树突状细胞介导的肝癌免疫治疗实验研究

目的探讨以树突状细胞（DC）为介导的原发性肝癌免疫治疗新方法。方法采用肝癌细胞制备肿瘤细胞性抗原冲击致敏体外培养的DC,体外混合淋巴细胞反应检测抗原致敏DC;刺激同基因T淋巴细胞增殖的能力,观察负载肿瘤抗原的DC;体内外诱导产生肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）及其抗肿瘤能力。结果经肝癌细胞抗原致敏的DC;能诱导较强的自体T细胞增殖,且诱导特异性CTL,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC和未经肝癌细胞抗原致敏的DC;激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对非同种肿瘤细胞无明显的杀伤作用,经BEL7402肿瘤细胞抗原致敏的DC;经皮下免疫小鼠可诱导有效的免疫保护作用,可抵抗野生型BEL7402细胞的再攻击,肿瘤生长受到明显抑制,瘤体出现延迟,生长减慢。结论DC具有强大的刺激T淋巴细胞增殖和诱导产生特异性CTL的能力,在体内外均能激发特异性抗肿瘤免疫应答。     

糖尿病动物模型视网膜组织极早期的病理改变

随着糖尿病患病率的增加,糖尿病及其并发症所带来的健康威胁正日益加重。人们对糖尿病及其并发症研究也在不断地深入。目前很多动物研究发现在糖尿病的初发阶段视网膜组织就已存在轻微的病理改变,如周细胞减少、神经节细胞减少等,并且这些病理改变与高血糖密切相关。现就糖尿病早期视网膜病理改变进行综述。     

人LAK细胞的细胞化学活性与其细胞毒性关系的探讨

对诱导１ｄ、３ｄ、５ｄ ＬＡＫ细胞作ＡＮＡＥ、ＡＣＰ、ＰＯＸ及ＰＡＳ细胞化学染色，同时采用ＬＤＨ释放法对ＬＡＫ细胞的细胞毒性进行了检测。结果显示，随诱导天数的延长，ＬＡＫ细胞胞质中ＡＮＡＥ、ＡＣＰ和ＰＡＳ的反应物逐渐增多、增强、阳性率也逐渐增高，不同天数组间有显著性差异。ＰＯＸ均为阴性反应。细胞毒性试验证实，随诱导天数的延长ＬＡＸ细胞杀伤活性逐渐增强。这表明ＬＡＫ细胞的细胞化学活性与其细胞毒性密切     

间变性大细胞淋巴瘤的免疫逃逸机制

同变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、系统型是一种CD30^ 的T细胞淋巴瘤，它有一系列的形态学特点、免疫表型和临床特征，临床病理有两种类型：一种是间变性淋巴瘤激酶(ALK、一种新的酪氨酸激酶)阳性的系统型ALCL，另一种是ALK阴性的系统型ALCL。ALK的表达往往是病人染色体易位，即t(2；5)的结果，     

人4-1BBL转基因细胞株的构建及其生物学功能的研究

目的为探讨人4-1BBL分子的生物学功能，构建人4-1BBI。转基因细胞株。方法利用RT-PCR方法克隆人4-1BBI。全长基因，继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ．Term。重组逆转录病毒载体pEGZ．Term／4-1BBI。与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T，用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞，筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。^3H-TdR掺入实验分析4-1BBL转基因细胞对T细胞增殖的影响，ELISA法分析细胞因子的分泌。结果流式细胞仪表型分析结果表明，L929／4．1BBL转基因细胞稳定表达人4-1BBL分子。体外实验表明，L929／4-1BBL细胞能够促进T细胞活化、增殖及IL-2、IL-6和IFN-γ的分泌。结论该研究成功克隆了人4-1BBL基因，构建了能稳定表达4-1BBL分子的转基因细胞株L929／4-1BBL，该株转基因细胞能提供有效的4-1BBL共刺激信号，促进T细胞活化、增殖及细胞因子的分泌。     

肿瘤生物学治疗的研究进展

肿瘤的发病一直呈上升趋势，美国NCI权威机构公布，美国从1973～1992年的20年间癌症的死亡率从16％增长到23％。我国恶性肿瘤的病死率，在这20年中也增长了11．6％。专家预测，由于人口老龄化、吸烟、生活方式城市化及工业化进程等多种原因，在今后的二三十年内肿瘤的发病及死亡率将继续呈上升趋势。并提出了今后肿瘤治疗的新观念，建议多学科综合治疗，认为在传统手术、化疗、     

DCs和CIK细胞的研究进展

近几年,随着肿瘤的过继免疫治疗的新近发展,DCs和CIK细胞治疗恶性肿瘤逐渐成为国内外关注的焦点。自上世纪80年代发现这种细胞起,人们对于DCs、CIK细胞生物学特征的认识一直在不断的更新,目前以DCs和CIK细胞为主的治疗恶性肿瘤的技术已经在国内临床开展,并有望成为肿瘤综合治疗研究的新方向。     

