寻常性银屑病患者外周血单个核细胞TLR4mRNA表达与TNF—α相关性

目的探讨寻常性银屑病患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体4（Toll-like receptor4,TLR4）的表达变化及其与血清中TNF—Q浓度的关系。方法采用荧光定量PCR技术检测寻常性银屑病患者外周血单个核细胞TLR4mRNA的表达,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清TNF—α的浓度。另取30例正常人作为对照组。结果寻常性银屑病患者外周血中PBMC的TLR4mRNA的表达较正常人对照组明显增高（P〈0．01）,TLRdmRNA表达与血清TNF-α浓度变化呈正相关（P〈0．05）。结论通过单核吞噬系统TLR4介导的,TNF-α大量产生,激活炎症级联反应可能是银屑病发病的重要病理机制之一。     

人外周血诱导DC1 DC2方法的初步探讨

目的：探讨人外周血单个核细胞(PBMC)体外诱导DCl、DC2的条件。方法：体外用细胞因子GM-CSF IL-4/ TNF-α及IL-3 G-CSF／ TNF-α来分别诱导DC。结果：用GM-CSF IL-4／ TNF-α诱导出CDl23^ DC2和CDl23^-DCl细胞，而采用G-CSF IL-3／ TNF-α未能诱导出CDl23^ 的DC2细胞。结论：用人的外周血单个核细胞，在体外用细胞因子组合GM-CSF IL-4／ TNF-α可以诱导出CDl23^ DC2和CDl23^-DCl细胞。     

热性惊厥患儿外周血单个核细胞分泌细胞因子的变化及意义

热性惊厥（febrile convulsion，FC）是儿科常见的疾病之-，其发病机制尚不完全明确。近年研究发现，FC与体内免疫功能紊乱有关，IL—1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）均广泛参与中枢神经系统免疫反应，在生理和病理条件下发挥重要的调节作用。目前与FC有关的细胞因子测定多限于外周血。血液中的IL-1β、IL-6、TNF-α主要由单核／巨噬细胞系统分泌，本文通过测定脂多糖（LPS）刺激后外周血单个核细胞（PBMC）分泌的IL—1β、IE-6、TNF-α水平，旨在了解FC的免疫学发病机制。     

体外诱导LAK细胞活性方法及其意义

目的：比较不同诱导方法对LAN细胞杀伤活性的影响。方法：外周血单个核细胞（PBMC）用重组白细胞介素-2（rIL-2）体外诱导LAK细胞，采用3H－TdR释放法测定LAK活性。结果；（1）PBMC诱导3h后，LAK活性高于或至少不低于24～72h者；（2）PBMC诱导3h后洗去游离的rIL-2，并不影响继续诱导LAN细胞活性；（3）PBMC分离后以清洗2次为佳；（4）PBMC用正常人血浆培养比用肝炎病人自体血浆培养诱导的LAK活性高。结论：在本试验系统中，PBMC分离后，清洗2次，以正常人血浆经IL-2诱导3h为最佳回输条件。     

铜绿假单胞菌及其外毒素A对人单个核细胞TNF-α分泌的影响

目的:探讨加热杀灭的铜绿假单胞菌(HKPA)及其外毒素A(PEA)对人单个核细胞(PBMC)TNF-α分泌的影响。方法:采用1×107CFU/mlHKPA作为诱导物、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/LPEA作为抑制物、抗PEA血清作为中和物,诱导PBMC体外产生TNF-α。ELISA法检测TNFα浓度。结果:对照组HKPA可诱导PBMC产生一定浓度的TNFα;当PEA浓度≥100μg/L时,抑制TNF-α的产生(P<0.01),TNF-α浓度与PEA的剂量呈负相关(r=-0.82,P<0.01)。抗PEA血清完全中和PEA的抑制作用,与对照组比较,TNF-α分泌量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HKPA在体外可有效诱导PBMC产生TNF-α,PEA以剂量依赖的方式抑制TNF-α的产生。     

