survivin在喉癌组织中表达及其与细胞凋亡的关系

目的：探讨凋亡抑制蛋白survivin在喉癌中的表达及其与凋亡和临床病理参数的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测喉癌细胞株Hep2、牙周膜细胞及40例喉癌组织和8例正常喉黏膜中survivin蛋白的表达,半定量逆转录PCR检测survivin mRNA表达,DNA原位末端标记技术(tunel)检测喉癌组织的细胞凋亡指数(AI)。结果：survivin在正常喉黏膜、牙周膜细胞中不表达,Hep2细胞株和57.5％（23例）喉癌组织表达survivin蛋白和mRNA。在病理学分级为Ⅰ级的喉鳞癌标本中,survivin蛋白阳性率（33.3％）明显低于Ⅱ、Ⅲ级的标本（72.7％,P<0.05);临床Ⅲ～Ⅳ期喉鳞癌患者survivin蛋白阳性表达率为76.2％,明显高于临床Ⅰ～Ⅱ期患者（36.8％, P<0.05）;喉癌颈部淋巴结转移组中survivin 蛋白阳性率（100％）显著高于未转移组（48.5％,P<0.05)。survivin表达阳性组的AI 为2.93±1.20,阴性组为4.05±1.42,两者比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论：survivin在喉癌中高表达可能通过抑制细胞凋亡而在喉癌的发生发展中发挥一定作用。     

Omi/HtrA2和Caspase-9在食管癌中的表达及与凋亡的关系

目的探讨在食管鳞癌中Omi/HtrA2、Caspase-9蛋白的表达及其与癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法对80例经病理确诊为食管鳞癌病例的正常组织、癌旁组织及癌组织进行Omi/HtrA2和Caspase-9蛋白免疫组化分析。采用TUNEL法检测细胞凋亡水平,并分析食管癌中Omi/HtrA2和Caspase-9的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。结果 1 Omi/HtrA2、Caspase-9在食管鳞癌组织阳性表达率分别为76.25%、58.75%,在癌旁组织中的阳性表达率分别为27.50%、72.50%,在正常组织中的阳性表达率分别为22.50%、85.00%;Omi/HtrA2、Caspase-9在食管鳞癌组织中的阳性表达率与其在癌旁组织、正常组织中蛋白的阳性表达率分别进行比较,差异均有统计学意义(P0.05);癌旁组织与正常组织的Omi/HtrA2和Caspase-9蛋白阳性表达率进行比较,差异均无统计学意义(P0.05)。2 Omi/HtrA2蛋白表达阳性组癌细胞凋亡指数(18.186±1.331)‰,明显高于阴性组凋亡指数(5.108±1.783)‰(P0.01);Caspase-9蛋白表达阳性组细胞凋亡指数为(17.763±0.675)‰,明显高于阴性组细胞凋亡指数(11.619±0.712)‰(P0.05)。结论 Omi/HtrA2在食管癌中高表达,而Caspase-9在食管癌中低表达,两者在促进食管癌细胞凋亡中有相反的调节作用。     

survivin在鼻型NK/T细胞淋巴瘤的表达及其与caspase-3、ki-67相关性的研究

目的:探讨survivin在鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达,并进一步分析其表达与caspase-3基因表达和细胞增殖的关系。方法:应用免疫组化EnVision System检测survivin、caspase-3和ki-67在50例鼻型NK/T细胞淋巴瘤和12例正常淋巴结组织石蜡标本中的表达,并分析肿瘤组织中survivin与caspase-3基因表达、ki-67增殖指数的关系。结果:肿瘤组织中survivin阳性表达率为60%(30/50),正常淋巴结组织中survivin阳性表达率为16.7%(2/12),且主要局限于少数生发中心细胞,两者差异有显著性(P<0.05);caspase-3在肿瘤组织和正常淋巴结中的阳性表达率分别为84%(42/50)和100%(12/12),但两者差异无显著性统计学意义(P>0.05)。survivin高表达与caspase-3基因表达下调密切相关(P<0.05)。survivin阳性组ki-67增殖指数(38.23±16.54)%明显高于survivin阴性组(23.15±21.53)%(P<0.05)。结论:在鼻型NK/T细胞淋巴瘤组织中,survivin可能通过抑制caspase-3的激活而发挥其抑制细胞凋亡的作用,survivin与细胞增殖指数呈正相关,可能促进肿瘤细胞增殖。survivin异常表达在鼻型NK/T细胞淋巴瘤的发生发展中有一定的作用。     

