长链非编码RNA SNHG11通过PI3K/Akt/mTOR通路对结直肠癌细胞恶性进展的作用观察

目的探讨长链非编码(lnc)RNA SNHG11对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA SNHG11在CRC患者CRC组织及其相关细胞系中的表达水平。通过生物信息学技术评估SNHG11表达与患者临床预后的相关性。培养CRC细胞株分别转染shCtrl(shCtrl组)、shSNHG11#1(shSNHG11#1组)、shSNHG11#2(shSNHG11#2组)、Control cDNA(Control cDNA组)、SNHG11 cDNA(SNHG11 cDNA)。噻唑蓝(MTT)、克隆形成实验、Transwell实验、细胞划痕实验、流式细胞术检测各组CRC细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。Western印迹法检测各组相关蛋白表达, 并通过裸鼠成瘤实验分析lncRNA SNHG11敲低对肿瘤细胞体内生长的影响。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂LY294002用于挽救实验。结果 lncRNA SNHG11在CRC细胞和组织中的表达明...     

NRAGE对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的作用机制

目的 研究神经营养蛋白受体相互作用的同源物(NRAGE)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和侵袭能力的作用机制。方法 选取84例CRC患者的临床病理材料,应用荧光定量PCR(qPCR)及免疫印迹实验检测CRC组织及癌旁正常组织中NRAGE的表达,分析癌组织中NRAGE的表达与临床病理特征的关系。RT-PCR及免疫印迹实验检测CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO及结直肠正常细胞系FHC中NRAGE mRNA及蛋白表达。MTT实验、Transwell迁移实验观察NC组、过表达NRAGE组及NRAGE敲低组肿瘤细胞增殖及迁移能力。qPCR及免疫印迹实验检测各组AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达差异。结果 与癌旁组织相比,CRC癌组织中NRAGE的mRNA及蛋白表达明显升高。癌组织中NRAGE的表达与肿瘤分期、远处转移及淋巴结转移有关(P<0.05)。与FHC细胞相比,CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO细胞中NRAGE的mRNA及蛋白表达较高(P<0.05)。...     

lncRNA THAP9-AS1靶向miR-577调控结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)THAP9反义RNA1(THAP9-AS1)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法收集苏州市立区院东区2017-2019年手术切除并经病理证实的结直肠癌组织标本30例,所有患者术前未接受过放化疗,另取距离癌组织边缘5 cm处的正常组织作为对照。将si-NC、si-THAP9-AS1、miR-NC、miR-577分别转染至SW620细胞中,分别记为si-NC组、si-THAP9-AS1组、miR-NC组、miR-577组;将siTHAP9-AS1分别与anti-miR-NC、anti-miR-577共转染至SW620细胞中,分别记为si-THAP9-AS1+anti-miR-NC组、siTHAP9-AS1+anti-miR-577组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA THAP9-AS1和miR-577表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA THAP9-AS1和miR-577的靶向关系。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中THAP9-AS1表达水平显著升高,miR-577表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。抑制lncRNA THAP9-AS1表达或过表达miR-577,结直肠癌细胞SW620中细胞活性显著降低,细胞迁移、侵袭数显著降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,p21表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。lncRNA THAP9-AS1靶向调控miR-577的表达;干扰miR-577表达逆转了抑制lncRNA THAP9-AS1表达对结直肠癌SW620细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 lncRNA THAP9-AS1通过下调miR-577抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

小窝蛋白3在人结直肠癌组织中的表达及斑蝥素对其表达的抑制作用

目的: 探讨小窝蛋白3(CAV3)在人结直肠癌(CRC)组织中的表达及斑蝥素对于CAV3表达的影响,阐明斑蝥素防治结直肠癌的分子学机制。方法: 取30例手术切除的CRC组织,同时取癌旁正常组织为正常对照组,通过HE染色和免疫组织化学法检测CAV3在人CRC组织中的阳性表达率。将人CRC HCT-116 细胞分为对照组、氟尿嘧啶组和斑蝥素组,通过免疫组织化学染色和实时定量 PCR法检测CAV3 mRNA表达水平。结果: HE染色,与正常对照组比较,CRC 组织中癌细胞核染色较深、排列紊乱。30例CRC组织中22例CAV3呈阳性表达,阳性表达率为70.3%;正常对照组呈阴性表达。免疫组织化学染色,与正常对照组比较, CRC组织中CAV3 蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与对照组比较,氟尿嘧啶组和斑蝥素组HCT-116 细胞中CAV3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。实时定量PCR法,与对照组比较,氟尿嘧啶组和斑蝥素组HCT-116 细胞中CAV3 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论: CAV3蛋白在大多数人CRC组织中呈高表达,斑蝥素可能通过下调CAV3表达抑制CRC细胞生长。     