CD69分子的研究进展

ＣＤ6 9又称活化诱导分子 (ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｒｍｏｌｅｃｕｌｅ,ＡＩＭ) ,早期活化抗原 1(ｅａｒｌｙａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ 1,ＥＡ 1) ,Ｌｅｕ2 3和ＭＬＲ 3,是淋巴细胞活化最早表达的膜表面分子。ＣＤ6 9可诱导表达在Ｔ细胞、Ｂ细胞、ＮＫ细胞、单核细胞、中性和嗜酸性粒细胞、胸腺细胞 ,构成表达在血小板等、表皮的Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞 ,一部分胸腺髓质细胞、滤泡皮质Ｂ细胞和一部分生发中心的Ｔ细胞。ＣＤ6 9是一个多向性的免疫调节分子 ,对多种造血细胞的活化和分化具有重要作用 ,本文就ＣＤ6 9的…     

抗原致敏的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌细胞杀伤活性的研究

目的：观察肝癌细胞抗原致敏的树突状细胞（Dendritic cells,DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer cells,CIK）共培养后的细胞增殖活性、表型的变化及其对肝癌细胞HepG2的杀伤活性。方法：采集健康供者的外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMNC）,常规诱导出DC、CIK,用肝癌细胞HepG2抗原冲击DC（Ag-DC）,并将其与CIK共培养（Ag-DC-CIK）,观察CIK和Ag-DC-CIK的细胞表型及增殖活性,并以肝癌细胞HepG2作为靶细胞,用MTT法检测CIK和Ag-DC-CIK的杀伤活性。结果：肝癌细胞抗原致敏的DC与CIK细胞共培养后,Ag-DC-CIK细胞群增殖活性明显增强,且高表达CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞,其增殖活性和杀伤活性较单纯的CIK细胞更高（P<0.05）。结论：肿瘤抗原致敏的DC与CIK共培养获得的Ag-DC-CIK增殖活性和对肝癌细胞的杀伤活性显著高于CIK细胞。     

正常与肿瘤性星形神经胶质细胞细胞间直接通讯的比较

用MTT法测定了体外培养的正常星形胶质细胞与恶性SWO38星形胶质瘤细胞的细胞增殖速率，用粘附式细胞仪（ACAS570）对2种细胞间隙连接通讯进行测试。结果正常胶质细胞比胶质瘤细胞分化程度高，生长慢（OD值分别为0.201±0．008和1.092±0.075，P＜0．01），前者间隙连接通讯（10．05±8.72％，n＝20）显著高于后者（2.83±5.5％，n＝38，p＜0．05）。     

Neogenin诱导滋养细胞凋亡及其机制的探讨

目的 探讨外源性Neogenin对人滋养细胞凋亡的影响及其凋亡机制中可能存在的传导通路.方法 行早孕期滋养细胞株TEV-1培养,应用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法检测经不同浓度的Neogenin处理细胞24 h后TEV-1细胞的凋亡情况,并同时检测Caspase-3活性的变化.结果 Neogenin可诱导TEV-1细胞凋亡,且存在剂量依赖性.在0、1、5、10及50 ng/mL浓度Neogenin作用下,其凋亡率依次为(5.34±0.32)%、(29.86±0.92)%、(38.15±0.24)%、(40.15±0.27)%及(52.37±0.20)%.但Caspase-3的活性变化不明显,依次为对照组的(1.02±0.02)、(1.06±0.00)、(0.93±0.02)、(1.04±0.01)倍.结论 Neogenin诱导滋养细胞凋亡,其凋亡信号通路与Caspase信号传导通路不存在必然联系.     

PDTC影响骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡的研究

目的:观察在NF-KB抑制剂PDTC诱导骨肉瘤细胞发生凋亡的过程中,NF-KB活性抑制后,Livin和aspase-3表达水平变化.方法:以不同浓度(0、50、100、200、400 μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间(24小时,48小时)后,采用MTT法和流式细胞仪测定U-2 OS细胞凋亡,采用Western Blot检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白表达.结果:①不同浓度PDTC作用24小时、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用,并呈时间、剂量依赖性.②50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率与对照组相比差异有显著性,且各浓度组之间差异均有显著性(P＜0.01).③PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达,增加caspase-3蛋白表达,呈现剂量依赖性.结论:PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞,并使细胞周期受到阻滞,进一步诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系.     

早孕胎盘滋养层细胞的免疫组化研究

目的：研究早孕胎盘绒毛和子宫蜕膜中合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞和中间滋养层细胞的免疫组化特征。方法：对２０例妊娠头３个月的刮宫标本进行Ｋｅｒａｆｉｎ、ｈＣＧ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ、ＥＭＡ和Ｐｒｏｌｅｃｔｉｎ等免疫组化染色。结果：角蛋白是各种滋养层细胞最可靠和最敏感的标记物，但其特异性差。合体滋养层细胞的ｈＣＧ和ＰＬＡＰ染色强于中间滋养层细胞，而中间滋养层细胞的ＨＰＬ和ＥＭＡ染色强于合体滋养层细胞。除角蛋白外，细胞滋养层细胞免疫组化染色均阴性。结论；早孕时三种滋养层细胞在免疫组化方面有其共性，也有各自不同的特点。     

