七厘散内服+外用组表皮细胞分层明显,真皮致密,表皮-真皮连接牢固,其余各组表皮-真皮连接不牢固。七厘散含药血清能显著促进小鼠皮肤成纤维细胞的增殖。结论:七厘散通过抗炎、促进皮肤细胞增殖和分泌,促进创面修复。     

ID1对胃腺癌细胞株低分化维持作用的研究新思路

目的:探讨ID1对胃腺癌细胞株低分化维持作用.方法:检索国内外关于ID1基因功能研究进展、维甲酸受体与ID1基因的潜在相互作用及维甲酸受体通路研究进展.结果:体内外实验表明维甲酸等对胃低分化腺癌具有显著的分化诱导作用,但分化诱导机制有待进一步研究.结论:ID1基因潜在对胃癌细胞分化调节的作用,这种调节作用同时极有可能同时参与了维甲酸受体分化调节信号转导方面的过程,为进一步研究提供了新的思路.