转录因子Ascl2调控Acss1/3的表达影响结直肠癌患者预后

转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌（CRC）前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞（sh-Ascl2/LS174T）的mRNA及miRNA差异表达数据（GSE69036和GSE34926）分析其靶基因;应用RT-PCR方法和Western 印迹定量检测sh-Ascl2/LS174T及对照细胞中的Ascl2、Acss1和Acss3的mRNA表达水平,以及Ascl2和Acss1蛋白表达水平,从GSE44076表达数据和UALCAN数据比较在正常结直肠粘膜、CRC组织和不同临床病理分期的肿瘤组织的表达水平差异;TCGA数据库下载548例CRC患者基因 mRNA表达量及相关临床信息,用Spearman等级相关分析表达相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析评估危险因素。结果 sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA较对照细胞下调2.08倍,miR-4282表达水平下调2.069倍。RT-PCR定量检测sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA和miR-4282水平明显下降(P＜0.01), Acss3的mRNA水平明显升高(P＜0.05);Acss1和Ascl2蛋白水平较对照细胞均明显下降。CRC组织Ascl2和Acss1的mRNA水平明显高于癌旁结直肠粘膜组织(P＜0.001),而Acss3明显低于癌旁结直肠粘膜组织 (P＜0.001);CRC组织中Ascl2与Acss1的mRNA表达水平呈正相关,与Acss3的表达水平呈负相关(均P＜0.001)。Ascl2和Acss3表达水平与疾病特异性生存期（DSS）、总体生存期（OS）、无进展生存期（PFS）无关,Acss1高表达组比低表达组的DSS (P=0.0389)和OS (P=0.04)明显降低。Ascl2与Acss1基因异常表达、Ascl2、Acss1和Acss3基因异常联合表达与CRC患者的DSS存在显著的联系(P=0.0377和P=0.0161),Ascl2、Acss1和Acss3三个基因的联合异常表达是影响CRC患者DSS的危险因素之一(P=0.043)。结论Ascl2对CRC细胞中的Acss1/3的表达可能具有调控作用而导致其短链脂肪酸β-氧化的重编程,它们的联合异常表达可以一定程度预测CRC患者的预后     

O-GlcNAc转移酶介导的Kruppel样因子5 O-GlcNAc糖基化修饰调控细胞周期素D1参与结直肠癌发生、发展实验研究

目的:探讨O-GlcNAc转移酶(OGT)通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定Kruppel样因子5(KLF5)蛋白并上调细胞周期素D1(CCDN1)表达参与结直肠癌(CRC)发生、发展的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析KLF5 mRNA和蛋白在CRC组织中的表达。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CRC细胞中KLF5的表达水平，CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期。通过生物信息学方法分析KLF5的靶基因和潜在结合位点，并通过双荧光素酶实验证实KLF5蛋白可与CCDN1结合，采用RT-qPCR检测KLF5对CCDN1 mRNA的影响。抑制KLF5并过表达CCDN1,分析KLF5是否通过正调控CCDN1促进细胞增殖和促进细胞进入G₁期。采用生物信息学分析KLF5蛋白是否存在O-GlcNAc糖基化位点，OGT mRNA和蛋白在结直肠癌组织中的表达以及OGT和KLF5表达的相关性。使用OGT抑制剂OSMI-1处理CRC细胞，蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析KLF5蛋白表达，O-GlcNAc糖基化蛋白表达水平通过免疫荧光实验检测。...     

长链非编码RNA调控结直肠癌相关信号通路的研究进展

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是消化系统常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率呈上升趋势。长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸，几乎没有蛋白质编码潜能的RNA，可通过与RNA结合蛋白结合、作为竞争性内源RNA、表观遗传学修饰和影响RNA代谢等方式，在转录、转录后翻译水平调控基因的表达或影响相关信号通路的活性，在CRC的发生和发展中发挥重要作用。本文重点就lncRNAs在CRC相关信号通路中的作用研究进展进行综述，探索其作为CRC诊断、治疗及预后预测靶点的潜力。     

