MiR-650通过靶向ING4促进骨肉瘤细胞增殖的研究

目的 探讨骨肉瘤组织和细胞系中miR-650的表达及其在肿瘤形成中的作用机制.方法 用实时荧光定量 PCR的方法,检测并比较肿瘤组织及癌旁正常组织、骨肉瘤细胞系(M G63)及健康人成骨细胞(hFOB1.19)之间的miR-650表达情况;用M T T实验检测不同组细胞的增殖情况;用Western blot的方法检测调节生长抑制因子4(ING4)蛋白的表达情况.结果miR-650在骨肉瘤组织及细胞系中的表达显著高于癌旁正常组织及健康人成骨细胞;抑制miR-650的表达后,M G63细胞的增殖能力显著减弱.此外,miR-650表达减低后,ING4的表达显著升高,其中阴性对照组、乱序组、miR-650抑制剂组的ING4 mRNA分别为1.00 ± 0.16、1.08 ± 0.14、5.35 ± 0.32;蛋白表达分别为:0.62 ± 0.06、0.59 ± 0.12、2.45 ± 0.20;miR-650抑制组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);而抑制ING4升高后,M G63细胞的增殖能力有一定的恢复.结论 miR-650可以通过降低ING4的表达促进M G63细胞的增殖,提示miR-650可能成为骨肉瘤治疗的新靶点.     

S100A4基因在不同骨肉瘤细胞和组织中的表达

[目的]检测S100A4基因在人骨肉瘤细胞系MG-63、U-20S以及骨肉瘤组织中的表达情况并分析其临床意义.[方法]应用Real -time PCR方法检测S100A4基因在人骨肉瘤细胞MG -63及U- 20S中的表达,用免疫组织化学SP法检测骨肉瘤S100A4、CD44V6蛋白表达,并分析二者的关系.[结果]人骨...     

Tenascin-C : 骨肉瘤预后标志物

背景：在过去的数十年间,转移性骨肉瘤的治疗一直是亟待解决的临床难题。细胞外基质蛋白作为肿瘤微环境关键组成成份,在骨肉瘤进展过程中发挥着重要作用。在此,我们通过基因芯片技术分析不同转移能力骨肉瘤细胞系基因表达,在编码细胞外基质蛋白基因中寻找与骨肉瘤进展相关的基因,并通过免疫组化技术检测这些基因在骨肉瘤标本中的表达,以评价其与临床预后的关系。 方法：通过基因芯片技术分析骨肉瘤细胞系MG63-wt及其高转移亚系MG63-A1的基因表达差异。对两个细胞系间表达差异达4倍以上的基因通过Gene Ontology方法筛选编码细胞外基质蛋白的基因。通过RT-PCR和western blot验证候选基因的表达水平,免疫组化检测候选基因在骨肉标本中的表达以分析其与临床预后的关系。 结果：基因芯片检测和Gene Ontology分析发现一个重要的细胞外基质蛋白――Tenascin-C的表达在高转移骨肉瘤细胞系MG63-A1中明显降低。RT-PCR和western blot分别在mRNA水平和蛋白质水平证实其表达水平。免疫组化检测发现Tenascin-C在骨肉瘤标本中的阳性表达见于细胞外间隙。Tenascin-C低表达组（＜20％）患者的预后较差,差异有统计学意义。 结论：Tenascin-C的表达水平与骨肉瘤患者预后呈正相关。Tenascin-C在骨肉瘤进展中的生物学作用有待进一步的体外细胞模型研究和更大样本临床研究。     