Caspase-3 mRNA在胃癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的:通过观察Caspase-3mRNA在胃癌组织、非典型增生组织及正常胃粘膜中的表达,探讨Caspase-3及其所介导的细胞凋亡在胃癌发病中的作用。方法:应用原位杂交法和TUNEL染色法检测75例胃癌组织、68例癌旁非典型增生组织和10例正常胃粘膜组织中Caspase-3mRNA的表达和上述组织的凋亡指数。结果:Caspase-3mRNA在胃癌组织和非典型增生组织中的阳性率(38.67％、20.59％)显著低于正常胃粘膜(60％);TUNEL染色证实,胃癌及非典型增生组织的凋亡指数显著低于正常胃粘膜(P<0.05),Caspase-3mRNA阳性组的凋亡指数显著高于阴性组(P<0.05)。结论:由Caspase-3及其所介导的细胞凋亡与胃癌的发生和演进有关。     

生存素基因mRNA和蛋白在胃癌中表达及其意义

目的探讨生存素(survivin)基因mRNA和蛋白表达与胃癌发生发展的关系。方法应用原位杂交和免疫组化技术检测30例胃癌及20例良性胃组织(5例慢性胃炎、5例胃溃疡、10例癌旁正常组织)标本中survivin mRNA和蛋白的表达,并分析其与临床病理参数的关系。原位末端标记技术(TUNEL法)检测细胞凋亡。结果良性胃组织中无survivin的表达,而胃癌组织中survivin mRNA阳性表达率36.67%(P<0.01),蛋白阳性率46.67%(P<0.01),并且其表达在不同的TNM分期、有无淋巴结转移之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论survivin在胃癌中显著表达,并明显抑制凋亡,在胃癌的发生发展过程中起重要作用。     

甲状腺癌中端粒酶逆转录酶mRNA和Survivin的表达及意义

目的: 探讨甲状腺癌(TC)中端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA和survivin蛋白的表达与细胞增殖和凋亡的关系.方法:采用原位杂交法、末端脱氧核苷酸酶标记法及免疫组化技术检测46例TC中TERT mRNA、细胞凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)和survivin蛋白的表达,20例良性病变作为对照.结果: TC的TERT mRNA和survivin的表达阳性率,增殖指数(PI),凋亡指数(AI)均显著高于对照组;TC中TERT mRNA和survivin的表达均与临床分期有关,survivin还与淋巴结转移有关;二者的表达呈显著正相关;TERT mRNA和survivin阳性表达的TC组织AI明显低于阴性组,而PI均显著高于阴性组(P＜0.05).结论: TERT和survivin特异性的表达于TC组织中,可能通过促细胞增殖和抗凋亡途径,参与TC的发生发展.     

胰腺癌组织中Midkine的表达与细胞增殖及凋亡的关系

目的研究Midkine(MK)蛋白在人胰腺癌组织中的表达与肿瘤细胞增殖和凋亡之间的关系及意义。方法收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组化SP法检测MK蛋白和增殖细胞核抗原Ki67的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数,另取同期15例正常胰腺组织作对照。结果15例正常胰腺组织中均未发现MK和Ki67阳性表达,细胞凋亡较少(0.63±0.21);77.1%(35/49)的胰腺癌组织中有MK阳性表达,其表达与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05);49例胰腺癌组织中Ki67平均标记指数(LI)为(31.67±15.41),平均凋亡指数(AI)为(5.93±4.18);MK表达阳性组Ki67平均标记指数为(35.27±16.03),显著高于阴性组的(22.67±13.66)(P<0.05);MK表达阳性组凋亡指数为(5.13±2.69),显著低于阴性组的(7.93±6.65)(P<0.05)。结论MK蛋白可作为反映胰腺癌生物学行为的指标之一,其在胰腺癌中的表达可能起到促进肿瘤细胞增殖和抑制凋亡的作用,MK基因可能成为胰腺癌治疗的新靶点。     