长链非编码RNA GATA2-AS1在结直肠癌细胞中的表达及功能研究

目的 探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)GATA结合蛋白2-AS1(lncRNA GATA2-AS1)在结直肠癌细胞系中的表达以及对结直肠癌细胞生物学功能的意义。方法 通过基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis, GEPIA)数据库比较lncRNA GATA2-AS1在各种肿瘤中尤其是结直肠癌中的表达差异。通过实时荧光定量聚合酶链反应(real time- quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测结直肠癌细胞和人正常肠黏膜上皮细胞中lncRNA GATA2-AS1的表达情况。应用小干扰RNA(siRNA)沉默HCT116细胞中lncRNA GATA2-AS1的表达,通过CCK-8法、EdU增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验检测lncRNA GATA2-AS1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用Western blot法检测上皮间充质转化相关蛋白表达情况。结果 结直肠癌细胞的lncRNA GATA2-AS1表达水平与正常肠黏膜上皮细胞比较均显著升高(P<0.05)。干扰lncRNA GATA2-AS1的表达抑制了结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。干扰lncRNA GATA2-AS1后,E-cadherin蛋白上调,N-cadherin蛋白明显下调。结论 lncRNA GATA2-AS1在结直肠癌中表达显著增加,且与结直肠癌的增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化相关。     

长链非编码RNAH19促进结直肠癌细胞株增殖的研究

目的 研究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA) 家族分子母源性印迹基因19 转录因子(H19 )在结直肠癌组织及细胞株中的表达情况及其对人结直肠癌SW620细胞增殖的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织,以及结直肠癌细胞株SW480、HCT116、SW620和正常结直肠上皮NCM460细胞中H19的表达。结直肠癌SW620细胞分别转染H19 siRNA(si-H19 组) 和阴性对照序列(si-NC组) ,分别采用流式细胞技术、细胞克隆形成实验和CCK8检测两组细胞的增殖情况。qRT-PCR和Western blot检测两组细胞G₁/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖激酶（cyclin dependent kinase 4, CDK4）的表达情况。结果 与癌旁组织和正常结直肠上皮NCM460细胞相比较,结直肠癌组织和细胞株中H19的表达水平升高（ P＜0.05);si-H19组细胞H19表达水平低于si-NC组,且细胞活力和细胞克隆数均低于si-NC组,以上差异均有统计学意义（ P＜0.05);同时,相较于si-NC组,si-H19组CyclinD1和CDK4基因和蛋白的表达受到了明显抑制（ P＜0.05)。结论 结直肠癌组织及细胞株中H19 呈高表达,沉默H19 表达能明显抑制结直肠癌细胞的增殖能力,为结直肠癌的靶向治疗提供了潜在策略。     

长链非编码RNA HSALNT0000015对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）HSALNT0000015对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测80例结直肠癌组织及配对的15例癌旁组织,同时检测人结直肠癌细胞（Lovo、SW480、HT-29、HCT116）和正常人肠黏膜上皮细胞HIEC中lncRNA HSALNT0000015的表达水平;将HCT116细胞分为空白组、对照组及实验组,分别不感染慢病毒、只感染空载质粒及感染sh-HSALNT0000015-慢病毒,采用MTT法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法检测转录因子Slug、上皮钙黏素（E-Cadherin）及波形蛋白（Vimentin）的表达。结果 结直肠癌组织lncRNA HSALNT0000015表达水平高于癌旁组织（P?<0.05）。结直肠癌细胞中lncRNA HSALNT0000015的表达水平均高于正常人肠黏膜上皮细胞（P?<0.05）。细胞培养12、24、48及72 h后,实验组光密度值（490 nm）低于空白组和对照组（均P?<0.05）。敲减lncRNA HSALNT0000015后,HCT116迁移及侵袭能力下降（均P?<0.05）,E-cadherin表达水平上升（P?<0.05）,转录因子Slug和Vimentin表达水平下降（均P?< 0.05）。结论 lncRNA HSALNT0000015可能通过上皮间质转化过程促进结直肠癌细胞迁移及侵袭。     