miR-99a抑制物对骨肉瘤细胞生物行为学的影响

目的:探索miR-99a在骨肉瘤中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生物学行为特性的影响。方法:收集7例骨肉瘤组织及瘤旁骨组织,RT-PCR检测并比较miR-99a表达情况;RT-PCR技术检测miR-99a在骨肉瘤细胞系143B、MG-63和U2OS中的相对表达量,以人成骨细胞系hFOB1.19作为对照比较;RT-PCR检测hepG2、lovo、A549和MCF-7中的miR-99a相对表达量,以143B作对照比较。培养人骨肉瘤细胞系143B,瞬时转染miR-99ainhibitor后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕试验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western Blot检测RECK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况。结果:miR-99a在7例骨肉瘤组织中的相对表达量(0.81±0.06)要明显高于瘤旁骨组织(0.48±0.06)(P<0.01)。3组骨肉瘤细胞系miR-99a表达量均高于人成骨细胞hFOB1.19,差异有统计学意义(P<0.01);骨肉瘤细胞系中miR-99a相对表达明显高于四种非骨肉瘤细胞系(P<0.05)。miR-99ainhibitor转染组细胞增殖速率显著减慢,低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组早期凋亡和晚期凋亡均未明显增加(P>0.05);转染组细胞迁移能力明显受到抑制;转染组143B细胞穿过小室底膜的数目明显低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组RECK蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9蛋白表达下调。结论:miR-99a在骨肉瘤组织和细胞系中呈现高表达,下调miR-99a能抑制骨肉瘤细胞系143B增殖、侵袭和转移能力,其机制可能是通过调控RECK/MMP-2蛋白表达而实现的。     

Aurora-B在骨肉瘤中的表达及与远处转移的关系

目的 通过对Aurora-B在骨肉瘤中的表达及其与远处转移关系的研究,探讨其是否参与肿瘤转移.方法 收集60例经外科手术切除的骨肉瘤组织,10%甲醛固定,常规石蜡包埋.采用免疫组织化学方法检测Aurora-B在骨肉瘤组织中的表达,另取21例骨软骨瘤作为对照组.同时采用Western blot法检测Aurora-B蛋白在骨肉瘤细胞株U2-OS的表达情况.结果 免疫组织化学法检测显示Aurora-B表达在细胞核.骨肉瘤组织标本中53.3%阳性表达,骨软骨瘤组织中14.3%阳性表达.骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中Aurora-B的表达比较差异有显著性(P＜0.05),但与组织类型无相关性.在14例发生远处转移的骨肉瘤标本组织中11例Aurora-B阳性表达;阳性表达率为78.6%明显高于未发生远处转移的标本组织中Aurora-B阳性表达率45.7%(21/46),而且有丝分裂期的骨肉瘤细胞Aurora-B染色较深.Western blot法检测同样证实Aurora-B在人骨肉瘤细胞株U2-OS中阳性表达.结论 Aurora-B极有可能参与了骨肉瘤的发生、发展和远处转移,有可能成为骨肉瘤新的诊断及分子治疗靶点.     

lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的 探讨lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及其在调控骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法 收集骨肉瘤标本及配对癌旁正常组织标本6例，qRT-PCR检测骨肉瘤组织中DIO3OS表达。MG-63细胞转染si-DIO3OS或pcDNA3.1-DIO3OS,敲降或过表达DIO3OS后，通过CCK-8实验评估细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测骨肉瘤细胞MG-63迁移与侵袭能力。基于TARGET数据库，根据患者骨肉瘤组织中DIO3OS表达水平分为高表达组与低表达组，Kaplan Meier生存分析评估DIO3OS表达水平与患者预后的关系。结果 qRT-PCR结果显示，骨肉瘤组织及细胞中DIO3OS表达下调。敲降DIO3OS表达时，CCK-8实验结果表明骨肉瘤细胞MG-63增殖能力增加，划痕实验和Transwell实验结果显示MG-63细胞迁移与侵袭能力增加(P<0.05)。过表达DIO3OS后，CCK-8、划痕实验和Transwell实验结果显示，MG-63细胞的增殖、迁移与侵袭能力减弱(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示，DIO3OS高表...     