凋亡抑制蛋白livin在人胃癌中的表达以及和survivin表达的关系

目的:探讨胃癌组织中凋亡抑制蛋白livin表达情况及其与各临床病理因素的关系,以及和凋亡抑制蛋白survivin表达的相关性。方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测胃癌组织中livinα、livinβ和survivin的mRNA的表达,并用westernblot分析livin和survivin蛋白的表达。结果:40例胃癌组织中livin表达阳性率为47.5%、survivin为60%,而在正常和癌旁组未检出阳性结果;livin的表达与组织分化和淋巴结转移有关,组织分化差,淋巴结转移者livin表达率高(P<0.05);24例survivin阳性样本中有14例livin呈阳性。结论:livin在胃癌组织中表达增高,可作为胃癌的分子标志物,可能成为胃癌治疗的新分子靶点,livin表达和survivin表达在本实验中结果显示没有相关性(P>0.05)。     

肝癌组织中Survivin和NF—κB的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的 分析Survivin、核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)在肝组织中的表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡间的相互关系.方法 应用免疫组织化学链霉卵白素-生物索-辣根过氧化物酶复合物法(streptavidin peroxidase conjugated method,SP)检测44例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织,25例癌旁相应组织、9例正常肝组织中Survivin、NF-κB、Ki-67蛋白的表达情况,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测凋亡细胞.并计算增殖指数(proliferation index,PI)和凋亡指数(apoptosis index,AI).结果 HCC组织中Survivin、NF-κB蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01);HCC组织中Survivin阳性表达病例平均PI值(35.19土16.53)%显著高于阴性表达者(16.38±10.11)%(P<0.05),Survivin阳性表达病例平均Al值(3.15±1.52)%显著低于阴性表达者(5.24±2.27)%(P<0.05);HCC标本中NF-κB阳性表达病例平均PI值(29.88±13.71)%与阴性表达者(24.15±10.87)%比较无统计学意义(P>0.05),NF-κB阳性表达病例平均AI值(2.89±1.42)%显著低于阴性表达者(4.91±2.04)%(P<0.05);NF-κB与Survivin的表达呈显著正相关(P<0.05).结论 Survivin和NF-κB在HCC中高表达.Survivin通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡的方式共同影响肝癌的生物学特性.而NF-κB通过抑制细胞凋亡的方式影响肝癌的生物学特性,对肝癌的细胞增殖无显著影响.NF-κB与Survivin的表达呈正相关.     

人非小细胞肺癌组织中Livin和Caspase-3蛋白的表达

目的:检测人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Livin和Caspase-3蛋白的表达情况,并探讨2者在NSCLC发生、发展中的作用.方法:采用免疫组织化学法分别检测70例NSCLC组织(男42例,女28例;鳞状细胞癌50例(高分化12例,中分化18例,低分化20例),腺癌20例(高分化6例,中分化5例,低分化9例);有淋巴结转移46例,无淋巴结转移24例)、40例癌旁组织、30例正常肺组织中Livin和Caspase-3蛋白的表达水平,并分析2者与肺癌的组织类型、分化程度、淋巴结转移的关系,以及2种蛋白表达的相关性.结果:NSCLC组织中Livin蛋白的阳性表达率(85.7%)高于癌旁组织的45.0%和正常肺组织的0%(P均<0.05);Livin蛋白的阳性表达率与NSCLC的分化程度、组织学类型无关(P均>0.05),与淋巴结转移情况有关(P<0.05).NSCLC组织中Caspase-3蛋白的阳性表达率40.0%低于癌旁组织的72.5%和正常肺组织的83.3%(P均<0.05);Caspase-3蛋白的阳性表达率与NSCLC组织的分化程度、淋巴结转移情况有关(P均<0.05),与组织学类型无关(P>0.05).NSCLC组织中Livin与Caspase-3蛋白的表达呈负相关(r=-0.299,P<0.05).结论:Livin蛋白可能通过抑制Caspase-3蛋白的活性抑制细胞凋亡和促进细胞增殖,加速细胞的恶性转化和NSCLC的发生.     