WNK1在结直肠癌中的表达情况及对预后的影响

目的探讨WNK1在结直肠癌(CRC)中的表达情况及对预后的影响。方法采用免疫组织化学方法检测68例CRC患者中WNK1基因的表达水平。采用log-rank检验和Kaplan-Meier生存曲线分析WNK1表达水平与总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的关系。采用蛋白免疫印迹法对细胞的上皮和间质标志物进行分析,通过Transwell分析与划痕实验验证WNK1基因对CRC细胞迁移能力的影响。结果 CRC组织WNK1的表达阳性率[(55.9%(38/68)]高于癌旁组织[14.7%(10/68)],差异有统计学意义(P<0.05)。WNK1的表达与淋巴结转移和TNM分期相关(均P<0.05)。WNK1高表达CRC患者OS率和PFS率均低于WNK1低表达患者(均P<0.05)。经蛋白免疫印迹法证实WNK1在HCT116和HCT15细胞系中的表达均下调,HCT116细胞中灰度降低72%,HCT15细胞中灰度降低85%。在HCT116和HCT15细胞中,WNK1的下调可恢复上皮标志物钙黏附蛋白E的表达,并伴随间质标记物波形蛋白的丢失。Transwell结果显示,采用siRNA抑制WNK1基因后HCT116细胞中通过滤膜迁移至下室的细胞(57.00±4.36)少于转染空载体对照组(230.00±8.89),差异有统计学意义(P<0.05);HCT15细胞中通过滤膜迁移至下室的细胞(61.00±3.61)少于转染空载体对照组(241.00±5.52),差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,在HCT116中下调WNK1基因后细胞48 h划痕愈合率(10.7%)低于转染空载体对照组(60.3%),差异有统计学意义(P<0.05);在HCT15中下调WNK1基因后细胞48 h划痕愈合率(7.8%)低于转染空载体对照组(45.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 WNK1在CRC中的表达显著高于正常结直肠组织,且WNK1高表达与CRC TNM分期及复发转移相关。抑制WNK1基因可抑制上皮细胞-间充质转换(EMT)和CRC细胞的迁移能力。     

稳定干扰长链非编码RNA LINC01224结直肠癌细胞株的建立及其对细胞凋亡的影响

目的 建立稳定干扰长链非编码RNA(lncRNA) LINC01224表达的结直肠癌LoVo和SW620细胞株,并探讨下调LINC01224表达对结直肠癌细胞凋亡的影响。方法 使用GEPIA2数据库分析LINC01224在结直肠癌组织中的表达情况;qPCR法检测LINC01224在10种人结直肠癌细胞中的表达水平。3种不同的LINC01224 siRNA分别转染人结直肠癌LoVo细胞,取抑制LINC01224表达效果最显著的siRNA序列构建LINC01224 shRNA慢病毒载体。在HEK293T细胞内包装成重组慢病毒颗粒,再感染LoVo和SW620细胞,经嘌呤霉素筛选后以有限稀释法获得稳定干扰LINC01224的单克隆细胞。MTS法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 LINC01224在结直肠癌组织中的表达高于正常结直肠组织,其在10种结直肠癌细胞中的表达也高于正常结直肠上皮细胞HCOEPic。siRNA-3对LoVo细胞内LINC01224表达的抑制率高于siRNA-1和siRNA-2。故选择siRNA-3设计LINC01224 shRNA。与对照组(sh-NC组)...     

lncRNA FOXCUT和FOXC1在结直肠癌中的表达及其相关性

目的探析长链非编码RNA(lncRNA)FOXCUT和FOXC1在结直肠癌中的表达及其相关性。方法收集75例结直肠癌组织及癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学、蛋白印迹法检测FOXC1表达水平,Real Time PCR检测FOXCUT mRNA和FOXC1 mRNA表达,并分析其相关性及lncRNA FOXCUT与结直肠癌患者临床病理特征的关系。 结果结直肠癌组织中FOXC1表达和lncRNA FOXCUT高表达率均高于癌旁正常组织(P＜0.05)。lncRNA FOXCUT表达与结直肠癌TNM分期、AJCC分期、分化程度、远端转移、淋巴结转移等病理特征相关(P＜0.05)。结直肠癌组织FOXC1 mRNA、FOXCUT mRNA表达水平高于癌旁正常组织(P＜0.05)。经相关性分析,结直肠癌组织FOXC1 mRNA表达与FOXCUT mRNA表达呈正相关(r=0.517,P＜0.05)。 结论FOXC1与FOXCUT在结直肠癌组织中呈高表达,且FOXC1 mRNA与FOXCUT mRNA表达呈正相关,推测两者可能相互作用调控肿瘤细胞增殖及侵袭。     