siRNA介导的MAPKp42沉默诱导HeLa细胞凋亡

目的应用siRNA沉默HeLa细胞MAPKp42，研究其对细胞存活的影响。方法体外合成靶向MAPKp42的siRNA-1和siRNA-2，并用脂质体转染HeLa细胞，Western印迹法和免疫组织化学法检测p42^MPAK的表达；电镜观察，TUNEL法测定细胞凋亡，Annexin-PI法测定不同凋亡时期细胞的分布。结果siRNA-1和siRNA-2均可使HeLa细胞MAPK p42沉默，使p42^MAPK表达下调，与阴性对照组相比分别降低2、5倍和3．2倍。电镜观察证实，siRNA-1和siRNA-2转染组部分细胞丧失表面微绒毛，细胞内空泡增加，细胞核染色质边集。处理组HeLa细胞早期凋亡率显著增加，其中siRNA-1组晚期凋亡率也明显增加。结论siRNA介导的MAPKp42沉默可以诱导HeLa细胞凋亡。     

Exosomes致敏的树突状细胞介导的抗大肠癌LoVo细胞株的作用

目的：分离LoVo细胞释放的exosomes,以其致敏树突状细胞（dendritic cell,DCs）,观察其对细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTLs）的激活效应。方法：离心超滤和蔗糖密度梯度离心法分离LoVo细胞释放的exosomes,常规方法从静脉血单个核细胞诱导DC,并分离T细胞,将LoVo细胞来源的exosomes冲击或未冲击的DCs与T细胞共培养。MTT比色法检测体外细胞毒活性。结果：LoVo细胞分泌的exosome致敏的静脉血DCs激活CTL的能力显著高于肿瘤冻融抗原致敏的DCs组,在效靶比为50：1时,两组CTLs对LoVo细胞的杀伤率为（67．9％vs38．7％,P〈0．05）。结论：树突状细胞经来自LoVo细胞分泌的exosomes致敏后,能活化CTLs而杀伤肿瘤细胞。     

CD3AK细胞诱导白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究

目的探讨CD3AK细胞诱导白血病Jurkat细胞凋亡的效果.方法用细胞形态学观察,DNA琼脂糖电泳,原位末端标记法分别检测Jurkat自然凋亡率和CD3AK细胞诱导的Jurkat细胞凋亡率.结果 Jurkat细胞自然凋亡率为(4.60±2.17)%;CD3AK细胞诱导的Jurkat细胞凋亡率为(27.38±4.91)%,两者之间具有显著性差异(t=15.1P＜0.01).结论 CD3AK细胞能诱导白血病Jurkat细胞凋亡.     

人外周血滤泡辅助T细胞的分选鉴定与功能检测

目的：比较全外显子组数据分析中不同的预处理方法和变异过滤方法对变异识别的影响。方法：利用２例全外显子组测序数据,从使用不同的预处理方法（FASTX-Toolkit、Trimmomatic及未做预处理）、修饰后不成对读长（single-end reads,SE）取舍策略以及变异过滤方法[Hard过滤和变异质量得分重新校正（variant quality score recalibration,VQSR）]3个方面,通过数据覆盖深度（depth of coverage,DP）、识别变异的数目、转换/颠换比值和基因型一致性等特征,比较他们对全外显子组变异识别结果的影响。结果：Trimmomatic预处理后的读长测序ＤP与未预处理的原始数据接近,但明显高于FASTX-Toolkit预处理方法。当DP≥10×且基因型质量分数（genotype quality score,GQ）≥20时,经Trimmomatic预处理后识别到的单核苷酸变异（single nucleotide variant,SNV）数量比FASTX-Toolkit多,与未预处理组接近。当包含SE时,FASTX-Toolkit组多识别出的SNV数量高于（28%）Trimmomatic组（5%）。当样本量较少时,在所有实验组中Hard过滤方法滤掉的SNV要少于VQSR。结论：Trimmo－matic修饰（过滤）原始序列更温和,而FASTX-Toolkit可能过度过滤了原始数据。保留SE有利于下游变异识别。Hard过滤相较于VQSR表现出了更高的容忍度。     

大鼠睾丸支持细胞、生精细胞及管周细胞的体外团聚研究

用5、10、15、20和25天龄大鼠睾丸曲细精管分离细胞制成悬液,在体外经固体琼脂培养和旋转培养,得到圆球状和索状细胞团聚体,其主要由支持细胞组成,管周细胞包绕在支持细胞外周。10天龄以前组,在团聚体中可见到部分生精细胞,15天龄以后组的生精细胞全部位于团聚体外.表明新生大鼠睾丸支持细胞、管周细胞及生精细胞间仍保留着部分胚胎期的识别和选择性粘附能力。     

Th1/Th2、Th17/Treg细胞的平衡与临床

T细胞是一个非常复杂的高度异质性群体,其中Th细胞是根据功能分类的一个T细胞群。Th细胞包括多种功能亚群[1],许多研究证实这些亚群不是分化定型细胞,具有一定的可塑性(plastici-ty)[2-3],它们通过分泌的细胞因子相互影响、相互制约、形成网络维持动态平衡,一旦失衡就可能发生