EFEMP1促进骨肉瘤侵袭及转移能力的研究

目的 检测EFEMP1在骨肉瘤组织及细胞株F4和F5M2中的表达,探讨EFEMP1在骨肉瘤细胞中的表达,明确其对骨肉瘤细胞侵袭和迁移的影响。 方法 采用免疫组织化学SP法检测45例临床骨肉瘤及12例骨软骨瘤病例肿瘤组织中EFEMP1表达;采用免疫印迹法(Western blot)及逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测具有不同转移潜能的骨肉瘤细胞株(F4、F5M2)中EFEMP1的表达水平;Tanswell实验检测重组人EFEMP1对F5M2细胞侵袭和迁移的影响。 结果 免疫组化结果显示在45例骨肉瘤标本中,有42例EFEMP1阳性(93.3%),其中强阳性为29例(64.4%),3例(6.7%)为阴性。骨软骨瘤中EFEMP1表达均为阴性。qRT-PCR检测以及Western-blot结果显示,在mRNA和蛋白水平上,骨肉瘤细胞株F4和F5M2中均有EFEMP1的表达,F5M2细胞株EFEMP1的表达高于F4细胞株,Western-blot显示EFEMP1在F4和F5中均有表达,且在F5M2中EFEMP1表达水平高于F4(P＜0.05),这一结果与qRT-PCR检测结果一致。Tanswell实验结果显示,与阳性对照组和空白对照组相比,实验组F5M2细胞的侵袭和迁移能力显著增加,重组人全长蛋白EFEMP1可促进骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。 结论 EFEMP1在人骨肉瘤组织中表达水平增高,骨肉瘤细胞株F4及F5M2中EFEMP1表达阳性,且高转移骨肉瘤细胞株F5M2中EFEMP1表达量较低转移细胞株F4表达水平明显增高,重组人EFEMP1能够促进骨肉瘤细胞侵袭及转移。EFEMP1可为骨肉瘤患者早期诊断和治疗提供一个新的策略。      

骨肉瘤中survivin、Caspase-8的表达及其与凋亡的相关性研究

目的探讨survivin mRNA、Caspase-8蛋白在骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法分别采用RT-PCR和免疫组化技术检测40例骨肉瘤及正常组织中survivin mRNA和Caspase-8蛋白的表达,运用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果77.5%的骨肉瘤组织survivin mRNA呈阳性表达,显著高于正常组织;Caspase-8蛋白在骨肉瘤和正常组织中的阳性表达率分别为27.5%和85%(P<0.05);在骨肉瘤组织中,survivin mRNA和Caspase-8蛋白表达呈负相关;survivin mRNA阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显低于survivin mRNA阴性组(P<0.05);Caspase-8蛋白阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显高于Caspase-8蛋白阴性组(P<0.05)。结论survivin、Caspase-8均参与骨肉瘤的发生、发展变化,survivin是通过抑制Caspase-8的活性而发挥其抑制细胞凋亡作用的。     

同源重组修复蛋白RAD51在骨肉瘤中的表达及其意义

目的:观察同源重组修复蛋白RAD 51在人骨肉瘤组织及细胞中的表达。方法:分别采用免疫组化法和免疫印迹法检测人骨肉瘤组织和细胞中RAD 51蛋白的表达水平变化。结果:RAD 51蛋白在骨肉瘤组织及细胞中均高表达,组织表达水平与性别、年龄、临床分期和病理组织学类型间均无相关性;细胞表达水平随着用药剂量的增加而逐渐增高。结论:RAD 51在骨肉瘤中高表达,可能参与了骨肉瘤的化疗抵抗。     

骨肉瘤组织中MICA基因mRNA和蛋白的表达

【目的】 检测骨肉瘤组织中MHC I类链相关蛋白A(MHC class I chain-related A,MICA)基因mRNA和蛋白的表达情况,为探讨骨肉瘤的肿瘤免疫机制提供信息&#65377; 【方法】 应用RT-PCR方法检测MICA mRNA在11例新鲜骨肉瘤组织和5个骨肉瘤细胞株中的表达情况;分别应用免疫组织化学方法&#65380;Western blot和流式细胞术检测66例石蜡包埋骨肉瘤组织&#65380;6例石蜡包埋正常人骨组织&#65380;9例新鲜骨肉瘤组织和5个骨肉瘤细胞株中MICA蛋白的表达情况&#65377; 【结果】 骨肉瘤组织中MICA mRNA表达率为81.8%(9/11),5个骨肉瘤细胞株均表达MICA mRNA;MICA蛋白在骨肉瘤组织和正常骨组织的表达率分别为51.6%(34/66)和0%(0/6);骨肉瘤细胞株Saos-2&#65380;MG63和HOS阳性表达膜表面MICA蛋白,而细胞株U2OS和OS732只有少量细胞呈阳性表达&#65377;【结论】 MICA mRNA和蛋白广泛表达于骨肉瘤组织和细胞株&#65377;     