BPI在不同水平的内毒素下对诱导单核细胞活化的调节作用

目的探讨杀菌/渗透增强蛋白（BPI）在内毒素血症中对脂多糖（LPS）体内转运以及对单核巨噬细胞活化过程的调节作用。方法本实验通过BPI单独及与LBP共同作用于单核巨噬细胞,检测细胞因子TNF-α的分泌情况。结果 BPI本身能引起单核巨噬细胞分泌少量TNF-α,但TNF-α分泌量与BPI浓度无关（F=0.590,P=0.584）。BPI在LBP存在情况下抑制作用更明显。2ng/ml BPI和LBP混合即可以完全抑制1ng/ml LPS作用。结论 BPI能抑制LPS作用,但与BPI作用浓度无明显关系;LBP对BPI抑制LPS起协同作用。     

西洛司特对COPD患者PBMC分泌IL-8和TNF-α的影响

目的研究西洛司特在体外对COPD患者PBMC分泌IL-8和TNF—α的影响。方法从12例COPD患者外周血中分离的单个核细胞（PBMC）分别与不同浓度的西洛司特、氨茶碱和甲基强的松龙共培养24h，用ELISA的方法检测PBMC培养上清的IL-8和TNF-α水平。结果西洛司特和氨茶碱对PBMC分泌IL-8和TNF-α均呈显著的浓度依赖性抑制作用（P〈0．01）。甲基强的松龙对PBMC分泌IL-8和TNF-α则无显著抑制作用。1μmol／L的西洛司特使LPS刺激PBMC活化分泌的IL-8减少54％，15μg／ml的氨茶碱可使其减少39％，两者在治疗剂量所能达到的血药浓度比较有显著性差异（P〈0．01）。1μmol／L的西洛司特使LPS刺激PBMC活化分泌的TNF-α减少51％，15μg／ml的氨茶碱可使其减少32％，两者在治疗剂量所能达到的血药浓度比较有显著性差异（P〈0．01）。结论西洛司特和氨茶碱在体外可显著地抑制抑制PBMC分泌IL-8和TNF-α，且西洛司特的抑制作用显著强于氨茶碱，甲基强的松龙这种抗炎作用不明显，提示西洛司特对COPD患者有显著的抗炎活性，具有广阔的临床应用前景。     

单个核细胞和单核源性巨噬细胞生长特性的体外实验研究

目的研究人外周血单个核细胞、单核源性巨噬细胞在体外培养环境中的生长曲线情况。方法以密度梯度离心法和贴壁法分离、纯化正常人的外周血单个核细胞。以佛波醇酯促进单核源性巨噬细胞的分化成熟。用MTT法检测单个核细胞、单核源性巨噬细胞的生长曲线。采用单因素方差分析进行统计学检验。结果单个核细胞接种第1天的细胞数量明显多于第3、5、6、7天（P〈0.05）,但接种后第2~7天的细胞数量相对稳定（P〉0.05）。单核源性巨噬细胞分化成熟后第1~6天的OD,细胞数量较稳定。但第7天的细胞数量明显少于前6天（P〈0.05）。结论体外培养第2~7天的外周血单个核细胞处于生长平台期。体外培养的单核源性巨噬细胞在分化成熟后的第1~6天处于生长平台期。     

苍耳亭缓解过敏性皮炎及机制探索

目的?探讨苍耳亭对过敏性皮炎的药效作用及其机制。方法?利用异硫氰酸荧光素（FITC）诱导Th2型变应性接触性皮炎（ACD）模型观察苍耳亭全程给药对小鼠的耳肿胀、耳组织病理学以及脾脏指数的影响,并运用ELISA法检测小鼠耳匀浆中的Th2型炎症因子IL-4、IL-5和IL-13水平。利用MTT法考察不同化合物浓度对于人永生化角质形成细胞（HaCaT）、单核巨噬细胞RAW264.7以及小鼠脾脏淋巴细胞的增殖毒性作用。ELISA法检测Poly（I∶C）和TNF-α联合作用于上皮细胞产生胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的量以及脂多糖（LPS）诱导下RAW264.7产生TNF-α的含量。结果?苍耳亭40?mg/kg能显著抑制ACD小鼠耳肿胀,并可明显降低耳匀浆中Th2型细胞因子IL-4、IL-5水平,病理切片显示其可明显改善耳肿胀程度以及炎性细胞的浸润。体外实验中0.1?μmol/L苍耳亭对上皮细胞产生的TSLP有显著抑制作用;1?μmol/L的苍耳亭可以显著抑制RAW264.7产生TNF-α;苍耳亭对于脾淋巴细胞的增殖、对刀豆蛋白（ConA）以及脂多糖（LPS）诱导下T淋巴细胞和B淋巴细胞的活化增殖作用均未见明显影响。结论?苍耳亭对过敏性皮炎有明显的治疗作用,其机制可能通过抑制上皮细胞产生的TSLP以及巨噬细胞产生TNF-α发挥抗炎作用。      