基于lncRNA DGCR5介导miR-1180/SFRP1/Wnt通路对结直肠癌细胞生长转移的影响

目的分析长链编码RNA(lncRNA)DiGeorge综合征临界区基因5(DGCR5)对结直肠癌细胞生长转移的影响,并基于miR-1180/分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)/Wnt通路分析其中的机制。方法选取人结直肠癌细胞系SW480进行培养。将SW480细胞分为对照组(C组,正常培养SW480细胞)、DGCR5 NC组(SW480细胞+转染DGCR5 NC载体)、DGCR5 mimic组(SW480细胞+转染DGCR5 mimic载体)以及DGCR5 inhibitor组(SW480细胞+转染DGCR5 inhibitor载体)。转染完成后采用qPCR检测各组细胞中DGCR5的表达,验证细胞是否转染成功;分别采用CCK8法、克隆形成实验、平板划痕实验以及Transwell实验检测细胞活力、增值、迁移以及侵袭情况。荧光素酶报告测定lncRNA DGCR5与miR-1180的靶向关系;qPCR检测转染后各组细胞miR-1180/SFRP1的表达;WB检测各组细胞SFRP1、Wnt和β-catenin蛋白表达水平。结果与DGCR5 NC组比较,DGCR5 inhibitor组细胞的lncRNA DGCR5表达水平下降;DGCR5 mimic组细胞的lncRNA DGCR5表达水平上升(P<0.05)。与DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组细胞相对增值率显著下降,DGCR5 inhibitor组显著上升(P<0.05)。与C组、DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组细胞的克隆数目、细胞愈合率、细胞侵袭数量均明显降低,而DGCR5 inhibitor组均明显升高(P<0.05)。荧光酶素报告结果证实miR-1180是lncRNA DGCR5的靶基因。与DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组miR-1180、Wnt mRNA及蛋白、β-catenin蛋白表达水平均明显降低,SFRP1 mRNA及蛋白表达水平明显升高;而DGCR5 inhibitor组miR-1180、Wnt mRNA及蛋白、β-catenin蛋白表达水平均明显升高,SFRP1 mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论lncRNA DGCR5可通过抑制miR-1180/SFRP1/Wnt通路的表达来抑制SW480细胞的增殖、转移与侵袭。     

lncRNA RARB-AS2对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、细胞周期和侵袭的影响及分子机制

目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)RARB-AS2在口腔鳞状细胞癌组织中的表达，探讨RARB-AS2对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、细胞周期和侵袭的影响及分子机制。方法 癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析RARB-AS2在口腔鳞状细胞癌组织和癌旁组织中表达水平。实时荧光定量PCR(qPCR)检测RARB-AS2在4种口腔鳞状细胞癌细胞SCC-9、CAL-27、HSC-3、SCC-25以及口腔上皮角质细胞HOK中表达水平。通过脂质体转染法在SCC-25细胞中分别转染RARB-AS2高表达质粒和对照质粒，定义为RARB-AS2组和对照组。qPCR检测SCC-25细胞中RARB-AS2表达水平。平板克隆实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测SCC-25细胞增殖、细胞周期和侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证RARB-AS2和miR-455-3p的靶向关系。TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中RARB-AS2和miR-455-3p表达的相关性。qPCR检测SCC-25细胞中miR-455-3p表达水平。Western blot法检测SCC-25细胞中PI3K/AKT信号通路蛋白p-...     

结直肠癌中LINC01915生物学功能的预测及其临床意义

目的 探讨LINC01915在结直肠癌组织中的生物学功能以及与临床病理特征以及预后的关系，寻找用于诊断和评价预后的生物学标志物。方法 癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库下载结直肠腺癌患者的相关信息，比较长基因间非蛋白质编码RNA 01915(long intergenic non-protein coding RNA 01915,LINC01915)在TCGA数据库结直肠腺癌(colon adenocarcinoma/rectum adenocarcinoma, COAD/READ)及癌旁数据中的表达情况以及与临床病理特征、预后的相关性。收集8例结直肠癌患者的癌及癌旁组织样本，提取RNA通过qPCR实验比较LINC01915在结直肠癌及癌旁组织中的表达情况。KEGG-GO(Kyoto encyclopedia of genes and genomes-gene ontology)、基因集富集分析(gene set enrichment analysis, GSEA)分析探究LINC01915生物学功能。在HCT15细胞中下调LINC019...     