肝癌组织survivin的表达与凋亡,增殖和p53的关系

目的：研究肝癌survivin的表达与细胞增殖、凋亡以及053表达的关系．方法：应用免疫组化法检测原发性肝癌组织42例、癌旁肝硬化组织34例、正常肝组织10例中survivin，p53，增殖细胞核抗原（PCNA）的表达．应用TUNEL法检测细胞凋亡．结果：在42例肝癌组织中survivin阳性30例（71．4％），显著高于癌旁肝硬化组织（11．8％）和正常肝组织（0％，P〈0．001）．肝癌中survivin蛋白的高表达与病理分级（P=0．003），p53蛋白水平（P=0．008）、细胞增殖凋亡比（P=0．001）及患者生存时间（P=0．002）存在显著相关性，而与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、门脉癌栓（局部转移）无显著相关（P〉0．05）．结论：肝癌组织survivin高表达在打破肝癌细胞的增生和凋亡之间的平衡中起着重要作用．Survivin可能抑制p53阴性肝癌细胞的凋亡，在肿瘤细胞的进一步恶性转化中发挥作用．     

骨肉瘤组织中survivin与VEGF的表达及相关关系的研究

目的检测survivin与VEGF在骨肉瘤中的表达,探讨二者对骨肉瘤血管生成和转移的作用及其关系.方法采用原位杂交、免疫组织化学技术检测38例骨肉瘤组织survivin mRNA表达及VEGF、CD34蛋白表达,计数微血管密度(MVD)、,并与主要临床病理参数进行比较.结果骨肉瘤中survivin mRNA和VEGF表达率均为65.8%,二者表达呈正相关(r=0.546,P＜0.01);骨肉瘤MVD均值为71.5(28～152),高MVD组survivin表达率显著高于低MVD组(P＜0.01).骨肉瘤中survivin mRNA、VEGF表达及MVD与组织学分级无关,与组织学分型(WHO分型)和转移有关.结论survivin基因选择性高表达于骨肉瘤组织,通过抑制细胞凋亡,参与骨肉瘤的发生发展;其对骨肉瘤血管生成和转移的作用可能与VEGF存在密切相关;survivin可能是评价骨肉瘤预后的重要参考指标.     

Survivin表达抑制影响鼻咽癌细胞的增殖与凋亡

目的研究Survivin表达抑制对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨Survivin在鼻咽癌中的生物学功能。方法采用脂质体将Survivin特异性SiRNA(small interfering RNA)转入鼻咽癌细胞株5-8F,培养48h后,收集细胞。逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分别检测Survivin mRNA和蛋白在细胞中表达。流式细胞仪检测细胞凋亡与周期,显微镜下计数检测细胞增殖抑制。结果SiRNA抑制5-8F细胞Survivin表达后,细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.01);S/G1比值显著高于对照组(P<0.01);细胞增殖抑制率也显著高于对照组(P<0.01);脂质体对照组与阴性SiRNA对照组比较,细胞凋亡、周期和增殖差异无显著性(P>0.05)。结论Survivin表达抑制,诱导鼻咽癌细胞凋亡并抑制其增殖。     

Survivin反义寡核苷酸诱导人膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的实验研究

目的Survivin是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族新成员，在多数恶性肿瘤组织中丰富表达。因此，观察Survivin反义寡核苷酸（ASODN）转染对人膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡、增殖、细胞对化疗药物敏感性的影响。方法设计合成针对Survivn mRNA特异性的ASODN，透射电镜观察细胞形态变化，流式细胞术检测各组细胞增殖指数（proliferative index，PI）和碉亡指数（apoptotic index，AI），RT-PCR法分析转染后Sur-vivn mRNA及Caspase-3 mRNA的变化，Western Blot法检测各组Survivn蛋白表达情况，荧光分光光度法测定Caspase-3的活性水平；MTT实验测定T24细胞对丝裂霉素（mitomycin，MMC）的敏感性。结果A—SODN转染组透射电镜下观察到凋亡的征象，而各对照组未见凋亡证据；各转染组细胞AI明显高于各对照组，PI明显低于各对照组（P〈0．01），且在一定范围内呈量一效关系，各对照组间差异无显著性（P〉0．05）；各转染组细胞Survivin mRNA、Survivin的表达较各对照组明显下调（P〈0．01），各对照组间差异无显著性（P〉0．05）；Caspase-3 mRNA的表达在各组细胞间差异无显著性（P〉0．05）；各转染组细胞Caspase-3活化水平较各对照组明显提高（P〈0．01），各对照组间差异无显著性（P〉0．05）；MTT实验显示，转染组MMC半数抑制浓度（IC50）较对照组明显下降，ASODN可提高T24细胞对MMC的敏感性。结论Survivin ASODN转染L细胞后可特异性封闭Survivin的表达，对Caspase-3 mRNA的表达无明显作用，能激活Caspase-3无活性前体，从而诱导T24细胞凋亡，抑制细胞增殖，提高T24细胞对化疗药物MMC的敏感性。     