卡莫氟对强直性脊柱炎Th1/Th2类细胞因子表达影响的研究

目的：观察卡莫氟(1-hexylcarbamoyl-5-fluorouracil,HCFU) 和柳氮磺胺吡啶(sulfalazine,SSZ)治疗强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)后体内Th1/Th2类细胞因子的变化。方法：19例AS患者随机分为2组，分别给予HCFU(9例)和SSZ （10例），RT-PCR检测其治疗前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）mRNA片段的表达。结果:HCFU治疗后AS患者PBMC中IFN-γ、TNF-α mRNA的表达率分别为33.33%、44.44%，与治疗前相比差异有统计学意义（P＜0.05），IL-2、IL-4及IL-6 mRNA的表达差异无统计学意义。SSZ治疗后AS患者PBMC中IFN-γ mRNA的阳性表达率为70%,半定量结果显示，治疗后PBMC中IFN-γ mRNA的表达水平明显降低（P＜0.05)。80% AS患者在治疗后PBMC中IL 4 mRNA呈阳性表达，较治疗前21.05%明显升高（P＜0.05）。IL-2、IL-6和TNF-α mRNA的表达无明显变化（P＞0.05）。结论：HCFU能使TNF-α mRNA表达降低，促进AS患者的免疫应答从Th1型向Th2型转变，小剂量即可使病情缓解。SSZ未发现对TNF-α mRNA表达有明显影响，可促使AS患者的免疫应答从Th1型向Th2型转变。     

穿山龙水溶性总皂苷对RSC-364细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响

目的：观察穿山龙水溶性总皂苷对大鼠滑膜成纤维细胞系RSC-364细胞分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和MMP-9的影响。方法：应用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素17（IL-17）刺激RSC-364细胞建立类风湿性关节炎细胞模型,并以不同剂量穿山龙水溶性总皂苷进行干预,ELISA法检测细胞培养液上清MMP-2和MMP-9的水平。结果：穿山龙水溶性总皂苷各剂量组（10、20、30mg/L）在不同时间点（24、48、72h）均可明显降低TNF-α和IL-17刺激的RSC-364细胞分泌MMP-2、MMP-9水平的升高,并呈剂量依赖性（P＜0.05）。结论：穿山龙水溶性总皂苷可能通过抑制RSC-364细胞分泌MMP-2和MMP-9发挥抗类风湿性关节炎的作用。     

膝骨关节炎患者滑液中炎症因子的表达及其与中医证型的相关性分析

目的分析膝骨关节炎（KOA）不同中医证型患者关节滑液中炎症因子水平及其与膝骨关节炎中医证型的相关性。方法90例KOA患者（119膝）根据中医辨证分为肾虚髓亏型、阳虚寒凝型及瘀血阻滞型。抽取关节液标本,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA法）测定基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、白介素-1（IL-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、组织型金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）水平。Pearson相关性检验分析其与中医证型、年龄、病程之间的关系。结果阳虚寒凝型患者MMP-13、IL-1、TNF-α水平明显高于肾虚髓亏型及瘀血阻滞型（P〈0．05）,TIMP-1水平明显低于肾虚髓亏型及瘀血阻滞型（P〈0．05）;相关性分析提示MMP-13、IL-1、TNF-α水平与年龄和病程呈正相关（P〈0．05）,TMP-1水平与年龄和病程呈负相关（P〈0．05）。结论不同中医证型的KOA患者炎症因子水平存在差异,阳虚寒凝型患者炎症因子水平较肾虚髓亏及瘀血阻滞型患者高,说明此类型的患者软骨组织免疫炎症反应处于一个高度激活的状态：年龄大、病程长的患者炎症因子水平较年龄小、病程短的患者高,提示KOA患者应该注意早期防治,以减少关节腔内炎症反应对膝关节的损伤。     