原发性与复发性骨肉瘤差异蛋白质组学研究

目的 比较原发性与复发性骨肉瘤差异蛋白质,为寻找骨肉瘤复发的特异标记物提供依据.方法 分别对5例骨肉瘤标本和4例复发性骨肉瘤提取总蛋白,然后双向凝胶电泳,重复3次,银染后扫描用Image2 Master 2DE软件分析寻找差异蛋白,切除差异蛋白质点进行MS+MS/MS质谱鉴定,获取肽质指纹图谱并查询NCBI数据库寻找匹配蛋白质.结果 获得重复性较好的双向电泳银染图谱,原发性与复发性骨肉瘤组织蛋白质点数分别为(1 206±161)和(1 387±185),找到明显差异的蛋白质点42个,并成功鉴定出13个.与原发性骨肉瘤相比,5个蛋白质在复发性骨肉瘤中表达下降;8个蛋白质在复发性骨肉瘤表达水平升高,其中β2微球蛋白在原发性骨肉瘤中表达缺失.结论 原发性骨肉瘤与复发性骨肉瘤存在明显差异蛋白质,β2微球蛋白有可能成为诊断复发性骨肉瘤的分子标记物及检测指标.     

骨肉瘤50例病理基础与MRI表现

目的 比较骨肉瘤MRI表现与病理的关系。方法 50（男38，女12）例患，均行平片及MRI检查，7例行CT扫描，分析其MRI侵袭特点、信号及其与成骨性之间的关系。结果 MRI显示病变边界清晰，骨质受累长度6－31cm，14例越过骺线侵犯骨骺；20例侵及骨性关节面，其中4例伴关节腔积液，1例侵犯邻骨。MRI发现跳跃性病灶2例，患骨T2WI的信号高低与是否成骨性肿瘤有关（P＜0.05）。49例伴软组织肿块；2例转移。结论 MRI可很好地显示骨肉瘤的部位和骨内外侵犯范围；患骨T2WI信号高低与瘤骨所占比例有关。     

高危骨肉瘤的临床特点及治疗对策

目的 通过分析61例骨肉瘤后因素及生存率，探讨高危骨肉瘤临床特点及治疗对策，报告16例高危骨肉瘤治疗经验。方法 以经肢体挽救手术治疗有完整随访资料的61例骨肉瘤为基础，寿命表法计算生存率，采用图像分析技术对肿瘤预后相关因素包括肿瘤的绝对长度、绝对宽度、绝对深度、绝对面积、软组织肿块最大横径进行分析。结果 61例骨肉瘤随访1～10a,5a生存率57.5%，外科分期Ⅲ期；骨肉瘤与宿生主骨面积比≥2/3；软组织肿块最大横径≥6cm；病理骨折；活检标本PCNA阳性细胞检出占平均视野2/3以上均属高危骨肉瘤。采用术前多次化疗，深静脉持续给药；高选择骨肉瘤原发灶和转移灶滋养动脉化疗并栓塞；术前放疗和肢体挽救术处理高危骨肉瘤16例，随访1.5a，死亡2例，带病存活5例，无病存活9例，保肢率68.7%。结论 本研究使一些高危骨肉瘤得到了积极救治，更具备综合性和肿瘤针对性。     

PTEN在骨肉瘤组织中的表达及意义

目的:研究骨肉瘤组织中抑癌基因PTEN的表达情况,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的可能作用.方法:用免疫组化S-P法检测PTEN蛋白在38例骨肉瘤及20例骨软骨瘤石蜡标本中的表达情况.结果:PTEN蛋白在骨肉瘤中表达阳性率为55.3%,在骨软骨瘤中为90.0%,骨肉瘤与骨软骨瘤相比有显著差异(P＜0.01).结论:抑癌基因PTEN蛋白在骨肉瘤组织中表达下调,可能与骨肉瘤的恶性进展有关.     