低氧微环境增强MACC1调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌肿瘤干细胞样特性

目的探讨低氧微环境和结肠癌转移相关基因1(MACC1)对结直肠癌(CRC)肿瘤干细胞(CSC)样特性生物学行为的影响及机制。 方法将空载体(LV-ctrl组)、MACC1过表达载体(LV-MACC1)转染结肠癌细胞HCT116,同时在低氧微环境条件下培养LV-MACC1细胞(LV-MACC1+hypoxia组)。分别应用CCK-8法及免疫细胞化学法、划痕实验、Transwell侵袭实验、肿瘤球形成实验检测细胞增殖、迁移能力、侵袭能力及体外肿瘤形成能力。免疫印迹法检测MACC1、CD133、CD44、AKT和p-AKT蛋白的表达,740 Y-P验证PI3K/AKT在MACC1诱导的肿瘤干细胞样特性中的作用。 结果与LV-ctrl组比较,LV-MACC1组的细胞增殖、迁移和侵袭能力均增强,肿瘤球形成增多,CD44、CD133和p-AKT蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。与LV-MACC1组比较,LV-MACC1+hypoxia组的细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,肿瘤球形成增多(P＜0.05)；CD44、CD133和p-AKT蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。与对照组比较,740 Y-P增加了细胞CD133和CD44蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论低氧微环境增强MACC1调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌细胞出现肿瘤干细胞样特性。     

RASGRF1在结直肠癌组织中高表达对肿瘤转移和不良预后的影响

【目的】探讨RASGRF1在结直肠癌组织中表达及临床意义以及下调结肠癌细胞株RASGRF1表达,检测对细胞增殖、细胞周期、迁移的影响。【方法】免疫组化法检测35例结直肠癌组织、35例癌旁正常结肠组织、35例结直肠腺瘤组织RASGRF1表达水平,并分析RASGRF1表达与结直肠癌病人临床病理参数的关系;采用RNAi技术下调结肠癌细胞株HCT116中RASGRF1表达,CCK8法、流式细胞术检测对细胞增殖、细胞周期影响。【结果】结直肠癌组织中RASGRF1表达高于癌旁正常组织及结直肠腺瘤组织;RASGRF1蛋白表达与结直肠癌病人性别(P=0.021)、组织分型(P=0.009)、有无远处转移(P=0.019)及Dukes分期(P=0.001)相关。女性病人RASGRF1表达水平高于男性病人;RASGRF1在黏液腺癌、印戒细胞癌中表达水平显著高于腺癌;伴有远处转移者高于无远处转移;Dukes C、D期高于Dukes A、B期;与年龄、肿瘤部位、肿瘤最大径、分化不相关(P>0.05)。下调HCT116细胞中RASGRF1表达可抑制其增殖、迁移及影响细胞周期。【结论】RASGRF1可能作为促癌因子参与结直肠癌的发生发展,进一步研究有望将作为结直肠癌患者独立预后分子标志物和新的治疗靶点。     

CAPN1对胆囊癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的检测钙蛋白酶1(CAPN1)在胆囊癌(GBC)组织中的表达水平,探究其对人GBC细胞系(GBC-SD)增殖、侵袭及转移的影响。方法采用免疫组化法检测GBC组织、癌旁组织、正常胆囊组织中CAPN1蛋白表达水平,分析其与GBC患者临床病理参数的关系。体外培养GBC-SD细胞和正常胆囊上皮细胞,将GBC-SD细胞分为CAPN1-si RNA组、阴性对照组和空白对照组,病毒感染72 h后,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)技术检测细胞中CAPN1 m RNA及蛋白表达水平,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 GBC组织、癌旁组织、正常组织中CAPN1阳性表达率比较,差异有统计学意义(P0.05)。不同TNM分期、病理分化和有无远处转移的GBC患者CAPN1阳性表达率比较,差异有统计学意义(P0.05)。GBCSD细胞中CAPN1 m RNA及蛋白水平显著高于正常胆囊上皮细胞(P0.05),感染CAPN1-si RNA后,GBC-SD细胞中CAPN1 m RNA及蛋白表达显著下调(P0.05)。与空白及阴性对照组比较,si RNA组GBC-SD细胞的增殖、迁移、侵袭能力均显著下降(P0.05)。结论 CAPN1在GBC组织中高表达,CAPN1沉默可抑制GBC细胞的增殖、迁移及侵袭,可能作为潜在生物靶标应用于GBC基因治疗。     

siRNA沉默MACC1基因表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达对Hela宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响。方法通过脂质体将siRNA MACC1及siRNA NC转入Hela细胞中,RT-PCR及western blot检测转染效果,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E,基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平。结果与siRNA NC组比较,siRNA MACC1组中MACC1蛋白及mRNA表达量降低(P0.01),细胞活力及侵袭能力下降(P0.01),细胞周期阻滞在G1期,cyclin D1、cyclin E、MMP2、MMP9及p-ERK表达量下调(P0.01)。结论siRNA MACC1能显著的抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭,可能与下调ERK磷酸化水平有关。