重组人白介素-10对TNF-α诱导的血管外膜成纤维细胞syndecan-4蛋白表达的影响

目的观察重组人白介素-10（IL-10）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激的血管外膜成纤维细胞（NIH／3T3细胞）增殖和syndecan-4蛋白表达的影响。方法采用体外培养的NIH／3T3细胞,分别应用终质量浓度为20ng／mL TNF-α、100ng／mL IL-10、200ng／mL IL-10、100ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α、200ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α作用24h,并设对照组进行比较,采用MTS／PMS法确定NIH／3T3细胞的增殖状态,利用Western blot蛋白免疫印迹法测定NIH／3T3细胞中syndecan-4蛋白的表达。结果（1）MTS／PMS法测定各组细胞增殖率统计分析显示：与对照组比较,TNF-α组能显著刺激NIH／3T3细胞的增殖（P〈0．001）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的增殖均无明显作用（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF—α组比较,NIH／3T3细胞增殖均显著减少（P〈0．01）。（2）Western blot蛋白免疫印迹法测定显示：与对照组比较,TNF—α组能显著刺激NIH／3T3细胞中的syndecan-4蛋白表达（P〈0．05）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF-α组比较,NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达显著降低（P〈0．001）。结论IL—10可明显抑制TNF-α诱导的NIH／3T3细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。     

川崎病急性期血清对血管内皮细胞MMP-3和TNF—α表达的影响及丙种球蛋白的干预作用

目的观察川崎病（KD）患儿急性期血清对脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的影响及人血丙种球蛋白（IVIG）对上述过程的调节作用。方法分别采集30例KD急性期患儿（冠脉正常15例,冠脉损害15例）、10例发热患儿和10例正常健康儿童静脉血3ml,常规分离血清待用。HUVEC培养分为正常血清组（C组）、发热血清组（F组）、KD冠脉无损害血清组（NAC组）、KD冠脉无损害血清＋IVIG组（NACI组）、KD冠脉损害血清＋IVIG组（ACI组）、KD冠脉损害血清组（AC组）。每组分别培养12h后吸取上清液,应用ELISA法测定细胞上清液MMP-3、TNF—α水平。结果经KD患儿血清作用后的HUVEC培养上清液中MMP-3、TNF-α水平升高明显,与C组、F组相比差异有统计学意义（均P〈0．01）,其中AC组更高,与NAC组相比差异有统计学意义（P〈0．01）;F组上清液活性虽然低于KD组,但仍高于C组（P〈0．05）。经IVIG干预后,AC组、NAC组MMP-3、TNF—α水平下降,差异有统计学意义均P〈0．01）。HUVEC培养上清液中MMP-3与TNF—α含量之间呈显著性正相关（r=0.923,P〈0．01）。结论KD患儿急性期血清能诱导HUVEC表达MMP-3、TNF—α增加,MMP-3、TNF—α可能参与KD患儿冠脉损害的发生发展;人血丙种球蛋白防治冠脉损害的机制,可能与抑制内皮细胞表达MMP-3、TNF—α有关。     

TNF-α在妊娠期糖尿病外周血单个核细胞和胎盘组织中的表达研究

目的研究妊娠期糖尿病(GDM)孕妇血清中TNF-α浓度与胰岛素抵抗的关系及TNF-α mRNA在GDM孕妇外周血单个核细胞(PBMC)和胎盘组织中的表达状况。方法用酶联免疫吸附(ELISA)法检测空腹血清中TNF-α浓度,用Real-time RT-PCR法检测PBMC和胎盘组织中TNF-α mRNA的表达水平。结果GDM组血清TNF-α浓度明显高于正常糖耐量(NGT)组;在胎盘组织中,GDM组TNF-α mRNA表达水平明显高于NGT组;在PBMC中,两组TNF-α mRNA表达水平无明显变化。结论血清TNF-α浓度与胰岛素抵抗呈正相关,GDM组血清中升高的TNF-α可能主要来源于胎盘组织,且参与了GDM的发病过程。     

Relationship between Single Nucleotide Polymorphism in TNF-α Gene Promoter Region and Inhibitory Effects of Triptolide on TNF-α Production in Peripheral Blood Mononuclear Cells of Healthy Humans

The relationship between tumour necrosis factor-α (TNF-α) gene polymorphism and inhibitory effects of triptolide on TNF-α production from peripheral blood mononuclear cells (PBMC)of healthy humans was investigated. Genomic DNA from 41 healthy people was typed for TNF-α-308 polymorphism by allele-specific polymorphism chain reaction (AS-PCR). The TNF-α concentration in the supernatant was measured by ELISA. The results showed that the production of TNF-α from TNF-α -308 non-G/G genotype PBMC was higher than that from TNF-α-308 G/G genotype PBMC after stimulated by LPS. Triptolide could lower the production of TNF-α from G/G genotype PBMC, but had no effect on the level of TNF-α from non-G/G genotype PBMC. It was concluded that TNF-α gene polymorphism was related to the TNF-α production from triptolide-inhibited PBMC culture in healthy humans.     