Fas在骨肉瘤中的表达及其意义

免疫组化S-P方法检测Fas在骨肉瘤及骨软骨瘤中的表达。Fas在38例骨肉瘤中表达阳性率为73．7％，加例骨软骨瘤中为95．0％，差异显著（P〈0．05）。Fas在骨肉瘤组织中表达下调，可能与骨肉瘤的恶性进展有关。     

7例骨膜骨肉瘤临床预后分析

目的 探讨骨膜骨肉瘤的临床病理特征及预后.方法 对7例骨膜骨肉瘤患者进行临床表现、病理特征及预后分析.男4例,女3例;年龄14～29岁,中位年龄21岁.4例高级别的骨膜骨肉瘤患者手术后接受化疗.结果7例患者随访48～128个月,平均84个月,无1例出现局部肿瘤复发和远处转移,均无瘤生存.结论 骨膜骨肉瘤是一种罕见的表面骨肉瘤,早期诊断和及时治疗可以改善患者的预后.     

干扰素在骨肉瘤治疗中的作用

干扰素(interferon,IFN)是一组具有抗血管生成、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,在体外和异体移植模型中都显示出有效的抗骨肉瘤活性。临床试验表明,IFN可作为骨肉瘤手术治疗单一辅助药物,并能明显提高患者无瘤生存率。文中就IFN在骨肉瘤中的作用展开综述,以期为骨肉瘤的治疗提供新思路。     

Establishing an osteosarcoma associated protein-protein interaction network to explore the pathogenesis of osteosarcoma

Background

The aim of this study was to establish an osteosarcoma (OS) associated protein-protein interaction network and explore the pathogenesis of osteosarcoma.

Methods

The gene expression profile {"type":"entrez-geo","attrs":{"text":"GSE9508","term_id":"9508"}}GSE9508 was downloaded from the Gene Expression Omnibus database, including five samples of non-malignant bone (the control), seven samples for non-metastatic patients (six of which were analyzed in duplicate), and 11 samples for metastatic patients (10 of which were analyzed in duplicate). Differentially expressed genes (DEGs) between osteosarcoma and control samples were identified by packages in R with the threshold of |logFC (fold change)| > 1 and false discovery rate < 0.05. Osprey software was used to construct the interaction network of DEGs, and genes at protein-protein interaction (PPI) nodes with high degrees were identified. The Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery and WebGestalt software were then used to perform functional annotation and pathway enrichment analyses for PPI networks, in which P < 0.05 was considered statistically significant.

Results

Compared to the control samples, the expressions of 42 and 341 genes were altered in non-metastatic OS and metastatic OS samples, respectively. A total of 15 significantly enriched functions were obtained with Gene Ontology analysis (P < 0.05). The DEGs were classified and significantly enriched in three pathways, including the tricarboxylic acid cycle, lysosome and axon guidance. Genes such as HRAS, IDH3A, ATP6ap1, ATP6V0D2, SEMA3F and SEMA3A were involved in the enriched pathways.

Conclusions

The hub genes from metastatic OS samples are not only bio-markers of OS, but also help to improve therapies for OS.     

miR-499a-5p在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤发生发展的影响

目的:探讨miR-499a-5p在骨肉瘤(OS)中的表达及其对OS发生发展的影响.方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证miR-499a-5p在OS细胞系(143B、MNNG)及正常成骨细胞(hFOB1.19)中的差异表达,并使用3种在线预测工具对miR-499a-5p的靶基因进行了预测,并取3种数据共同交...     

巨噬细胞融合瘤苗对大鼠骨肉瘤的主动性免疫治疗

目的：探讨融合瘤苗在骨肉瘤免疫治疗中的应用潜力。方法：用ＵＭＲ１０６细胞系建立大鼠骨肉瘤动物模型,然后将该细胞系与大鼠巨噬细胞融合作为瘤苗应用于荷瘤大鼠,观察其抑制肿瘤生长和肺转移的效果。结果：在治疗６ＯＫ时治疗组和对照组相比,瘤重明显减小（Ｐ〈０．０１）;肺转移发生率降低（Ｐ〈０．０１）。结论：骨肉瘤细胞与巨噬细胞的两便瘤苗可望的骨肉瘤的治疗中发挥作用。