miR-34a调节人卵巢颗粒细胞凋亡

目的: 探讨miR-34a对人卵巢颗粒细胞的作用及其机制。方法: 体外培养人卵泡颗粒细胞,分为模拟物转染组、抑制物转染组、模拟物阴性对照转染组、抑制物阴性对照转染组,分别转染miR-34a模拟物、miR-34a抑制物、模拟物阴性对照和抑制物阴性对照,另设空白对照组不做任何处理;实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-34a、Bcl-2、Bax、生存素、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、生存素、Caspase-3、剪切体Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果： miR-34a模拟物转染明显下调Bcl-2 mRNA表达水平,降低Bcl-2、生存素蛋白表达,并增加Bax、Caspase-3蛋白表达,促进人颗粒细胞凋亡;miR-34a抑制物转染作用则与之相反;然而,miR-34a模拟物和抑制物转染对Bax、生存素、Caspase-3 的mRNA水平均无明显影响。结论： miR-34a可通过调控凋亡相关的蛋白与基因的表达,促进人颗粒细胞凋亡。     

Survivin基因在甲状腺癌中的表达及意义

目的 研究Survivin基因在甲状腺癌中的表达及意义。方法应用免疫印迹法（Westernblotting）,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测98例甲状腺癌及相应的癌旁组织中Survivin基因的表达,应用原位末端标记法（TUNEL）检测甲状腺癌细胞凋亡指数（A1）。结果甲状腺癌组织表达Survivin蛋白与RT-PCR的结果一致,68．37％的甲状腺癌组织表达Survivin蛋白和mRNA,而癌旁组织内无一例阳性表达。其阳性表达率与病理分型、淋巴结转移、血行转移密切相关。所有甲状腺癌组织标本中均可检测凋亡细胞,Survivin表达阳性组平均AI（0．48±0．38）显著低于阴性组AI（2．984±0．12,P=0．0082）。结论Survivin基因在甲状腺癌组织中异常表达;其表达与分化程度、淋巴结转移、血行转移密切相关;Survivin对凋亡的抑制可能是其参与肿瘤发生、发展、转归的关键因素,Survivin基因将成为甲状腺癌基因治疗的新靶点。     

Survivin反义寡核苷酸对人结肠癌细胞的促凋亡作用

目的:探讨Survivin反义寡核苷酸对大肠癌细胞的促凋亡作用。方法:用脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染LS174T细胞,利用RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;利用Western blot检测Survivin蛋白的表达;检验寡核苷酸作用前后caspase 3活性的变化及细胞凋亡情况。结果:Survivin-ASODN可使大肠癌细胞中survivin mRNA和蛋白的表达下降;caspase-3活性明显增加(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:Survivin反义寡核苷酸可以增强caspase-3的活性,有效诱导大肠癌细胞凋亡,反义核酸技术有可能成为临床大肠癌基因治疗的一种新途径。     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中Survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P＜0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P＜0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P＜0.05,t=7.8146,P＜0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P＜0.05,t=11.3917,P＜0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.     

TRAIL、Survivin mRNA表达与胃癌凋亡发生的相关关系

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和SurvivinmRNA在胃癌中的表达及其与凋亡的相关关系。方法:利用原位杂交技术检测67例胃腺癌及对应的正常胃粘膜中TRAIL和SurvivinmRNA的表达,同时利用原位末端标记技术(TUNEL)检测癌组织中的凋亡指数(AI)。结果:①TRAILmRNA在正常胃粘膜中的阳性表达率高于癌组织中的阳性表达率。②胃癌组织中细胞凋亡指数为1.85+0.66。③TRAILmRNA阳性组与阴性组、SurvivinmRNA阳性组与阴性中凋亡指数分别存在着显著性差异(P<0.05)。④TRAILmRNA和SurvivinmRNA在胃癌中的阳性表达率呈明显的负相关(P<0.05)。⑤TRAILmRNA和SurvivinmRNA与胃癌组织中的患者的年龄、性别、肿瘤直径、部位、大体分型、侵润深度及有无淋巴结转移无明显的关系(P>0.05),与肿瘤的分化程度有关(P<0.05)。结论:TRAIL和Survivin在胃癌凋亡过程中起着重要的作用,TRAIL可诱导凋亡,Survivin则抑制凋亡发生。