妊娠期糖尿病孕妇外周血单个核细胞TNF-α基因表达水平的实验性研究

目的:观察妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血单个核细胞(PBM C)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因转录和表达的水平,探讨其在GDM发病过程中的意义。方法:选取GDM、正常妊娠和健康非妊娠组各30例,采用EL ISA法检测空腹血清中的TNF-α水平。收集研究对象外周血单个核细胞(PBM C),采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印记分析(W estern b lot)技术测定实验对象外周血单个核细胞TNF-αmRNA转录和蛋白质表达的水平。结果:GDM组、正常妊娠组空腹血清TNF-α水平显著高于健康非妊娠组,而GDM组显著高于正常妊娠组。三组间的外周血单个核细胞TNF-αmRNA转录水平、TNF-α蛋白的相对含量无显著性差异。结论:TNF-α可能参与了GDM的发生发展过程,但是PBM C可能不是GDM时TNF-α增加的来源。     

小乌桂颗粒剂含药血清对CIA大鼠膝关节成纤维滑膜细胞体外增殖的干预研究

目的通过观察小乌桂颗粒剂含药血清对胶原诱导关节炎（CIA）大鼠成纤维滑膜细胞（CIA-FLS）体外增殖的影响,探讨其治疗类风湿关节炎（RA）的可能机制。方法采用鸡Ⅱ胶原建立CIA大鼠模型,运用关节炎指数评分法及病理切片炎症程度评分系统对其进行评价。组织块培养法体外分离培养CIA大鼠膝关节滑膜组织中CIA-FLS。实验分为空白对照组、甲氨蝶呤（MTX）组及高、中、低剂量小乌桂颗粒剂含药血清组5组,分别干预CIA-FLS24、48、72h,MTT法检测其增殖情况,ELISA检测干预前和各组细胞上清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的水平。结果高、中剂量小乌桂颗粒剂含药血清组和MTX组干预CIA-FLS24、48、72h均可明显抑制其增殖,细胞培养上清中TNF-α、MMP-1水平明显降低,与干预前及空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;低剂量小乌桂颗粒剂含药血清组干预CIA-FLS48、72h可明显抑制CIA-FLS增殖,细胞培养上清中TNF-α水平明显降低,其干预CIA-FLS24、48、72h细胞培养上清中MMP-1水平均明显降低,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论小乌桂颗粒剂含药血清可能通过抑制FLS增殖,并抑制FLS分泌TNF-α、MMP-1来减轻滑膜炎症反应,该过程是其发挥治疗RA的可能机制。     

血清B7-H3在脓毒血症患者体内的表达及其生物学意义

目的探讨可溶性B7-H3（sB7-H3）在脓毒血症患者体内的表达特征及其生物学意义。方法通过ELISA方法检测脓毒血症患者体内sB7-H3及其他炎症因子的表达水平,并对相关性进行分析。利用分离纯化的单核细胞,分析肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在sB7-H3产生中的调控作用。利用B7-H3Ig融合蛋白,体外实验分析sB7-H3对单核细胞的生物学作用。结果脓毒血症患者与健康对照组相比,血清sB7-H3水平显著升高（P〈0.01）。sB7-H3表达水平与TNF-α及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）成显著正相关（分别P〈0.01和〈0.05）。TNF-α调控sB7-H3的产生,同时sB7-H3又可作用于单核细胞,促进TNF-α分泌表达（均P〈0.01）。结论脓毒血症患者体内存在高水平sB7-H3,其水平受TNF-α调控,功能则表现为刺激单核细胞分泌TNF-α。     

三氧化二砷对系统性红斑狼疮患者Toll样受体9及α-干扰素的影响

目的:了解三氧化二砷(AS2O3)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体9(TLR9)mRNA 及α-干扰素(IFN-α)表达的影响,为阐明AS2O3治疗SLE的作用机制提供依据.方法:SLE患者和正常人PBMCs分别与环磷酰胺(CTX)及不同浓度AS2O3进行体外培养12h和24h...